实验诊断学CAI(医学PPT课件).ppt

单击此处编辑母版标题样式,*,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,实验诊断学,实验诊断绪论一、临床检验与实验诊断的关系,检验医学,(Laboratory medicine),临床检验（,Clinical Laboratory Science,）,实验诊断（,Laboratory diagnosis,）,临床检验：标本检测客观资料（结果、数据、信息）以检验方法的研究和改进为重点。,实验诊断：客观资料分析和思维客观依据 （诊疗、研究、保健,),以检验信息的临床应用为 重点。,二、实验诊断学的发展简史,（一）最早和最原始的实验诊断,Hippoerates,希腊名医。,时间：公元前,400,年,方法：感官直视法（色、嗅、味等）,标本：尿液,（二）临床血液学检验,1,、系统地科学地研究血细胞从,16,世纪末至,17,世,纪初显微镜发明和改良开始。,2,、方法学变化,传统的方法：以手工操作，显微镜，计数板为标志,现代方法：以血细胞自动分析仪为主要标志,3,、血细胞研究及检验方法发展简史,4,、发展史的简要过程：,显微镜,RBCWBCPLT,计数染色,血细胞功能,BM,穿刺针血细胞分析仪（电,阻激光光学、电学、染色相结合）,手工分析仪器分析,（三）临床化学检验发展简史,19,世以前观察人体化学组成变化,1918,年,Lichtwitz,提出“临床化学”名词,1931,年,Peter,等出版,临床化学,专著,19,世纪末显量分析和容量分析,20,世纪初；,Folin,比色分析,50,年代酶活力测定,80,年代自动化分析（超微量）,（四）临床微生物学检验发展简史,17,世纪末显微镜观察微生物,19,世纪年代创巴氏消毒法（,Pasteur,）,Lister,创建无芯外科手术,Koch,证明微生物是传染病的致病因子,细胞培养与染色技术,1900,年后病原微生物分离证实,1929,年,Fleming,发现青霉素,分子微生物检验,微生物,病原微生物,抗生素,杀灭病原微生物（变异）,（五）临床免疫学检验发展简史,天花（公元,713741,唐代）,预防天花（人痘苗、牛痘苗）,细胞免疫,体液免疫,1901,年“免疫学”名词提出,血清学（抗体：抗原）,1958,年,Barnet,克隆选择学说,T,细胞亚群,抗体分子结构,1975,年单克隆抗体制备,Ig,基因重排,细胞因子（受体、基因、活性）,分子免疫学,免疫学实验诊断,细胞免疫检验：,ICC,，,淋巴细胞亚群分类与功,能检测。,体液免疫检验：,Ag,，,Ab,，,C,等检测,（六）实验诊断学发展可发现以下特点：,1,、从简单到复杂，从形态到功能，从手工到仪器（自动化）,2,、技术创新，方法创新，观念创新是发展的动力,3,、临床应用与实验技术相互促进，共同提高。,三、实验诊断学的现状与展望,（一）自动化（例举,10,种）,自动血细胞分析仪 自动细胞鉴定仪,自动生化分析仪 自动血镜养仪,自动化子发光分析仪 自动尿液分析仪,自动放免分析仪 自动染色体分析仪,自动酶免分析仪 流式细胞仪,（二）试剂商品化,（,1,）,FDA,、,SDA,认可试剂,（,2,）与仪器配套试剂,（,3,）质优价廉试剂（自评）,（三）方法学的标准化,国际标准化,国内标准化,区域内标准化,原则：精密、准确、简便、快速,（四）,POCT,（,Point of care test,）：,意译：,床边检验,即刻检验,特点：操作简便、试剂稳定、快速、仪器设备简单,适用：急诊室、诊所、家庭检测等,缺点：标准化、规矩化、质检等较差,（五）影响因素与质量保证,（六）循证检验医学,(evidence based laboratory