第二章基因工程与食品产业.ppt

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基因工程概述,一、基因工程的概念,1.,基因工程：是用人工方法把不同生物的遗传物质分离出来，在体外进行剪切、拼接、重组，形成基因重组体，然后转入宿主细胞或个体中高效表达，最终获得所需要的基因产物。,转基因操作的基本原理示意图,通过体外,DNA,重组和转基因等技术将外源基因导入受体细胞，有目的地改造生物，短时内创造出更完善的新的生物类型。,广义,上指产业化设计与应用，包括上、下游技术两大部分，倾向于工程学范畴。,优点,：打破了常规的物种间界限（原核与真核生物之间、动植物之间、甚至人与其他生物之间），使遗传信息进行重组和转移。,基因工程含义,食品基因工程：指利用基因工程的技术和手段，在分子水平上定向重组遗传物质，以改良食品的品质和形状，提高食品的营养价值、贮藏加工性状以及感官性状的技术。,2.,基因工程的主要内容：,分,4,步：,（,1,）在供体细胞中用限制性内切酶切割基因，以分离出含特定的基因片段或人工合成目的基因，并制备载体（质粒或噬菌体）。,（,2,）把获得的目的基因与制备好的载体用,DNA,连接酶连接成重组体。,（,3,）把重组体导入宿主细胞。,（,4,）筛选、鉴定出含有外源目的基因的菌体或个体。,基因有共同的物质基础：,有遗传功能的特定核酸序列,：,DNA,片段或,RNA,。,基因可切割：,存在间隔序列（重叠序列的基因也可切出）。,基因可转移：,可在染色体,DNA,或不同染色体之间转移，,基因组也可重组。,3.,基因工程理论依据,多肽与基因之间存在对应关系。,一种多肽对应一种基因。根据表达产物的性质可检查基因的转移或重组。,遗传密码通用。,三联密码子（少数除外）与氨,基酸相对应，所有生物都相同,，只要具备转录翻译,条件均能转译出原样的氨基酸。,基因可复制传递遗传信息。,重组基因可,传代，获得相对稳定的转基因生物。,三、,基因工程的基本技术路线,二、,基因工程研究发展史,1.,准备阶段,1944,年美国,Avery,等细菌转化证明,DNA,是基因载体。,1953,年,Watson,和,CrickDNA,双螺旋模型。,1958,1971,年先后确立中心法则,破译,64,种密码子，揭示了遗传信息的流向和表达。,20,世纪,60,年代末,70,年代初：发现限制性核酸内切酶和,DNA,连接酶，实现,DNA,体外切割和连接。,1972,年首次构建出重组,DNA,分子。,What is the gene?Basic property,Replication,复制,Expression,表达,Mutation,变异,DNA Double Helix model,1952,J.Watson and F.Crick,磷酸与脱氧核糖彼此通过,3,、,5-,磷酸二酯键相连接，构成,DNA,分子的骨架。,磷酸与脱氧核糖在双螺旋外侧，嘌呤与嘧啶碱位于双螺旋的内侧。,2.,基因工程问世,1973,年首次完成重组质粒,DNA,对大肠杆菌的转化，证实真核基因可转移到原核生物细胞并表达。,3.,基因工程的迅速发展阶段。,构建了多种供转化原核生物和动、植物细胞的载体，获得了大量转基因菌株。,1980,年：,显微注射,培育出第一个转基因动物,转基因小鼠。,1983,年：,农杆菌介导,培育出第一例转基因植物,转基因烟草。,21,世纪初是基因工程应用研究的鼎盛时期，医、农、牧、渔的等产品都会使用基因工程技术。,第二节 工具酶和基因载体,DNA,重组技术中对核酸的“精雕细刻”主要用酶作为工具。分子生物学研究过程中发现的酶，许多都用作工具，限制性核酸内切酶在重组,DNA,技术中有重要地位。,（一）限制性核酸内切酶,核酸酶可分为两类：,核酸外切酶：是从核酸的一端开始，一个接一个把核苷酸水解下来；,核酸内切酶：则从核酸链中间水解,3,，,5,磷酸二酯键，将核酸链切断。