发酵豆粕品质判定.ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,发酵豆粕品质判定,致谢：,本报告内容实际上汇聚了实验人员陈婧、张玲、干霞、乐山恒峰华邦品管人员、国家饲料工程中心等的心血与研究成果。本人并无实际亲自操作。在此申明并致谢！,同时，很多饲料企业交流中也提供了很多值得借鉴的思路与建议，并提供过检测支持等，一并致谢！,报告提纲,豆粕及其发酵处理理由,发酵豆粕介绍,发酵豆粕菌种、工艺、生产,发酵豆粕品质判定,掺假分析,发酵豆粕采购建议及品控量化指标,发酵原料技术应用拓展,豆粕,豆粕是大豆提取豆油后得到的一种副产品,豆粕是棉籽粕、花生粕、菜籽粕等,12,种动植物油粕饲料产品中产量最大，用途最广的一种,豆粕是高蛋白饲料，氨基酸组成和动物蛋白质近似，其中氨基酸比较接近人体需要的比值，所以容易被消化吸收,豆粕中含有丰富的钙、磷、镁、钾等无机盐，还含有铜、铁、锌、碘、钼等微量元素,中国市场,/,行业需求,总体趋势,近,2,年国内饲料企业应用微生物制剂及发酵原料越来越普遍，并能确认其价值；应用范围和使用量逐年递增；养殖场也接受了生物预处理饲料的技术与产品。,客户需求,在乳猪饲料以发酵豆粕取代大豆浓缩蛋白、鱼粉、血浆蛋白、肠膜蛋白、豆粕方面有成熟经验；水产饲料、特种皮毛动物饲料也得到应用。,中国发酵豆粕概况,生产地域：台湾、内蒙（赤峰）、吉林（四平）、辽宁（沈阳）、天津、北京、河南（汝州、周口）山东（青岛德州、日照）、湖北（武汉、汉川、荆州、黄石）、江苏（溧阳、盐城、南通、台州）浙江（杭州、金华）、河北（邯郸）、安徽（蚌埠）、福建（龙岩、漳州）、广东（肇庆、东莞、茂名）、湖南（岳阳）、江西（南昌）、四川（乐山、邛崃）广西（钦州、贵港）等。,主流生产企业：北京金泰德、武汉邦之德、上海源耀、天津全能、福建闽雄、深圳荣华、浙江科峰、乐山恒峰华邦、东莞银华、广东希普、山东根源、山东和实、南昌惠德等。,发酵豆粕解决什么问题？,膨化大豆解决了什么？发酵豆粕重点解决什么？,（尽量）消除抗营养因子（,以抗原蛋白、脲酶活性、胰蛋白酶抑制因子、水苏糖、棉子糖为重点）；,通过发酵尽量增加低分子肽、有机酸等含量；,通过菌种调配及发酵，增强诱食功能，（酸、香）；,具有微生物益生功效，微生态调节功能。,发酵豆粕指标衡量是一个,系统,工程。,豆粕抗营养因子分类,根据对饲料营养价值和动物生物学反应，分为以下,六类,：,降低蛋白质消化率和利用率的因子（胰蛋白酶抑制因子、糜蛋白酶抑制因子等）；,降低碳水化合物消化率因子（单宁和,寡糖,等）；,影响矿物质利用率的因子（植酸）；,影响维生素活性或增加动物维生素需求量的因子（抗维生素,A,、维生素,D,、维生素,E,和维生素,B12,等因子）；,刺激免疫体系的因子（,抗原蛋白,）以及其它一些抗营养因子（致甲状腺肿因子、皂甙、异黄酮和生氰糖甙等）；,饲料中具有毒素作用的因子（植物凝集素）,抗营养因子,9,豆粕抗营养因子的热敏感性,抗原蛋白,（,7s,，,11s,亚基为代表）、胰蛋白酶抑制因子、糜蛋白酶抑制因子、凝集素、脲酶、致甲状腺肿因子及抗维生素因子具有对,湿热,敏感；,皂甙、单宁、异黄酮、,寡糖,、致过敏反应蛋白及植酸等对热较稳定；,热处理对抗原蛋白、蛋白酶抑制因子、凝集素、脲酶等热敏性抗营养因子有很好的钝化效果。但是对豆粕,蛋白溶解度,的影响不容忽视！,一步步认识发酵豆粕？,理论层面的把握（工艺设计、科学检测方法的建立）；,技术层面的把握（基础性,现场控制与一级品控）；,品控层面的把握（把关性,二级品控与法规遵守）；,采购层面的把握（保真,-,性价比）,核心问题：掌握豆粕与发酵豆粕的关键,差别点,，才知道怎么去把握。粗蛋白、水分、灰分、氨基酸等不能让你辨识优劣,。,发酵豆粕之典型问题,品质不稳定；（蛋白溶解度、粗蛋白、电泳、抗原含量、寡糖、,VBN,、灰分存在变数）,小肽（酸溶蛋白）、有机酸含量偏低；,收率偏高（收率与寡糖彻底消除的基本算法）；,烘干设备选型不当，造成成本偏高；,菌种组合不合理、培养活化环节复杂；,工艺流程设计及发酵形式存在问题；,品控问题（检测项目不齐全,-,检验方法简单模仿，基本原理不清楚，被牵着鼻子走，品管检测忌照搬）。,发酵用菌种介绍,形形色色的微生物类群,微生物简介,微生物作为生物的一大类，具有其本身的特点及其独特的生物多样性，可以简要概括成以下几句话：,个体小、结构简、胃口大、食谱广、繁殖快、易培养、数量大、分布广、种类多、级界宽、变异易、抗性强、休眠长、起源早、发现晚。