medicine,，,EBLM,）,四、临床应用：,疾病诊断（病因、鉴别）,疗效观察,预后判断,预防保健,科学研究,结果解释,(1),(2),同一疾病不同结果,同一结果不同疾病,结合临床,五、学习的重点与方法,方法：掌握共性知识（先）：概念性、普通性、,实用性,注意个性知识（后）：特殊性、专业性、,复杂性,重点：,1,、掌握各项检验的适应证与选用原则,2,、掌握参考及其临床意义,3,、了解原理、方法、影响因素等,第一章 血液检查,一、血液检查的相关知识,1,、血液的基本功能,（,1,）参与新陈代谢,（,2,）参与各种功能调节,（,3,）维持内、外环境的相对平衡,参与机体的每一个功能活动,2,、血液的组成,3,、血液成分改变与疾病的关系,血液成分改变,疾病,（质与量）（组织、器官、细胞）,4,、血液常规检验的概念变化,（,1,）传统血常规：,RBC,、,Hb,、,WBC,、,DC,（,手工法）,（,2,）现代血常规：二分类、三分类、五分类全自动,血细胞分析仪,十多次参数至几十项参数,5,、血细胞分析仪简介,血细胞分析仪发展简史：,1953,年 第一名血细胞分析仪由,Coulter,发明问世,60,年代 血细胞分析用于,RBC,、,Hb,、,WBC,、,MCV,、,MCH,、,MCHC,、,HCT,测定,70,年代 增加,Pet,测定,80,年代 增加,DC,、,RDW,、,PCV,等新项目,90,年代 增加,Ret,，,计数及分类计数等成为医学检,验领域的重要仪器之一。,血细胞分析仪功能特点,（,1,）多参数分析,20,或,40,多项,（,2,）精确度高,CV,：,5%10%,（,3,）,速度快,50120,T,/,h,（,4,）,用血量少 ,250ml,（,个别,6ul,）,（,5,）,结果简明 参数、含义报告、直方图式或散点图,（,6,）质检可靠 配套质控品、全国或全世界质控网络监测,（,7,）自动清洗 各标本间互染率,1%,（,8,）报警功能 异常结果自动报警,（,9,）有效筛查 三分类复检,30%,，五分类,15%,，提示,异常细胞,血细胞分析仪的报告方式（,1,）三分类报告,(,参数、含义报告、直方图,),（,2,）五分类仪器（增加散点图）,DF,2,F-,单核细胞，,G-,淋巴细胞，,H-,中性粒细胞，,I-,血小板,DF1,：,A-,单核细胞，,B-,淋巴细胞，,C-,中性粒细胞，,D-,嗜性粒细胞，,E-,血小板。在,DF1,中由于淋巴细胞或小单核细胞与嗜碱性细胞分布有重叠，故不能直接观察。只有在,VCS,三维图中才能区分,第二种散点图,各分类区细胞分别与血涂片中的白细胞类型相对应：噪声、幼红细胞、聚集血小板、淋巴与嗜碱粒细胞、大的未染色细胞（,LUC,），,原始细胞的光散射比,LUC,更强、单核细胞、中性粒细胞、嗜酸性粒细胞,二、红细胞计数和血红蛋白测定,1,、红细胞起源，演化和发育,HIV,EPO,THSC,BFU-ECFU-E-,原红,早红中红晚红成熟红,IL-3 24-48h,BM:,-72h-|-,blood,红细胞分化发育成熟：,5,天,3-5,次分裂,原红,RBC(8-16,个,),Hb,开始合成阶段：早幼红,调节：,EPO/IL-3/,睾丸激素/神经体液/晚幼红,红细胞数量动态平衡,120,RBC,生成,RBC,破坏,（,BM,）,1/200,（,脾脏）,红细胞主要功能：携,O,2,/,血液,PH,缓冲,2,、,Hb,的特点：,MW,：,64458Dal,数量：,2.8,亿,/RBC,携,O,2,：,1.34mlO,2,/g,染色：淡红色,/Wright,3,、,RBC,、,Hb,参考值,分组,RBC,Hb,男性 （,4.05.5,）,10,12,/L 120160g/L,女性 （,3.55.0,）,10,12,/L 110150g/L,新生儿（,6.07.0,）,10,12,/L 170200g/L,RBC,Hb,变化的关系（正色,RBC,）,旧制单位,RBC,：,Hb100,：,3,（,万,/mm,3,：,g/dl,）,新制单位,RBC,：,Hb1,：,3,（,10,12,/L,：,g/L,）,影响因素：,（,1,）总血容量改变：大量失血早期，血浓度改变小，难,反映贫血存在。