,一、基因工程的工具酶,一把特殊的剪刀,限制性内切酶的发现,阿尔伯,(Arber),、史密斯,(Smith),和内森斯,(Nathans),，获,1978,年诺贝尔生理学和医学奖,1.,限制性内切酶的发现,1962,年，因为细菌中含有特异的,核酸内切酶,，能识别特定的核酸序列而将核酸切断；同时又伴随有特定的,核酸修饰酶,，最常见的是甲基化酶，能使自身核酸特定序列上的碱基甲基化，从而避免受内切酶水解，外来核酸没有这种特异的甲基化修饰，就会被细胞的核酸酶所水解。这样细胞就构成了限制,修饰体系，其功能就是保护自身的,DNA,，分解外来的,DNA,。,DNA,被限制酶切断后有两个反向互补的,“,黏性末端,”,。被同一种限制切断的几个,DNA,具有相同的,黏性末端,，能够通过互补进行配对。,2.,限制性核酸内切酶的命名,按酶的来源的属、种名而定，,取属名的第一个字母与种名的头两个字母组成的三个字母作略语表示；如有株名，再加上一个字母，其后再按发现的先后写上罗马数字。,例如：,1.,EcoR,是从大肠杆菌的,R,株中分离出来。,2.,从流感嗜血杆菌,d,株（,Haemophilus,influenzae,d,）中先后分离到,3,种限制酶，则分别命名为,Hind,、,Hind,和,Hind,。,限制性核酸内切酶,命名规则：,生物体属名的第一大写字母和种名前两个小写构成基本名称,基本名称,+,菌株名的字母,+,罗马字母,（发现顺序）,Hind III,Haemophilus,infuenzae,d,株中的第三个酶,EcoR,I,基因位于,Escherichia coli,抗药性,R,质粒上,E co R I,细菌属名 细菌种名种 菌株类型 有几种限制酶,3.,限制性核酸内切酶的分类,（,1,）,型限制性核酸内切酶,兼具有修饰酶活性和依赖于,ATP,的限制性内切酶活性，它能识别和结合于特定的,DNA,序列位点，随机切断在识别位点以外的,DNA,序列。这类酶的作用需要,Mg,2+,，腺苷甲硫氨酸及,ATP,。此酶是多聚体。,有,Eco,B,和,Eco,K,两种，具有催化限制性切割和修饰核苷酸,2,种功能。,（,2,）,类限制性核酸内切酶,能识别特异序列，在特异位点水解双链,DNA,中每一条链上的磷酸二酯键。酶促反应除,Mg,2+,外，也需要,ATP,供给能量。,（,3,）,类限制性核酸内切酶,只由一条肽链构成，仅需,Mg,2+,，切割,DNA,特异性最强，且就在识别位点范围内切断,DNA,。,通常在重组,DNA,技术提到的限制性核酸内切酶主要指,类酶而言,。,型酶：在遗传工程中应用最广泛。,有特异识别和切割的序列部位，被切割的,DNA,分子形成单链的断裂；,断裂的部位通常具有粘性末端，使其能够重新连接；,内切酶的切割和修饰功能由两个不同的酶催化所完成。,共同的特性：,只切割双链,DNA,分子，不切单链,DNA,；,每种酶有其特定的核苷酸序列识别特异性；,需要镁离子激活等。,大部分限制性核酸内切酶识别,DNA,序列具有回文结构特征，切断的双链,DNA,都产生,5,磷酸基和,3,羟基末端。不同限制性核酸内切酶识别和切割的特异性不同。,产生,3,突出粘性末端,:,EcoR,：,产生,5,突出的粘性末端：,Pst,：,产生平末端,:,Nru,限制性核酸内切酶的作用,限制性内切酶,EcoR,对,DNA,分子的切割,a),Cohesive end RE,-GAATTC-,-CTTAAG-,EcoR,I,Escharichia,coli Ry13,first,-G AATTC-,-CTTAA G-,工具酶,限制性内切酶,限制性核酸内切酶名称,识别序列和切割点,BamH,Cla,EcoR,Hind,Hind,Kpn,Not,Pst,Sal,Sau3A,Sfi,Sma,Xba,Xho,G,GATCC,AT,CGAT,G,AATTC,A,AGCTT,GTPy,PuAC,GGTAC,C,GC,GGCCGC,CTGCA,G,G,TCGAC,GATC,GGCCNNNN,NGGCC,CCC,GGG,T,CTAGA,C,TCGAG,（二）,DNA,连接酶,将两段,DNA,拼接起来的酶。