,微生物个体大小简介,微生物的个体极其微小，一般要借助于光学显微镜或电子显微镜才能观察到它们。,例如杆形细菌的宽度只有,0.5,2,m,，长度也只有,1,几个,m,，,1500,个杆菌首尾相连,=,一粒芝麻的长度；,10-100,亿个细菌加起来重量,=1,毫克；面积,/,体积比：人,=1,，大肠杆菌,=30,万；这对于微生物与环境的物质、能量和信息的交换极为有利。,微生物强大的繁殖性能,微生物繁殖速度很快，例如一头,500kg,的食用公牛，,24,小时生产,0.5kg,蛋白质，而同样重量的酵母菌，以糖液（如糖蜜）和氨水为原料，,24,小时可以生产,50T,优质蛋白质。,微生物尤其以二裂法繁殖的细菌具有惊人的繁殖速率。如大肠杆菌,37,时世代时间为,18,分钟，每,24,小时可分裂,80,次，每,24,小时增殖数为,1.2 x 10,24,个。枯草芽孢杆菌,30,时的时代时间为,31,分钟，每,24,小时可分裂,46,次，增殖数为,7.0 x 10,13,个。,微生物极强的耐受力,现在已从近于,100,条件下的温泉中分离到了高温芽孢杆菌，并观察到在,105,时还能生长。甚至有报导，有人从太平洋,25000m,深处分离到的高温菌，在,265atm,和,250,下，经过,40,分钟的培养，细菌数量增加,1,倍，几小时后增加了,100,倍。甚至升温到,300,时仍在生长。,微生物在不良条件下很容易进入休眠状态，某些种类甚至会形成特殊的休眠构造，如芽孢、分生孢子、孢囊等。有些芽孢在休眠了几百年，甚至上千年之后仍有活力。甚至报导过,3 000,4 000,年前埃及金字塔中的木乃尹上至今仍有活的病原菌。,惊人的微生物分布,自然界中微生物存在的数量往往超出一般人们的预料。土壤中细菌可达几亿个,/g,，放线菌孢子可达几千万个,/g,。人体肠道中菌体总数可达,100,万亿左右。新鲜叶子表面可附生,100,多万个,/g,微生物。全世界海洋中微生物的总重量估计达,280,亿吨。,从这些数据资料可见微生物在自然界中数量之巨。实际上我们生活在一个充满着微生物的环境中,。,微生物与饲料工业,有益：,代谢产物的直接利用与延伸（发酵单体氨基酸、发酵类抗生素、维生素、有机酸、生物酶、多糖、色素、生物碱、酶工程衍生产品、饲料原料发酵等）。,微生物的直接利用（微生物制剂、疫苗、饲料及原料发酵等）。,有害：,饲料或原料的病原菌感染、发霉变质、动物疾病、生产环境污染等。,微生物,微生物在饲料工业中的角色,新功能？,微生态 制剂,原料体外预消化,ERG,、,GSH,、,SOD,等,活性肽、防御素、细菌素等,饲用酶 制剂,饲用维生素、,色素等,氨基酸、有机酸、核酸等,原料发酵的微生物常见类群,乳酸菌类,:,非分类学概念。乳酸菌是一类能利用可发酵性糖为原料，并能产生大量乳酸的细菌的通称。乳酸菌,1,小时可分解其体重,1000,至,10000,倍乳糖。,酵母菌类：非分类学概念，在偏酸性且含糖较多的环境中生长的单细胞真核微生物。例如面包酵母、海洋红酵母等。,芽孢杆菌类：能够产生芽孢的细菌。（芽孢则是,某些细菌在其生长发育后期,可在细胞内形成的一个圆形或椭圆形、厚壁、含水量低、抗逆性强的休眠构造,),真菌类：非分类学概念。通常指菌丝体发达而又不产生大型子实体的真菌。例如霉菌类，假丝酵母等。,微生物菌落及显微图片,酵母菌 芽孢菌 乳酸菌,发酵菌种抗逆性分析,芽孢杆菌：形成芽孢后储藏、耐温、耐压等稳定性非常好。枯草、地衣、凝结、巨大、侧孢等。,乳酸菌类：微生物发酵首选菌种。抗逆性和储藏稳定性是最大阻碍。代谢产物的利用。例如：有机酸、抗菌素等。,酵母菌类：耐高渗，耐温差。发酵改善适口性，促消化，代谢产物营养丰富。,微生物营养的特殊性,微生物：与环境进行物质、能量、基因的交换。最高效，适应性最强。,植物：光合作用与根系吸收。,动物：主动摄食，体内转化。,结论：生物级别越高，其营养需求及转化越低效。其生存力更多依赖于智慧、体能。构成食物链与生态系统。,微生物生长曲线示意图,微生物生理代谢阶段及特点,微生物营养代谢分析,微生物的代谢产物名目繁多，从来源上考虑，可区分为初级代谢产物，次级代谢产物和转化产物，三者之间的关系如图所示：,微生物,初级代谢产物（,I,）,（氨基酸、核苷酸、植物多糖、,维生素、有机酸等）,次级代谢物（,）,（抗生素、菌素、植物碱等,）,菌体、诱导型酶（,）,外源物质转化产物（,）,外源物质,（甾体、烷烃、芳烃、,杂化合物）,发酵产品设计要求,微生物选择符合法规，生物安全性保障；,应用的有效性必须保证；,生产实现的难易程度，工艺设计及设备；,合理的利润保证，市场接受程度；,知识产权的保护问题；,需要饲料行业共同推进与认可。