,（,2,）总血浆容量改变：浓缩或血稀释,（,3,）个体差异：性别、年龄、居住海拔高度,4,、,RBC,、,Hb,检测的临床意义,RBC,、,Hb,量变,(1).,生理性,:a.,婴幼儿（,3m15y,）,:,造血原料不足,b.,妊娠中、晚期,:,血容量,c.,部分老年人,:,造血功能,(2),病理性 各种贫血（三大类）,RBC,、,Hb,量变,(1),相对,：血浆容量、相对性、暂时性,:,呕吐、腹泻、,烧伤、多汗、多尿,（,2,）绝对（缺,O,2,）：,生理性：胎儿、新生儿、高原生活、剧烈运动、应激等,病理性：,a.,代偿性：多种心、肺疾患（严重、慢性）,b.,持续性：真红（,Polycythemia,vera,）：,（,710,）,10,12,/L,，,170250g/L,EPO,：,肿瘤（肝癌、胃癌）、,肾疾（肾盂积水，多囊肾）,RBC,、,Hb,形态改变,质变,6,、贫血的分类,贫血的病因与发病机制分类,(,续,),(,续,),7,、缺铁性贫血检查项目的选择和应用,8,、溶血性贫血的分类,9,、溶血性贫血检查项目的选择和应用,三、白细胞计数和白细胞分类,1,、五种白细胞形态特征及参考值,2,、白细胞计数和分类的临床意义,中性粒细胞增多（,neutrophilia,）,生理性增多：,见于一天内波动（下午较早晨高）妊娠后期及分娩时，剧烈运动或劳动后、饱餐或淋浴后、高温或严寒等（暂时性）。,病理性增多：,（,1,）急性感染：化脓性感染最常见。轻度,WBC,（,），,N,。,中度：,WBC,2010,9,/L,，,N,极重度：,WBC,不高甚至减低。,（,2,）严重损伤：严重外伤、大手术、大面积烧伤，,AMI,等。,（,3,）急性大出血：见于脾破裂、宫外孕等,（,4,）急性中毒：代谢性中毒,糖尿病 症中毒，尿毒症和妊娠中毒；急性化学药物中毒,急性铅毒，汞中毒，安眠药中毒，有机磷农药中毒等。,（,5,）急性溶血：血管内严重溶血等,（,6,）恶性肿瘤：非造血系统恶性肿瘤，如肝癌、胃癌等,（,7,）其他：,AIHA,痛风、严重缺氧等,异常增生性增多,（,1,）粒细胞白血病：,AML,（,M,，,M,2,M,3,M,4,M,6,）。,WBC,一般为（,1050,）,10,9,/L,，,10010,9,/L,较少。,（,2,）,MPD,（,Myeloproliferative,disorders,）：,包,括 真红，,ITP,，,骨髓纤维化和慢粒等,中性粒细胞减少（,neutropenia,）,WBC,4 10,9,/L,称白细胞减少，主要以,N,为主。,N,1.510,9,/L,称粒细胞减少症。,N,0.510,9,/L,称粒细胞缺乏症。,（,1,）某些感染：,病毒感染：流感、麻疹、病毒性肝炎、水痘、风疹、巨细,胞病毒等。,细菌性感染：,ST,、副,ST,、,TB,、,脓毒血症等。,其他：年老体弱、慢性消耗性疾病或晚期恶性肿瘤患者伴严,重感染时，,WBC,（但,N,）。,（,2,）,某些血液病：粒感、粒缺、非白、恶热等，也可见于恶,贫，严重,IDA,、,PNH,等。,（,3,）理化因素：放射线、同位素、化学物品及化学药物引起,N,。,（,4,）,My,功能亢进：脾亢、某些肿瘤、,Gaucher,病，,Niemann,-Pick,病等。,（,5,）其它：,SLE,，,某些自身免疫性疾病，过敏性休克等,。,淋巴细胞绝对增多的病因,淋巴细胞减少（,Lymphocytopenia,）：,接触放射线；应用肾上腺皮质激素、烷,化剂、抗淋巴细胞球蛋白（,ALG,）、,先天性,或获得性免疫缺陷综合症等。