第8周--质量标准制定.pptx

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,生药学实验,#,1.,进入实验室的同学请换上实验服,2.,请将书包及个人物品放入室外的衣物柜或者实验台下的柜子中,生药学实验课,主讲老师：唐贵华,414B,办公室,生药质量标准,质量标准包括的项目,名称,来源,性状,鉴别,检查,浸出物,注意及贮藏,用法与用量,功能与主治,性味与归经,炮制,含量测定,显微、,理化,、,色谱,、光谱、,DNA,分子标记鉴别及指纹图谱,有效成分,毒性成分,总成分,指标性成分,易损成分,本次实验项目,理化、色谱鉴别、有效成分含量测定,参考文献：,2010,年,中国药典,生药质量标准的制定,实验目的,1.,通过,槐花,总黄酮含量的测定掌握药材质量标准的制定方法和程序,2.,学习黄酮类化合物理化鉴别的常用方法,中文名：槐花 英文名：,Flower of Japanese Pagodatree,Pagodatree Flower Bud,拉丁文名：,Sophora japonica,L.,别名：槐蕊药材基源：为,豆科,植物,槐,的花及,花蕾,。,性味：味苦；性微寒归经：肝；肺；心；大肠经功效：凉血止血；清肝明目主治：肠风便血；痔疮下血；血痢；尿血；血淋；崩漏；吐血；衄血；肝热头痛；目赤肿痛；痈肿疮疡用法用量：内服：煎汤，,5-10g,；或入丸、散。外用：适量，煎水熏洗；或研末撒。生态环境：多栽培于屋边、路边。资源分布：中国大部分地区普遍种植。,槐 花,茎：,落叶乔木；树皮灰褐色，具纵裂。,叶：,羽状复叶，互生；托叶早落；小叶卵状长圆形，先端渐尖具细突尖，基部宽楔形。,花：,圆锥花序顶生；萼钟状，,5,浅裂；花冠蝶形，乳白色；雄蕊,10,，分离，不等长；子房筒状。,果：,荚果，串珠状，果皮肉质，不开裂，种子间缢缩不明显，具种子,1-6,粒。,种子：,卵圆形，淡黄色。,原植物形态特征,化学成分,三萜苷类：赤豆皂苷,、,、,，大豆皂苷,I,、,，槐花皂苷,、,、,。,黄酮类：,芸香苷（芦丁,Rutin,）,，槲皮素，异鼠李素，异鼠李素,-3-,芸香糖甙，山奈酚,-3-,芸香糖甙。,油脂类：月桂酸，十二碳烯酸，肉豆蔻酸，十四碳烯酸，十四碳二烯酸，棕榈酸，十六碳烯酸，硬脂酸，十八碳二烯酸，十八碳三烯酸，花生酸等。,槐花中的芦丁在酸或酶的作用下可水解为斛皮素（,Quercetin,）,2010,版中国药典规定，按干燥品计算槐花中芦丁的含量不得少于,6.0%,，槐米不得少于,15.0%,采收炮制,槐花的采收与储藏夏季花蕾形成时采收，及时干燥，除去枝、梗和杂质。亦可在花开放时，在树下铺布、席等，将花打落，收集晒干。,炮制方法槐花：除去杂质及灰屑。炒槐花：取净槐花，照清炒法炒至表面深黄色。槐花炭：将净槐花入锅内，炒至焦黑色，存性，略喷清水，取出晾干。,药理作用,维生素,P,样作用,抗病毒作用：,祛痰、止咳等作用：其它作用：,槐花多皱缩而卷曲，花瓣多散落。完整者花萼钟状，黄绿色，先端,5,浅裂；花瓣,5,，黄色或黄白色，,1,片较大，近圆形，先端微凹，其余,4,片长圆形；,雄蕊,10,，其中,9,个基部联合，,花丝,细长；,雌蕊,圆柱形，弯曲。以个大、紧缩、色黄绿、无梗叶者为佳。槐米呈卵形或椭圆形，长,2-6mm,，直径,2-3mm,。,花萼,下部有数条纵纹。萼的上方为黄白色未开放的花瓣。花梗细小。体轻，气微，味微苦涩。,性状鉴别,选做项目,粉末特征,黄绿色。,花粉粒,类球形或钝三角形，直径球形或钝三角形，直径,14-22m,，具,3,个萌发孔。非腺毛,l-6,细胞，长,64-709m,，直径,7-23m,，壁厚,9m,，具不规则角质螺纹，有的可见微小疣状突起。萼片,表皮细胞,表面观多角形，可见非腺毛及毛脱落痕迹；气孔不定式，副卫细胞,4-8,个。此外，可见,花冠,表皮细胞、花粉囊内壁细胞及,草酸钙,方晶。,显微鉴别,选做项目,盐酸,-,镁粉反应,(,黄酮类,),理化鉴别,黄酮醇（,3-,羟基黄酮）骨架,黄酮骨架,显色反应,多数黄酮、黄酮醇、二氢黄酮及二氢黄酮醇类化合物显橙红至紫红色。黄酮类化合物的颜色反应多与分子中的酚羟基及,-,吡喃酮环有关,适用于黄酮类化合物的初步判断。,必做项目,理化鉴别,盐酸镁粉反应,主要试剂与仪器：圆底烧瓶、漏斗、移液管、量筒、恒温水浴锅、乙醇、水、镁粉、滤纸、棉花等。