,发酵用菌种及原理,分解蛋白（抗原蛋白）的芽孢杆菌类,分解寡糖的乳酸菌（正型乳酸发酵为主）,C,6,H,12,O,6,+2ADP 2CH,3,CHOHCOOH+2ATP,C,6,H,12,O,6,+ADP CH,3,CHOHCOOH+C,2,H,5,OH+CO,2,+ATP,脱除单分子糖及增加适口性的酵母菌,三者协同作用才可以完成发酵使命，并保护蛋白质很少被降解。,乳酸菌发酵类型,从生化机制来看，乳酸发酵分为两大类型：若发酵产物中只有乳酸的（达到,80,以上），称为正型乳酸发酵，如乳酸链球菌（,Strep,tococcus lactis,）、乳酪链球菌（,Streptococcus cre,moris,）、干酪乳杆菌（,Lactobacillus easei,）等。,若发酵产物中除乳酸之外还有乙酸、乙醇、,CO2,、,H2,的，称为异型乳酸发酵。如一些明串珠菌,（,Leuconostoc,）、乳酸杆菌（,Lactobacillus,）。,发酵菌种产生的有机酸、维生素含量分析,小 结,掌握微生物生理特性，驾驭它为我们服务；,所开发的品种应符合法规，生物安全第一；,产品作用应该可以量化，动物营养效果明确；,在动保方面，微生物产品应该有更加广阔的应用，例如母猪泌乳、便秘方面、乳猪肠道驯化、治疗腹泻、环境改良；,原料（三大营养物）的生物预消化，结构脂肪（,pop,）构建、人工乳仿生、营养型抗菌肽等。,发酵豆粕工艺和生产,图示流程,关键设备,原料前处理及设备,发酵装置及设备讨论,混合设备,菌种培养设施及配套,烘干物料的冷却,粉碎,干燥设备,烘干设备是最大制约因素。搅拌式流化床、振动式流化床、管束式烘干机、滚筒干燥机、圆盘干燥机、网带式烘干机、气流干燥机等。,热源：木柴、生物质颗粒、燃煤、蒸汽、电加热辅助、燃油、天然气等。,成本分析和烘干设备选择原则（阐述）,。,生产成本构成,原材料采购,损耗,菌种,烘干,水电能耗、包装、车间转运,运输,管理、折旧、工资、税务等,混合设备,混合接种,自动接种,发酵料槽,发酵料槽,流化床烘干,圆盘干燥,管束干燥,全自动料槽,中纺全自动生产线,示范工厂干燥及打包系统,发酵菌种和工艺控制的实现,通过菌种不同组合及数量控制，可以从小肽含量、总酸、有机酸比例、总酸度、不良糖消除率、收率、蛋白含量等实现精确控制。,菌种与发酵条件、设备的有机组合，实现可控、稳定的品质。,豆粕（,2013,）,厂家,水份,%,粗蛋白,%,PH,值,粗灰分,%,PS%,中纺,12.29,46.70,6.52,6.25,75.67,中纺,12.06,46.05,6.36,6.23,71.60,中纺,11.75,46.25,6.37,6.17,79.46,中纺,11.14,46.07,6.42,6.34,77.30,中纺,11.49,46.31,6.38,6.17,78.23,中纺,11.58,46.07,6.30,6.24,77.79,中纺,12.72,46.31,6.37,6.18,77.20,中纺,12.52,46.30,6.43,6.35,78.42,邦基正大,11.33,46.92,6.35,6.47,74.64,邦基正大,11.38,47.32,6.30,6.26,72.06,邦基正大,11.59,46.55,6.25,6.14,71.45,邦基正大,11.71,46.52,6.31,6.40,74.25,邦基正大,12.03,46.39,6.25,6.46,73.08,邦基正大,11.79,47.03,6.28,5.80,71.57,邦基正大,12.35,46.18,6.26,6.24,73.30,新涪,12.16,46.51,6.23,6.32,80.03,新涪,12.20,46.14,6.26,6.15,73.15,新涪,12.42,46.05,6.36,6.18,70.86,新涪,12.01,46.94,6.34,6.13,71.24,新涪,11.88,46.51,6.35,6.09,73.86,新涪,11.86,46.52,6.45,6.05,78.53,新涪,12.17,46.17