,中性粒细胞的核象变化,正 常：,St,：,sg1,：,13,，,sg,以,309,居多,核左移：,st,：,sg,比值增大，,st,增多，甚至出现,幼稚粒细胞,核右移：,sg,增多，分析在,5,以上,3%,时,中性粒细胞的核象变化,中性粒细胞形态异常,（,1,）中性粒细胞的中毒性改变：见于严重传染病，恶,性肿瘤，严重中毒，大面积烧伤等,大小不均（,anisougtosis,）,中毒颗粒（,toxic granulation,）,空泡形成（,Vacuolization,）,核变性（,degeneration of nucleus,）,杜勒小体（,Dohler,bodies,）,（,2,）巨多分叶核中性粒细胞：,1025m,，,509,，,少数,1009,，见于巨幼贫或应用抗代谢药物后,（,3,）棒状小体（,auer,bodies,）：,急粒、急单时可见，急淋（无）,（,4,）其他：均与遗传有关的异常变化。,Pelger-Hilet,畸形：无分叶功能,核畸形、如肾形、哑铃形、,枪生形等。常染色体显性性疾病。某些,感染、白血病或,MDS,等,Chediak,-Higashi,畸形：常染色体急性遗传性疾病，患者易感,染，常伴白化病,Ader,-Reilly,畸形：常伴有脂肪软骨营养不良或遗传性粘多糖,代谢障碍。,May-,Hegglin,畸形：患者粒细胞终身含有淡蓝色包涵体。,淋巴细胞形态异常,主要见于病毒感染，如传单，病毒,性肝炎，出血热，湿疹，过敏等。,型：泡沫型,型：不规则型,型：幼稚型,嗜酸性细胞增多（,eosinophilia,）,（,1,）,过敏性疾病：,E,10%,见于支气管哮喘、药物过敏，蕁,麻疹、食物过敏、血清病等。,（,2,）寄生虫病：,E,10%,血吸虫病、肺吸虫病、蛔虫病、钩,虫病等。,E,90%,见于嗜酸性粒细胞型类白反应。,（,3,）皮肤病：湿疹，剥脱性皮炎，天疱疮，银屑病等。,（,4,）血液病：慢粒，嗜酸粒细胞白血病，淋巴瘤，,MM,等。,（,5,）某些恶性肿瘤：如肺癌等。,（,6,）某些传染病：猩红热等。,嗜酸性粒细胞减少（,cosinopenia,）,见于,ST,，副,ST,，,大手术，烧伤等，或长期应,用肾上腺皮质激素。,嗜碱性粒细胞增多（,basophilia,）,（,1,）,过敏性疾病：结肠炎、药物、食物、吸入,物过敏反应、红斑及,RA,等。,（,2,）血液病：慢粒、嗜碱性粒细胞白血病，骨,髓纤维化等。,（,3,）恶性肿瘤：特别是移植癌时。,（,4,）其他：某些内分泌症患者如糖尿病，传染,病如水痘、流感、天花、结核等。,嗜碱性粒细胞减少（,basophilopenia,）,无临床意义。,单核细胞增多（,monocytosis,）,（,1,）,某些感染：如感染性心内膜炎、疟疾、,黑热病、急性感染恢复期、活动性肺结核等。,（,2,）某些血液病：单核细胞白血病、粒缺、,MM,、,恶组、淋巴瘤、,MDS,等。,单核细胞减少（,monocytopenia,）：,无临床意义。,血细胞分析其他参数及临床意义,1,、红细胞比容测（,hematocrit,，,Hct,）,指抗凝血经离心（,2264g/30min,）,沉淀后，测得,下沉的红细胞在全血中所容积的百分比值。,参考值：男性：,0.420.49L/L,，,女性：,0.370.48L/L,临床意义：,（,1,）,Hct,：,血液浓缩（如严重呕吐，腹泻；大量出,汗，大面积烧伤）、真红、新生儿、高原生活、,慢性肺疾患。