,实验流程,槐花粉末,(0.2 g),乙醇,(5 mL),水浴加热,5-10 min,过滤,建议用棉花,镁粉,(,少许,),滤液,(,取,2 mL),混匀,盐酸,(,数滴,),观察,颜色变化,必做项目,色谱鉴别,薄层层析,必做项目,主要试剂与仪器：槐花的乙醇提取液、芦丁对照品液、乙酸乙酯、甲酸、水、三氯化铝试液、移液管、量筒、紫外分析仪、层析缸、硅胶,G,板,(3 10 cm),等。,芦丁对照品液,槐花乙醇提取液,A,B,点样,A,B,喷显色剂,显色剂,三氯化铝试液,A,B,A,B,展板,溶剂前沿,展开剂,乙酸乙酯,-,甲酸,-,水,(8:1:1),放入加有展开剂的层析缸,取出吹干,挥干,检视紫外,紫外灯,365 nm,A,B,实验流程,标记荧光斑点,提取物名称,标准品名称,TLC,结果表达,记录,TLC,图、展开剂条件,计算比移值,(R,f,),结论,色谱鉴别,薄层层析,比移值定义公式,必做项目,总黄酮的提取原理,：槐花主要药效成分为芸香苷，含量高，其在热水、热醇溶解度大，本次用甲醇加热回流提取。,实验项目：,制备供试样品溶液；制订标准曲线；测定供试品总黄酮含量。,试剂：芦丁对照品，甲醇，乙醚，蒸馏水，,5%,NaNO,2,溶液，,5%NaOH,溶液，,10%Al(NO,3,),3,溶液,器材：天平，恒温水浴锅，紫外分析仪，,500,mL,圆底烧瓶，冷凝管，漏斗，移液管，,100,mL,量筒，,100,mL,容量瓶，锥形瓶，,25,mL,容量瓶，胶头滴管。,含量测定,-,总黄酮,必做项目,含量测定,-,总黄酮,必做项目,制备供试样品溶液流程,槐花粉末,(1 g,精密称定,),加热回流提取,15-20 min,乙醚,(100 mL),冷却后弃,乙醚液,加入甲醇,(90 mL),加热回流提取,50-60 min,过滤,定容,容量瓶,(100 mL),转移滤液，用少量甲醇洗涤烧杯并一同并入量瓶，加,甲醇,定容至刻度,精密量取,10 mL,定容,容量瓶,(100 mL),加入,水,定容至刻度,供试样品溶液,备用,容量,500 mL,每排实验台抽调一位同学负责此项实验内容！,含量测定,-,总黄酮,必做项目,制订标准曲线流程,制备对照品溶液,精密量取,10 mL,冷却,定容,容量瓶,(100 mL),加入,水,定容至刻度,芦丁对照品,(50.00 mg),加甲醇适量,水浴热溶,转移，加,甲醇,定容至刻度,定容,容量瓶,(25 mL),芦丁标准溶液,(0.2 mg/mL),芦丁标准溶液已配好，同学们根据后续实验的需要自行取用！,含量测定,-,总黄酮,必做项目,制订标准曲线流程,制订标准曲线,芦丁标准溶液,精密量取,0.0,1.0,2.0,3.0,4.0,5.0,6.0 mL,各加,水,至,6 mL,容量瓶,(25 mL),7,加,5%,亚硝酸钠,溶液,1 mL,混匀,静置,6 min,容量瓶,(25 mL),加,10%,硝酸铝,溶液,1,mL,混匀,静置,6 min,容量瓶,(25 mL),加,5%,氢氧化钠,溶液,10,mL,加,水,定容至刻度,混匀,静置,15 min,容量瓶,(25 mL),500 nm,处测定吸光度,紫外分光光度仪,绘制标准曲线,以吸光度为纵坐标浓度为横坐标,含量测定,-,总黄酮,必做项目,测定供试品总黄酮含量,供试品溶液,精密量取,3.0 mL,加,水,至,6 mL,容量瓶,(25 mL),加,5%,亚硝酸钠,溶液,1 mL,混匀,静置,6 min,容量瓶,(25 mL),加,10%,硝酸铝,溶液,1,mL,混匀,静置,6 min,容量瓶,(25 mL),加,5%,氢氧化钠,溶液,10,mL,加,水,定容至刻度,混匀,静置,15 min,容量瓶,(25 mL),500 nm,处测定吸光度,紫外分光光度仪,从标准曲线上读出供试品溶液中含总黄酮的量,用,NaNO,2,-Al(NO,3,),3,-NaOH,体系分光光度法测定总黄酮含量时，必须严格保证稀释定容用甲醇的浓度、各试剂加入时间、显色时间等测试环节前后保持一致，否则会出现较大误差。,注意事项,作 业,1.,做出标准曲线，并计算槐花中总黄酮含量。,2.,拟起草槐花的质量标准。,3.,按课程进度表预习下一堂课的内容。,(,黄芪、甘草、黄柏、沉香、人参、当归、柴胡,、,苦参、葛根、番泻叶、鸡血藤、决明子、吴茱萸、枳实、乳香、没药、巴豆、酸枣仁、丁香,等,),