,特点：能催化,DNA,相邻的,5,磷酸基和,3,羟基末端之间形成磷酸二酯键，将单链缺口封合。,如：,T,4,DNA,连接酶，大肠杆菌连接酶,。,（三）,DNA,聚合酶,1.,大肠杆菌,DNA,聚合酶,有,5 3DNA,聚合酶活性，也有,3 5,外切核酸酶活性。,2.T,4,噬菌体,DNA,聚合酶,3.,耐热,DNA,聚合酶（,Taq,）,用于：（,1,）,DNA,测序；（,2,）,PCR,对,DNA,片断进行体外扩增。,（四）,反转录酶,（,reverse transcriptase,）,反转录酶是一类以,RNA,为模板来指导,DNA,合成的,DNA,聚合酶，所以又称为依赖于,RNA,的,DNA,聚合酶。,反转录酶在遗传工程中的主要用途是以,mRNA,为模板合成,cDNA,。,酶,主要用途,限制性核酸内切酶,识别,DNA,特定序列，切断,DNA,链,DNA,聚合酶,或其大片段,缺口平移制作标记,DNA,探针合成,cDNA,的第二链,填补双链,DNA3,凹端,DNA,序列分析,耐热,DNA,聚合酶（,Taq,DNA,聚合酶等）,聚合酶链反应（,PCR,）,DNA,连接酶,连接两个,DNA,分子或片段,多核苷酸激酶,催化多核苷酸,5,羟基末端磷酸化，制备末端标记探针,末端转移酶,在,3,末端加入同质多聚物尾,DNA,端酶,降解,DNA,，在双链,DNA,上产生随机切口,RNA,酶,A,降解除,RNA,磷酸酶,切除核酸末端磷酸基,二、基因工程载体,定义：是指能有效地运载外源,DNA,片段进入受体细胞内的可自主复制的,DNA,片段。即载体和外源,DNA,在体外组成重组,DNA,分子，进入受体细胞后能进行自我复制。,载体决定了外源基因的复制、扩增、传代乃至表达。,基因工程载体一般需具有以下特点,:,在宿主细胞中能够独立自主地复制；,容易从宿主细胞中分离纯化；,载体,DNA,分子中有一段非必需区域，插在该区域的外源基因可以像载体的正常组分一样进行复制和扩增；,具有灵活的克隆位点和方便的筛选标记,具有很强的启动子、阻遏子和终止子。,基因工程中常用的载体主要有：,质粒（,plasmid,）载体,;,噬菌体载体；病毒载体；上述载体相互组合或与其他基因组,DNA,组合成的载体。,这些载体可分为,克隆载体,和,表达载体,，其中表达载体又分,胞内表达,和,分泌表达,两种。根据载体进入的受体细胞不同，又分为原核细胞和真核细胞表达载体。,在基因工程操作中，根据运载的目的,DNA,片段大小和宿主需要选用合适的载体。,（一）质粒,(plasmid),载体,质粒是常用的克隆载体，广泛存在于包括细菌、酵母在内的多种微生物中，在宿主细胞的染色体外以稳定的方式遗传。它是一种双链环状的,DNA,分子。独立地自我复制及转录。,质粒,质粒,(plasmid),是细菌染色体外存在的一种能够自我复制的双链闭合环状,DNA,分子，大小,1kb,200kb,。,质粒常常带有一些特殊的基因，如致死基因，抗抗生素的基因等等。,一般质粒都含有一个复制起始区，可独立复制。,质粒,DNA,复制与宿主之间的关系，可分为“严谨型”和“松弛型”。“严谨型”质粒在每个细胞中的拷贝数通常,13,个，而“松弛型”通常在,10,个以上，可高达,200,个拷贝。,一般质粒通过改造后才能用于遗传工程。,分子量小，稳定存在，较高拷贝数；,有遗传标志,;,内切酶位点。,质粒分为多种类型：,F,质粒,R,质粒,降解质粒,作为克隆载体的质粒应具备以下特点,:,1.,质粒载体,pBR322,长度为,4.3kb,，含有氨苄青霉素和四环素的抗性基因,(,Amp,r,和,Tet,r,),。