,（,2,）,Hct,：,各种类型的贫血,2,、红细胞平均值参数,（,1,）平均红细胞容积（,mean Corpuscular Volume,，,MCV,）,（,2,）平均红细胞血红蛋白量（,mean Corpuscular,Hemoglobin,，,MCH,）,（,3,）平均红细胞血红蛋白浓度（,mean Corpuscular Hemoglobin Concentration,，,MCHC,）,3.,红细胞容积分布宽度（,red blood cell volume distribution width,RDW,反映外周血红细胞异质性的参数,临床意义：,（,1,）,IDA,与地贫鉴别：,IDA-RDW,地贫：,88%RDW,正常,（,2,）,IDA,早期诊断：,IDA,早期，,RDW,（,MCV,，,MVH,正常）,（,3,）,Bessman,贫血分类,4.,网织红细胞测定（,reticulocyte,，,Ret,）,Ret,是尚未完全成熟的红细胞（年青红细胞）,参考值：,0.050.015/,（,2484,）,10,9,/L,。,临床意义：,（,1,）,Ret,：,BM,红系增生旺盛，常见于溶贫（常,5%,，严重时,20%,，少数,40%,）亦可见于急性失血（），,IDA,（,）、,巨贫（,）及贫血试验性治疗诊断。,（,2,）,Ret,：,BM,造血功能减低，常见于,AA,。,亦见于骨髓病性贫血（如急白淋巴病、,MM,）。,5,、红细胞沉降率测定（,eryhrocyte,，,sedimentation rate,，,ESR,）,ESR,指红细胞在一定条件下沉降的速率。,影响因素：,（,1,）血浆多种蛋白的比例变化,RBC,间排斥力：,Fbg,（,带正电荷）,RBC,间排斥力：,A/b,（,带负电荷）,（,2,）红细胞数量和形态：,RBCESR,，,RBCESR,。,RBC,大,ESR,，,RBCESR,。,（,3,）,其他因素：,Chol,，,TGESR,，,卵磷脂,ESR,参考值：男性：,015mm/1,小时未，女性：,020mm/1,小时未,临床意义：,（,1,）生理性增快：,12,岁以下儿童、,60,岁以上老年人、妇女月,经期、妊娠,3,个月以上与生理性贫血或,Fbg,有关。,（,2,）病理性增快：,多种炎症性疾病：,CPR,（,acute phase reactant,）,-,2,-M,、,CRP,、,1,-AT,、,Hp,、,Tf,、,Fbg,等增加。,组织损伤及坏死：,AMI,（,ESR,与心绞痛（,ESR,正常）鉴别,恶性肿瘤：良性肿瘤（,ESR,正常）与（,ESR,）,鉴别,高球蛋白血症：慢性肾炎、肝硬化、,MM,、,-,2,-M,血症、,SLE,、,亚急性心内膜炎、黑热病等。,其他：部分贫血患者、动脉住粥样硬化、糖尿病、肾病综合症等。,（,3,）血沉减慢：临床意义不大,6,、血小板计数（,Platelet Count,，,Plt,）,参考值：（,100300,）,10,9,/L,，,临床意义：,（,1,）,Plt,：,Plt,100,10,9,/L,，,Plt,生成降低：,AA,，,放损、急白、巨贫、骨髓纤维化,Plt,破坏或消耗增多：,ITP,、,SLE,、,恶淋、风疹、,DIC,、,TTP,新生儿血小板减少症、输血后血小板减少症。,Plt,分布异常：脾亢、大量输血、大量输液等。,（,2,）,Plt,：,Plt,400,10,9,/L,，,原发性增多：慢粒、真红、,ITP,、,骨髓纤维化早期,继发性增多：急性感染、急性溶血、某些癌症。,7,、平均血小板体积（,mean platelets volume,，,MPV,）,MPV,指血小板的平均体积。用,fl,表示,临床意义：,（,1,）,MPV,与,Plt,呈非线性负相关，随着,Plt,增高，,MPV,数值越来越小。,（,2,）,Plt,和,MPV,结合对血小板异常可分为：,Plt,和,MPV,正常,Plt,减少，,MPV,随之增高，如血小板破坏增多,Plt,增高，,MPV,正常，如反应性血小板增多,MPV,异常增高，如地中海贫血，慢性髓性白血病,MPV,异常减低，如血小板增加不良,第一章 第四节 血型检查,一、血型定义,1,、狭义血型：指红细胞表面抗原的差异,2,、广义血型：指各种血液成分具有抗原的差,异，即遗传多志性标记，包括红细胞、白细,胞、血小板及其某些血浆蛋白。