,6.45,6.14,74.46,丰苑,12.03,45.58,6.51,5.85,75.34,丰苑,11.73,46.21,6.47,6.11,76.24,丰苑,11.43,46.26,6.44,6.14,75.38,丰苑,13.53,43.64,6.53,5.83,75.44,丰苑,11.76,46.78,6.48,6.12,70.86,丰苑,11.74,46.31,6.45,6.17,80.26,丰苑,11.60,47.47,6.53,6.13,75.92,原料指标波动，带来发酵结果变动,发酵豆粕,水分,%,粗蛋白,%,小肽（,cp,）,%,乳酸,%,pH,值,灰分,%,PS%,9.84,50.14,12.09,3.15,4.86,6.85,73.31,9.47,51.42,12.41,3.15,4.82,6.95,76.66,9.25,50.13,12.05,3.22,4.80,6.60,76.00,8.38,50.49,12.60,3.24,4.80,6.70,74.21,8.77,50.06,12.68,3.23,4.85,6.79,76.65,8.81,50.80,13.56,3.35,4.81,6.94,76.50,9.04,50.23,12.64,3.21,4.82,6.69,75.27,7.85,50.39,13.10,3.23,4.81,6.56,70.22,7.68,50.79,12.96,3.03,4.94,6.58,75.80,9.22,50.02,13.17,3.06,4.95,6.74,78.35,8.25,50.14,13.66,3.19,4.92,6.68,77.68,8.70,50.03,13.53,3.22,4.92,6.88,75.33,7.76,50.41,12.40,3.38,4.79,6.57,73.24,8.24,51.79,12.28,3.32,4.79,6.61,70.50,9.06,51.07,12.57,3.03,4.96,6.88,72.41,8.91,50.46,13.28,3.22,4.83,6.70,74.55,8.25,50.14,13.66,3.19,4.92,6.68,77.68,8.70,50.03,13.53,3.22,4.86,6.88,72.12,7.63,50.37,16.66,3.30,4.77,6.35,71.49,8.10,50.37,16.93,3.39,4.79,6.39,70.97,7.94,50.92,17.30,3.28,4.88,6.27,74.29,8.90,50.53,17.55,3.30,4.83,6.37,75.16,8.30,50.38,17.76,3.33,4.82,6.49,79.00,9.29,50.54,17.06,3.14,4.90,6.52,70.64,9.11,50.48,17.47,3.24,4.82,6.28,71.55,9.42,50.54,17.08,3.14,4.87,6.39,72.54,9.57,50.51,17.22,3.29,4.87,6.48,72.34,国内某厂产品批次化验结果实例,发酵豆粕铬含量检测结果,检测机关,四川出入境检验检疫局 检验检疫技术中心,检测时间,2012,年,9,月,20,日,样品名称,检测项目,检测 方法,结果数据,单位,检测低限,XHX,菌种,铬,DB53/T288-2009,1.9,mg/kg,0.1,豆粕,铬,DB53/T288-2009,0.4,mg/kg,0.1,发酵豆粕,1,铬,DB53/T288-2009,0.2,mg/kg,0.1,发酵豆粕,2,铬,DB53/T288-2009,0.3,mg/kg,0.1,发酵豆粕沙门氏菌检测结果,检测机构,国家粮食局成都粮油食品饲料质量监督检验测试中心,检测时间,2012,年,9,月,21,日,样品名称,检测项目,检验依据,检测结果,发酵豆粕,1,沙门氏菌,GB/T13091-2002,未检出,发酵豆粕,2,沙门氏菌,GB/T13091-2002,未检出,赖氨酸,Lysine 3.48%,异亮氨酸,Lsoleucine 2.36%,蛋氨酸,Methionine 0.54%,苯丙氨酸,Phenylalanine 2.80%,胱氨酸,Cystine 0.81%,色氨酸,Tryptophan 0.81%,苏氨酸,Threonine 2.19%,缬氨酸,Valine 