在氨苄青霉素和四环素的抗性基因中间有限制性内切酶位点，便于外源基因的插入和筛选,。,有一个复制的起始位点，保证只在,E.coli,中复制。,基因工程载体,质粒载体,酶切图谱示意图,2,质粒载体,pUC19,pUC,系列质粒，全长,2.6kb,，由,pBR322,的氨苄青霉素抗性基因、复制起始位点以及大肠杆菌,lac,Z,基因片段构成，在,lac,Z,基因中加入了多克隆位点，供外源基因的插入，可以进行颜色筛选。,3,酵母质粒载体,4,农杆菌质粒载体,土壤农杆菌,Ti,质粒：通过感染植物的伤口，诱发伤口组织形成冠瘿瘤，同时在瘤内合成冠瘿碱。,Ti,质粒有,4,个区：,T-DNA,转移区,vir,区，毒性区,细菌吸收利用冠瘿碱区,其他区域,农杆菌质粒载体,（二）噬菌体载体,噬菌体是侵染细菌的病毒。,用做克隆载体的噬菌体有两种,:,噬菌体,M13,噬菌体。,噬菌体,是线状双链分子，是温和噬菌体。进入大肠杆菌后即通过粘性末端的碱基配对形成环状分子，也可以整合进入宿主细胞基因组中。,在某种营养条件或环境协迫时进入裂解循环。,噬菌体载体,非必需基因,在基因组中，接近,40%,的区域是非必需的，可以将这部分切除，在此区域插入外源,DNA,片段。,DNA,可以作为载体，通过替换自身序列的方式携带外源,DNA,。,噬菌体的基因组,必需基因,头,尾,第三节 基因工程的基本技术,目的基因的获得与序列分析,目的基因序列与载体的连接，制成,DNA,重组体,将,DNA,重组体导入宿主细胞,目的基因序列克隆的筛选与鉴定,1,从生物体的基因组中分离目的,DNA,序列。包括,DNA,的纯化技术，酶促消化或机械切割，以游离目的,DNA,序列。,2,建立人工的重组,DNA,分子，即将目的基因插入一能在宿主细胞中复制的,DNA,分子，即克隆载体。,3,将重组,DNA,分子转到合适的宿主中，如大肠杆菌。,4,利用细胞培养技术，培养筛选转化的细胞。一个转化的宿主细胞能生长并产生遗传上相同的克隆细胞，每个细胞都携带着转化的目的基因，此技术就是常指的“基因克隆”或“分子克隆”。,目前广泛提取使用的目的基因有：苏云金杆菌抗虫基因、人胰岛素基因、人干扰素基因、种子贮藏蛋白基因、植物抗病基因等。,（一）获得目的基因的方法,目的基因,：,就是人们所需要转移或改造的基因。它含有一种或几种遗传信息的全套密码。,供体生物细胞,取出,DNA,用限制酶剪去多余部分,目的基因,限制酶,1.,鸟枪法,是一种由生物基因组提取目的基因的方法。该法类似于鸟枪发射散弹。,具体操作：用若干个限制酶处理一个,DNA,分子，将它切成若干个,DNA,片段。这些片段的长度相当于或略大于一个基因。然后，将这些不同的,DNA,片段分别与适当的载体结合，形成重组,DNA,，再将它导入到相应的营养缺陷型细菌中。,缺点：专一性较差，有时分离出来的并非一个基因，但由于操作简便，仍然广泛采用。,提取目的基因的方法,例如，要提取维生素,B1,合成酶基因时，就要用维生素,B1,的营养缺陷型细菌,(,它在不含维生素,B1,的培养基上不能生长,),。,把整合了不同,DNA,片段的营养缺陷型细菌分别接种到不含维生素,B1,的培养基上进行培养，只有整合了含有维生素,B1,合成酶基因的,DNA,片段的细菌才能正常生长。最后，把这些细菌中的这段,DNA,分离出来，再进行一系列的操作，就可以获得维生素,B1,合成酶基因。,用限制酶切断成许多片段,直接分离基因,鸟枪法,将供体生物的,DNA,用限制酶切割为许多片段，再用运载体将这些片段都运载到受体生物的不同细胞中去。只要有一个细胞获得了需要的目的基因并得以表达，基因工程就算成功了。,2,物理化学法,该法利用核酸,DNA,双螺旋之间存在的,GC,配对，,AT,配对这一特性，从基因组中分离目的基因的方法。,如：密度梯度离心法，分子杂交法等。