,3,、血型系统：由若干个相互关联的抗原、抗体,组成的血型体系血型系统。,二、血型发展简史（一百多年）,（,1,）,1900,年,Landstello,血液相互混合试验：将人血的凝集反应分,为三种，同时指出它们在输血中的主要性。,（,2,）,1902,年,Decastello,等又加成,4,种反应,（,3,）,1902,年,Jans,Rg,根据这,4,人血之间的反应交互凝集现象而分,类，称,、,、,和,。,（,4,）,1910,年,MOSS,单独的发现了同样的现象，也分为,4,型,（,5,）,1921,年 国际统一命名，即,A,、,B,、,O,法。由于,ABO,血型系统,的鉴定应用，使输血治疗在临床应用上开创了新纪元。,（,6,）,1940,年,Landsteiner,等发现了,Rh,因子，即,Rh,系血型。,（,7,）以后相继发现了一系列血型系统：,ABO,、,MNSS,、,P,、,Rh,、,Lathe run,、,Lewis,Kell,、,Duffy,、,Kidd,、,Diego,、,Yt,、,I,、,Xg,、,Domberock,、,Colton,等,（,8,）至今，人类红细胞血型已有,27,个系统,400,多种抗原。,三、,ABO,系统抗原（一）,ABO,血型抗原抗体,（二）,ABO,系统亚型,A,、,B,血型均有亚型，但以,A,亚型最多见且有临床意义。常见的有,A,1,、,A,2,、,A,3,、,A,x,和,Am,，以,A,1,和,A,2,最重要。,（三）,ABO,血型鉴定,（四）交叉配血试验,主侧：,Dc+Ps,次侧：,Ds+Pc,（五）,ABO,血型检测的临床意义,1,、安全输血：同型输血同亚型输血,2,、新生儿溶血病（,hemolytic disease of newborn,，,HDN,）,ABO,系统母婴血型不合：母,O,型，胎儿,A,或,B,型,，约,90%,。,Rh,系统母婴血型不合：少数，约,10%,3,、器官移植：供受体,ABO,血型必须相合,4,、其他：系统鉴定、法医鉴定、某些疾病的相关,性调查,（六）,Rh,血型系统,1940,年,Landsteiner,和,Wiener,用恒河猴（,Rhesus monkey,）,的红细胞免疫家免，所得抗血清能与,85%,的白人红细胞发生凝集反应，因此认为这些人的红细胞上有恒沙猴红细胞相同的抗原，因此而以,Rh,命名之。,（七）,Rh,系统的抗原和抗体,抗原：,C,、,c,、,D,、,E,、,e,，,5,种抗原性,D,E,Cc,e,抗体：,anti C,、,anti c,、,anti D,、,anti E,、,anti e 5,种,通常称含,D,抗原的,RBC,为,Rh,（,+,），无,D,抗原者,为,Rh,（,）。,Rh,系统亚型：,D,有临床意义。,D,只能与,7%25%,的抗,D,反应,D,易误定为,Rh,（,），,用间接抗人球蛋白试验可,查出。,Rh,抗体属,IgG,，,系不完全抗体,（八）,Rh,系统检测的临床意义,（,1,）溶血性输血反应：,Rh,（,）,者再次接受,Rh,（,+,）,血液,血管外溶血,（,2,）新生儿,Rh,溶血病：母婴,Rh,血型不合。,（九）其他血型系统检测,（,1,）白细胞抗原系统,红细胞血型抗原,白细胞特有抗原,与其它组织共有抗原,HLA,：,human leukocyte antigen,（,2,）血小板抗原和抗体,血小板非特异抗原：,ABO,、,Nn,、,P,、,Ii,、,HLA,等,血小板特异性抗原：,HPA-1,、,HPA-2,、,HPA-3,、,HPA-4,和,HPA-5,血小板同种抗原：由输血、输血小板或妊娠等同,种免疫反应产生。,血小板自身抗体：,PAIgG,、,PAIgM,、,PAIgA,等,（,3,）血清蛋白抗原：,Ig,、,HP,、,Tf,、,血清酶、清蛋白等均有抗原差型，具有特异抗原。