2.46%,亮氨酸,Leucine 4.15%,组氨酸,Histidine 1.36%,精氨酸,Arginine 3.90%,甘氨酸,Glycine 2.51%,丙氨酸,Alanine 2.46%,脯氨酸,Proline 1.59%,天门冬氨酸,Asparagic 6.74%,谷氨酸,Glutamic 9.80%,丝氨酸,Serine 2.76%,酪氨酸,Tyrosine 1.80%,发酵豆粕氨基酸含量分析,发酵均匀度的判定分析（,模拟添加实验,）,发酵池不同位置取样检测,样品名称,10,水份,CP,小肽,%,10,水份总酸,PH,值,VBN,14050701,28h,中上,49.76,10.45,2.60,5.06,70.89,中中,50.21,9.88,2.46,5.11,40.91,中下,50.98,9.83,2.53,5.15,48.62,边上,51.00,10.31,2.45,5.07,43.46,边中,50.41,10.82,2.44,5.04,53.67,边下,50.80,10.36,2.69,5.07,43.41,52h,中上,51.94,12.24,2.96,5.00,90.94,中中,50.69,10.96,2.73,5.02,50.23,中下,50.89,11.20,2.60,5.04,72.70,边上,51.07,12.92,3.15,4.90,76.37,边中,51.24,12.13,2.83,5.02,76.92,76h,中上,51.79,14.50,3.02,4.98,89.77,中中,50.71,15.26,3.08,4.92,57.14,中下,50.83,13.97,3.10,4.91,63.89,边上,51.10,12.39,3.30,4.84,83.65,边中,50.95,14.18,3.03,4.99,55.20,边下,50.87,13.36,3.23,4.91,56.75,14050801,28h,中上,49.85,10.10,2.46,5.04,76.74,中中,50.01,9.37,2.58,5.04,90.67,中下,49.99,9.62,2.53,5.08,92.33,边上,49.55,9.55,2.21,5.15,50.82,边中,50.07,10.49,2.13,5.33,50.59,边下,50.61,9.50,2.05,5.38,60.20,52h,中上,50.72,12.29,3.01,4.94,59.49,中中,50.87,12.54,2.79,5.03,50.43,中下,50.93,11.60,2.59,5.11,66.64,边上,49.29,9.65,2.12,5.28,52.82,边中,49.50,12.46,2.67,5.07,49.15,边下,50.56,13.38,2.79,5.05,70.15,76h,中上,51.57,13.88,3.07,4.99,70.25,中中,50.82,12.01,3.12,4.88,87.01,中下,51.55,13.03,2.80,5.00,62.65,边上,50.84,11.86,2.97,4.99,50.24,边中,50.89,12.22,2.98,4.99,56.60,边下,51.04,13.84,3.45,4.82,69.90,14050901,28h,中上,49.07,9.65,2.59,5.16,99.97,中中,50.94,9.82,2.22,5.32,43.02,中下,49.53,9.86,2.56,5.16,43.11,边上,50.29,9.37,2.17,5.20,79.79,边中,50.39,9.32,2.75,5.10,92.69,边下,50.48,8.51,2.46,5.17,46.10,52h,中上,50.69,12.81,2.75,5.02,87.99,中中,50.59,12.51,2.74,5.05,79.12,中下,50.76,12.12,2.62,5.02,74.01,边上,50.78,14.86,2.91,5.00,79.43,边中,50.24,11.98,2.85,5.01,59.25,边下,50.77,11.56,3.24,4.74,53.03,76h,中上,50.48,15.32,2.73,5.00,79.85,中中,50.45,15.79,2.98,4.99,60.29,中下,50.88,14.62,2.95,4.98,89.40,边上,50.35,13.64,3.02,4.94,53.08,边中,50.15,12.95,3.16,4.96,60.79,边下,50.91,13.33,3.04,4.98,89.19,发酵豆粕品质判定,关于发酵指标的讨论,蛋白溶解度,影响抗原蛋白检测的猫腻,收率、寡糖脱除、蛋白水平,VBN,（正确认识与评价）,发酵豆粕同类产品的差异性,蛋白溶解度（,ps,）,检测蛋白溶解度的意义,能使蛋白溶解度改变的因素,1,、酸含量？