,3.,根据已知的氨基酸序列合成,DNA,该方法是建立在,DNA,序列分析基础上的。当已知一个基因的核苷酸序列，可以按图纸先合成一个个含少量（,10,15,个）核苷酸的,DNA,片段，再利用碱基对互补的关系形成双链片段，然后用连接酶把双链片段逐个按顺序连接起来，使双链逐渐加长，最后得到一个完整的基因。,这种方法专一性最强，用计算机自动控制的,DNA,合成仪，进行基因合成，使基因合成的效率大大提高。,4.,反转录法,首先把含有目的基因的,mRNA,的多聚核糖体提取出来，分离出,mRNA,，然后以,mRNA,为模板，用反转录酶合成一个互补的,DNA,，即,cDNA,单链，再以此单链为模板合成出互补链，就成为双链,DNA,分子。,这种方法专一性强，但操作过程比较麻烦，,mRNA,很不稳定、生存时间短，所以要求的技术条件较高。,5.PCR,扩增法（聚合酶链式反应）,1985,年，美国一公司开发的专利技术。能简便、快速地在体外对特定的,DNA,进行扩增。,1993,年，获得诺贝尔化学奖。,PCR,技术给分子生物领域带来一场变革。,（,1,）与目的基因的,DNA,双链两端互补的,DNA,引物。,（,2,）热稳定性的酶，如,Taq,DNA,聚合酶。,（,3,）,dNTP,。,（,4,）模板的,DNA,序列。,（,5,）,buffer,。,PCR,的反应体系包括：,PCR,反应的过程,（,1,）,变性,。模板,95,，双链,DNA,单链,DNA,。,（,2,）,退火,。温度降至,55,，使一对引物能分别与变性后的两条模板链配对。,（,3,）,延伸,。升温至,Taq,酶作用的最适温度,72,，以目的基因为模板，合成新的,DNA,链。,如此反复循环至,30,个循环左右，即可扩增得到目的,DNA,序列。,PCR,法,PCR,法,（二）,DNA,序列测定,DNA,序列分析：指对一段,DNA,分子或片段的核苷酸排列顺序测定，即测定组成,DNA,分子的,ATGC,排列顺序。,1977,年，,F.Sanger,发明双脱氧序列分析法（末端终止法）。,双脱氧末端终止法,DNA,序列分析的原理,如果在反应物中加入一定量的某一种,2,3-,双脱氧核苷酸,例如,ddTTP,，就会在应当掺入,dT,的位置掺入,ddT,。,由于,ddT,核苷酸的,3,碳原子不含有羟基而不能和下一个核苷酸的,5,碳原子上的磷酸根结合形成磷酸二脂键,，所以,DNA,链就不能继续向后延伸。,Sanger,据上述原理设计了,DNA,测序的末端终止法。测序时要进行,4,个独立的反应，每个反应中有一种,dNTP,用,32P,标记，并且在,4,个反应中分别加入一定比例的,ddATP,ddTTP,ddGTP,和,ddCTP,。,反应一段时间后，每个反应中都会生成一系列由对应的那种,ddNTP,结尾的长短不一的,DNA,片段，而且这些片段的,5,端序列是相同的。最后，将反应物变性后用电泳分离，经放射自显影后就可以读出,DNA,的碱基顺序。,二、目的基因与载体的连接,用与提取目的基因相同的限制酶切割质粒使之出现一个切口，将目的基因插入切口处，让目的基因的黏性末端与切口上的黏性末端互补配对后，在连拉酶的作用下连接形成重组,DNA,分子。,三、重组,DNA,向受体的转化,要让目的基因表达，必须将它导入受体细胞并进行扩增。为获得目的基因的表达产物时，通常以大肠杆菌等无害易得的细菌为受体。为改进某种生物时，将欲改进的生物细胞为受体。,导入,扩增,重组,DNA,向受体细胞的导入方法有,：,转化,：将重组质粒导入受体细胞，使受体菌的遗传性状发生改变。,转染,：用携带外源基因的病毒感染受体细胞的方法。,电转化法,：（电穿孔法）对受体细胞进行短暂、高压的电泳脉冲，质膜形成,nm,微孔，,DNA,能直接通过孔，或作为孔闭合时膜组分重新分布而进入细胞质中。