,Ig,与输血反应有关。,第六章 临床免疫学检查,一、体液免疫检查和细胞免疫检查,检查分子：,Ag,、,Ab,、,Ig,，,C,等,检查细胞：免疫细胞（,T,、,B,、,NK,、,M,、,LAK,、,TIL,）,二、临床常用的免疫学检查,（一）免疫球蛋白（,immunoglobulin,，,Ig,）,检测,（二）,M Protein,（,三）,Complement C,（,四）淋巴细胞表面标志物和淋巴细胞功能检测,（五）病毒性肝炎血清标志物检查,（六）感染免疫检查,（七）自身抗体检查,（八）肿瘤标志物检查,一、概述,免疫学,:,自身防御 识己排异,发展简史,:,免疫学的经验时期（,12,世纪,16,世纪 人痘苗预防天花）,经 典 免 疫 学 时 期（,18,世纪末至,20,世纪中，实验时期）,牛痘苗,（,1798,）,减毒疫苗,（,1880,）,抗毒素,（,1888,）,补体,（,1894,）,血清学方法,（,1896,）,免疫化学,（,1908,）,抗体生成理论,（,1930,）,近 代 免 疫 学 时 期（,20,世纪中至,60,年代）,细胞免疫（,1935,）,免疫耐受（,1945,）,克隆选择学说（,1955,）,免疫技术发展（,1959,）,现 代 免 疫 学 时 期（,20,世纪,60,年代,）,4.60,年代的重要变动,:(1)T,和,B,细菌亚群概念,(2),免疫球蛋白分类,70,年代的重要变动,:(1),免疫应答细胞,(T,B,M),(2)T,细胞亚群的发现,(3),免疫网络学说的提出,(4),单克隆抗体生成,80,年代的重要变动,:(1),抗体多样性遗传控制,(,Ig,基因结构,),(2)T,细胞抗原受体的证明,(TCR),(3),细胞因,(LF,MF,IL,IFN,TNF,CSF,TGF),(4),免疫学技术发展,2,细胞融合技术,(,McAb,),T,细胞克隆技术的建立,转基因技术的应用,分子杂交技术的应用,免疫学与医学,免疫学：渗透，分支，交叉,免疫病理学 免疫遗传学,免疫药理学 免疫毒理学,神经免疫学 移植免疫学,生殖免疫学,临床免疫学,临床免疫学,1.,定义,:,应用免疫学的理,论和技术研究疾,病的发病机制,诊断和治疗。,2.,作用,:,生长、遗传、衰,老、感染、肿瘤,以及自身免疫病,等等。,二、临床免疫检测的任务和范围,临床免疫检测是利用抗原抗体反应检测标本中微量物质的方法,Ag,或,Ab,都可测定（定性或定量）,表,1,临床免疫检测的任务和范围,三、免疫检测技术的发展,血,清,学,试,验,传,统,免,疫,测,定,三,大,标,记,技,术,免,疫,微,球,技,术,免,疫,滲,滤,和,层,析,免,疫,全,自,动,化,检,测,四、临床免疫检测的热点,热点：研究较多，价值较高,（一）、自身免疫病的免疫检测,（二）、肿瘤标志物检测,（三）、,Th,1,、,Th,2,检测,(,四,),、全身性炎症反应免疫标志物,（五）、病原体和新传染的抗原抗体检测,（六）、细胞凋亡（,apoptosis,）,检测,（七）、肌红蛋白、肌钙蛋白与心肌缺血性损伤,（八）、淋巴细胞免疫表型分类,三、体液免疫检测,（续）,四、淋巴细胞亚群分型检测,（一）,T,淋巴细胞分解,CD,3,+,61%85%,CD,4,+,28%58%,CD,8,+,19%48%,CD,4,+,/CD,8,+,1.660.33,表,2 T,细胞亚群功能分类,（二）,T,细胞亚群变化的意义,1,、,CD,4,+,：,RA,活动期,CD,4,+,：,某些病毒感染：,AIV,、,CMV,；,严重创伤、全身麻醉、大手术、,免疫抑制,2,、,CD,8,+,：,RA,、,重症肌无力、,型糖尿病、,膜型肾小球肾炎,CD,8,+,：,传单、,CMV,、,慢肝,3,、,CD,4,+,/CD,8,+,：,HIV,、,瘤型麻风病、恶性肿瘤、,感染,CD,4,+,/CD,8,+,：,RA,活动初期、多发性硬化症、,SLE,、,重症肌无力等,4,、,CD,3,+,：,甲亢、淋巴细胞性甲状腺炎、重症,肌无力、移排等,CD,3,+,：,免疫缺陷病、恶性肿瘤、,SLE,、,某些,感染、化疗、放疗等。