,2,、,pH,值？,3,、压力？,4,、烘干温度？（干、湿热）,豆粕,和,发酵豆粕,蛋白溶解度检测,检测蛋白溶解度的意义,高温能破坏大豆中所含的数种抗营养物质，但也会使还原性碳水化合物，如葡萄糖与赖氨酸的,epsi1on,游离氨基酸起作用，即美拉德反应（,Mail1ard Reaction,）。其结果使赖氨酸分子不能被利用，蛋白质分子中的其它氨基酸也受热过度的影响，因而使蛋白质的消化率降低。,Araba,和,Dale,在,1990,年发表的文章中的结论是：对于小鸡，蛋白溶解度低于,70%,的豆粕营养价值已受到破坏，蛋白溶解度低于,65%,几乎可以肯定豆粕加热过度。,豆粕加热过度对氨基酸消化率影响,豆粕加热过度对氨基酸浓度和消化率的影响（,%,）,121,高压时间（分）,消化率（,%,）,赖氨酸,胱氨酸,蛋氨酸,苏氨酸,0,91,82,86,84,20,78,69,86,86,40,69,62,83,80,分析值（,%,）,0,3.27,0.7,0.71,1.89,20,2.95,0.66,0.71,1.92,40,2.76,0.63,0.71,1.87,豆粕热处理分析,热处理时，必须保证热处理的适宜强度；,若加热不足，则抗营养因子破坏不够；,若加热过度，蛋白溶解度过低（低于,70,）则氨基酸,(,如,lys),利用率下降，会降低蛋白质的生物学效率（过熟与美拉德反应）；,实际生产中以脲酶活性可判断胰蛋白因子的钝化程度,-,反应加热程度；,蛋白溶解度可作为判断大豆或豆粕加热过度的指标 （,ps=70-85,）。,膨化大豆主要就是热作用（高压爆破）的结果。,发酵后含酸量与蛋白溶解度的关系,说明：,1,、左侧,数据为,2013,年,6,月到,7,月生产取样。,2,、因根据不同用户的需要，产品的乳酸值不同。,3,、按照乳酸递增的形式列出左侧表格。,结论：,通过以上数据可说明，,乳酸和,pH,值的不同，不影响蛋白溶解度的测定。,产品编号,总酸,%,pH,值,成品,蛋白溶解度,%,原料,蛋白溶解度,%,130607036,2.16,5.72,85.22,87.22,130613039,2.42,5.48,85.98,87.22,130616041,2.47,5.51,85.33,87.22,130719016,3.03,4.83,78.35,78.93,130720017,3.01,4.9,78.15,78.93,130725020,3.66,4.83,78.16,78.93,130711006,3.84,4.81,80.03,81.44,130712007,3.88,4.81,80.92,81.44,130716013,3.87,4.81,79.28,80.48,130730025,3.92,4.78,79.82,80.48,130704003,4.09,4.74,79.87,81.44,留意酸含量与,pH,的关系！某些厂家产品酸含量不高但是,pH,很低！,蛋白溶解度,生产批次,乳酸对蛋白溶解度检测的影响实验,实验目的：,豆粕经发酵后产生乳酸，其,pH,值会随着乳酸含量的增加而下降，国内发酵豆粕产品的,pH,值一般在,5.8,4.3,之间，但其蛋白溶解度相差很大（,80%,30%,不等）。检测豆粕的蛋白溶解度主要是用,0.2%KOH,处理后，测其碱溶蛋白含量。此实验主要为在豆粕中人为的加入不同含量的乳酸，观察乳酸对蛋白溶解度检测结果的影响。,实验时间：,2013,年,6,月,19,日,实验用材料：,豆粕：,中纺粮油豆粕，,水分,11.94%,、粗蛋白,46.67%,、,pH,值,6.40,、,灰分,6.26%,、蛋白溶解度,76.75%,乳酸：成都科龙化工试剂厂，含量,85.0%,90.0%,实验方法及结果,方法：,1,、做蛋白溶度检测之前先确定乳酸的添加量，使 豆粕的,pH,值 呈递减。