,重组质粒,转化法,感受态的出现,转化因子的吸附和渗入,转化因子的整合,1,）重组,DNA,向受体的转化,（,1,）感受态的出现,感受态,：指受体细胞最易接受外源,DNA,片段并实现其转化的一种生理状态。,细菌的感受态只出现在特定的生长条件和生长阶段。,采用人工的方法诱导,产生,感受态,：把供试的细菌由丰富的培养液转到,贫乏的培养液,中；利用,Ca,2+,；,改变温度,等方法。,（,2,）转化因子的吸附和渗入,转化因子,：是离体的,DNA,片断,。,过程,：,双链,DNA,片段与感受态受体菌细胞表面的,DNA,结合位点结合；在吸附位点上的,DNA,被核酸内切酶分解，形成小片段；在另一核酸酶作用下，把双链解开，推动另一条链进入细胞。,（,3,）,转化因子的整合,来自供体菌的,DNA,片段与受体菌核染色体上同源区段配对、重组，形成一小段杂合,DNA,，受体菌染色体复制，杂合区也跟着复制。,2,）转染法,功能：培养细胞，培养器官，培养组织，活体组织的电转化。,精确的低电压控制：数字式操作面板，提高脆弱受体细胞生存率和转化效率。每次脉冲自动检测脉冲电流，确保输出电流的准确性。,电转化仪,3.,基因枪法：将,DNA,吸附在微型子弹表面，通过放电或机械加速，使子弹射入完整的细胞或组织内。,4,显微注射法,直接注射入细胞质或细胞核内,显微注射法,利用显微操纵器，将,DNA,直接注射到细胞核中。,5.,脂质体导入法：,脂质体：是由脂质双分子层组成的环形封闭囊泡，无毒，无免疫原性。,原理：需将,DNA,或,RNA,包囊于脂质体内，然后进行脂质体与细胞膜的融合，通过融合导入细胞。,在水中，磷脂分子亲水头部插入水中，疏水尾部伸向空中，搅动后形成双层脂分子的球形脂质体。,阳离子脂质体表面带正电荷，能与核酸的磷酸根通过静电作用将,DNA,分子包裹，形成,DNA,脂复合体，也能被表面带负电荷的细胞膜吸附，再通过膜的融合或细胞的内吞作用，将,DNA,传递进入细胞,。,三、重组体的筛选与外源基因的鉴定,重组体的筛选,在植物基因工程中，转化细胞的筛选常采用抗生素抗性基因或抗除草剂基因的选择法。,2.,重组体的鉴定,这是一种快速简易的方法区分 转基因,/,非转基因生物。,（,1,）报告基因的检测法,定义：在构建目的基因时,将一种报告基因,（如,GUS,基因）,构建在一起,，当目的基因转化受体细胞时，报告基因一同被转入。这种报告基因是受体本身不存在的，有易于检验的表型。,GUS,基因：即,葡萄糖苷酶基因,该酶能降解葡萄糖苷键，反应后根据分光光度计法、荧光分析法等测定。,质粒图谱及质粒构建,启动子 外源基因 终止子 启动子 报告基因 终止子,（标记基因）,目的片段 选择标记,载体,报告基因的种类,新霉素磷酸转移酶（,Neomycine,phosphotransferase,II,NPT II),基因,氯霉素乙酰基转移酶（,Chloraphenicol,acetyltransferase,CAT,）基因,潮霉素磷酸转移酶（,Hygromycin,phosphotransferase,Hpt,）基因,葡萄糖酸苷酶,（,Glucuronidase,GUS,）基因,荧光素酶（,Luceferase,Luc,）基因,抗除草剂（,Basta,Bar,）基因,-,半乳糖苷酶报告基因检测试剂盒，是以无色的,ONPG,为底物，在,-,半乳糖苷酶的催化下生成黄色的,onitrophenol,，然后通过酶标仪或分光光度计在,420nm,波长附近测定吸光度，从而实现对,-,半乳糖苷酶活性的测定。,-,半乳糖苷酶报告基因检测试剂盒,产品包装,:200,次 产品价格,:368.00,元,2.,重组体的鉴定,（,2,）目的基因分子杂交检测法,探针与样品进行核酸分子杂交，能进一步证明目的基因的存在，转录及表达程度。,基因探针：是一段与目的基因互补的核酸序列，是,DNA/RNA,。,分子杂交分为：,点杂交,Southern blot,Northern blot,Western blot,