,2,、秤取粉全过,60,目豆粕,1.5g,（精确至,0.0002,），加入,75ml,的,0.2%KOH,后，按百分比加入乳酸（下表中添加乳酸含量为，乳酸占豆粕的百分比），磁力搅拌,20min,，,4000,转,/,分离心,10min,，过滤后去,15ml,滤液按粗蛋白测定方法测定，得蛋白溶解度值。,3,、实验过程,pH,值记录和测定结果如下表；,编号,豆粕中添加,乳酸的含量,加乳酸后豆粕,pH,值,0.2%KOH,处理后滤液,pH,值,蛋白溶解度,0,0%,6.40,12.39,76.75%,1,1.1%,5.70,12.29,76.29%,2,1.7%,5.47,12.24,76.22%,3,2.2%,5.30,12.21,76.00%,4,2.7%,5.19,12.14,75.87%,5,3.5%,4.95,12.05,74.49%,6,4.3%,4.94,12.00,73.94%,7,5.5%,4.55,11.89,73.28%,8,7.1%,4.34,11.26,70.48%,处理方法不同对蛋白溶解度的影响,高温烘干,名 称,ps%,高温烘干的时间,1h,2h,3h,4h,17h,豆 粕,85.32,71.99,59.32,49.54,46.27,15.85,发酵豆粕,79.28,62.05,43.42,38.86,27.79,18.91,名 称,ps%,相同水分高压时间不同,15min,30min,60min,豆 粕,70.31,68.04,65.77,47.99,发酵豆粕,77.08,54.38,56.18,48.16,名 称,ps%,不同水分的原料在相同时间内高压,10%,20%,30%,40%,豆 粕,70.31,68.04,58,51.45,38.46,发酵豆粕,77.08,64.18,57.93,47.23,57.45,高压,名 称,ps%,将物料调至 不同水分后晾干,30%,40%,豆 粕,47.99,48.12,48.47,发酵豆粕,47.23,51.8,53.42,名 称,ps%,发酵 时间,70,烘干,晾干,豆 粕,77.69,3,天,80.84,81.15,低,ps,豆粕,50.15,75.51,76.38,水分对,PS,的作用,发酵对,PS,的作用,发酵豆粕的过烘干与蛋白溶解度,不同蛋白溶解度的,TLC,不同蛋白溶解度的电泳图谱分析,发酵豆粕蛋白溶解度的评估实验,一、,实验目的：找出正确评价发酵豆粕的,PS,的方法,二、实验时间：,2014/8/18,至,2014/9/4,三、实验地点：乐山恒峰华邦生物科技有限公司,四、实验所用样品数据,注：,PS%,为碱溶性蛋白，小肽占总蛋白的百分数含量,五、实验方案,称取,1g,样品，分别溶于,50ml,或,100ml,，浓度为,0.2%,、,0.15%,、,0.1%,、,0.05%,的,KOH,溶液中，以,170 r/min,的转速下振荡,20min,或,16h,，,2700 r/min,的速度离心,10min,，吸取,20ml,上清液消化，定氮，得值,P,。,KOH,蛋白溶解度,%=P /CP,样品,水分,%,CP%,小肽,%,PS%,PH,乳酸,%,灰分,%,YY,11.58,48.91,9.24,74.95,4.94,2.98,6.97,STF,11.09,50.12,14.11,77.55,4.92,3.10,6.45,六、实验结果,序列号,KOH,浓度,料液比,处理时间,KOH,蛋白溶解度,%,YY,YY,平均值,STF,STF,平均值,1,0.20%,1:50,20min,71.56,73.22,79.75,76.34,75.18,76.32,72.93,72.96,2,0.15%,49.50,48.02,59.50,59.49,48.31,60.24,46.25,58.74,3,0.10%,22.69,21.98,48.24,47.08,21.63,46.73,21.61,46.27,4,0.05%,15.48,15.61,29.59,28.08,16.44,27.08,14.90,27.57,5,0.20%,1:50,16h,83.77,84.09,86.35,85.95,83.97,86.81,84.54,84.7,6,0.15%,73.13,69.90,77.83,75.47,66.8,75.81,69.78,72.77,7,0.10%,30.89,34.33,62.27,62.10,31.92,62.29,40.18,61.73,8,0.05%,14.90,16.12,31.58,35.78,17.01,36.15,16.44,39.6,9,0.20%,1:100,20min,75.08,74.06,77.71,74.56,73.28,72.73,73.82,73.24,10,0.15%,67.86,69.29,73.4,70.61,69.99,68.28,70.01,70.15,11,0.10%,58.56,57.20,65.84,61.75,54.47,59.74,58.58,59.68,12,0.05%,20.55,20.22,48.02,44.10,19.53,40.16,20.59,44.11,13,0.20%,1:100,16h,88.39,88.41,86.43,87.26,89.29,87.09,87.55,88.27,14,0.15%,77.08,78.16,85.51,86.10,78.14,85.47,79.25,87.31,15,0.10%,73.42,73.88,77.41,75.72,74.07,75.28,74.16,74.46,16,0.05%,32.96,28.50,60.28,59.41,25.78,60.65,26.76,57.30,曲线图如下,七、正交实验结果,八、结论,改良后发酵豆粕蛋白溶解度检测方法更改为：,KOH,浓度,0.05%,，料液比,1:100,，处理时间为,2h,。,序号,KOH,（,g/mL),料液比,(g:mL),时间,(h),PS,（,YY,）,PS,（,STF,）,1,0.07,1:100,1h,47.95,59.15,2,0.07,1:150,2h,65.38,69.87,3,0.07,1:200,3h,83.32,79.46,4,0.05,1:100,2h,30.52,55.99,5,0.05,1:150,3h,52.71,66.25,6,0.05,1:200,1h,59.75,69.09,7,0.03,1:100,3h,20.16,43.43,8,0.03,1:150,1h,20.84,48.90,9,0.03,1:200,2h,42.73,66.10,此方法检测同类产品数据,样,品,PS%,PS%,（新方法）,豆粕,76.51,47.41,YY,74.95,30.52,BZD,68.19,20.32,LB,62.07,39.28,QN,65.11,22.03,JTD,77.02,23.73,HS,77.48,48.24,STF,77.55,55.99,Tris-HCl,蛋白溶解度实验,一、,实验目的：,比较不同厂家发酵豆粕在,Tris-HCl,中的蛋白含量,二、实验时间：,2014/8/18,至,2014/8/24,三、实验地点：乐山恒峰华邦生物科技有限公司,四、实验所用样品数据,注：,PS%,为碱溶性蛋白，小肽占总蛋白的百分数含量,五、,Tris-HCl,的配置方法,称取,Tris 3.64g,于,1000ml,大烧杯中，加,800ml,蒸馏水溶解，吸取,0.7ml-,巯基乙醇，用浓盐酸调节,PH,至,8.0,，将大烧杯中的液体倒入,1000ml,容量瓶，用蒸馏水定容至,1000ml,，摇匀备用。,样品,水分,%,CP%,小肽,%,PS%,PH,乳酸,%,灰分,%,YY,11.58,48.91,9.24,74.95,4.94,2.98,6.97,STF,11.09,50.12,14.11,77.55,4.92,3.10,6.45,六、实验步骤：,1,、取,1g,样品，溶于,100ml Tris-HCl,溶液中，震荡,16h,，吸取,20ml,上清液消化、定氮，得值为,P,2,、,Tris-HCl,蛋白溶解度,=P /CP,七、实验结果,Tris-HCl,蛋白溶解度,(%),样品,YY,STF,1,76.44,102.04,2,74.93,97.69,3,78.08,100.9,平均值,76.48,100.21,电泳检测的参考价值,（认识,sds-,凝胶电泳的实质）,胶的配制方法、电压调节差异；,样品浸提时间、浸提液,ph,、料液比、浸提次数；,浸提后,ph,调节的差异性；,物料酸度及缓冲性影响；,物料蛋白溶解度的影响（人工模拟后的数据）。,抗原蛋白提出来了？提完全了？遮蔽了？,电泳抽提蛋白试验,（有效提取量的测定结果）,样品,总酸,pH,小肽（占蛋白）,水分,粗蛋白,YY,2.91,4.74,4.16%,10.75%,49.93%,X1,3.87,