,（三）,B,细胞表面标志物检测,1,、,SmIg,测定,方法：荧光显微镜检测,参考值：,SmIg,+,：,1628%,（,21%,）,SmIgG,+,：,413%,（,7%,）,SmIgM,+,：,713%,（,2.2%,）,SmIgA,+,：,14%,（,2.2%,）,SmIgD,+,：,58%,（,6.2%,）,SmIgE,+,：,01.5%,（,6.2%,）,意 义：,SmIg,+,：,B,细胞恶性增殖、白血病,（慢性、毛白）、巨球蛋白血症,SmIg,+,：,体液免疫缺陷,2,、,B,细胞,CD,抗原测定：,CD,19,、,CD,20,、,CD,21,、,CD,22,测定,方法：免疫荧光法或,FCM,参考值：,CD,19,+,：,11.74%3.73%,意义：,CD,19,+,：,B,系恶性肿瘤；,CD,19,+,：,体液免疫缺陷,CD,20,+,：,B,细胞激活后丢失,CD,21,+,：,Cd,3,R/EBR,CD,22,+,：,存在于成熟,B,细胞,五、淋巴细胞功能检测,（一）淋巴细胞转化试验,LTT,：,有丝分裂原刺激转化,SLTT,：,特异性抗原刺激转化,参考值：,60.1%7.6%,（,T,）,（二）混合淋巴细胞反应（,MLR,）,1,、双向反应：两个无关个体细胞混合培养,2,、单向反应：一方抑制处理后混合培养,3,、意义：细胞免疫功能,/,移植排斥反应预测,（三）,NK,细胞活性测定（四）中性粒细胞功能检测,六、细胞因子检测,1,、,CK,：,LK,、,MK,、,其他,CK,2,、,CK-R,3,、,常用检测的,CK,：,IL-2,、,IL-4,、,IL-6,、,IL-8,；,TNF-2,、,IFN,、,GCSF,、,EPO,；,4,、方法：,（,1,）,RIA,或,ELISA,（,2,）,DNA,分析法,（,3,）分子杂交法,（,4,）,PCR,：测,mRNA,表达,（,5,）定量,PCR,：,TGF,、,IL-2,、,IL-1,、,TNF,等,七、病毒性肝炎血清标志物检查,1,、病毒性肝炎病原体特征,2,、肝炎病毒标志物,5,种肝炎病毒的标志物,3,、乙型肝炎五次血清标志物检测的意义,（,1,）乙肝标志物的变化特征,（,2,）乙肝标志物单项阳性的意义,HBsAg,（,+,）：,表示体内有,HBV,存在，有传染性。,HBsAb,（,+,）：,中和性抗体，曾感染,HBV,，,主动或,被动免疫。,HBeAg,（,+,）：,病毒复制、传染性强。,HBeAb,（,+,）：,AB,中和抗体，仍有传染性，,HbeAg,转阴。,HBcAb,（,+,）：,非中和抗体，“窗口”期，既往感染。,（,3,）“二对半”检测的意义,表,6-3 HBV,五项血清标志物联合检测的临床意义,（一）、自身免疫病的免疫检测,自身免疫与自身免疫病的概念有显著区别。,健,康,个,体,自,身,耐,受,自,身,免,疫,生,理,自,稳,自,身,免,疫,异,常,自,身,免,疫,病,自身免疫与自身免疫病的关系（三种）,自身免疫引起疾病,疾病引起自身免疫,某些因素同时引起前两者,自身免疫病的免疫检测项目,1,、抗核抗体（,ANA,）：,细胞核成分为靶抗原,非特异性,抗,DNA,抗体：,抗,dsDNA,抗体：,70%SLE,阳性，与病情正相关抗,ssDNA,抗体：特异性差，见于多种疾病,抗,Z-DNA,抗体：临床意义不明,抗,ENA,抗体：,DNA,以外的针对核内可提取性,核抗原的抗体,15,种以上抗原及其相应抗体,抗,Smith,抗体：对,SLE,特异性高，阳性,30,40%,抗,Scl-70,抗体：系统性硬化症（,PSS,），,特异性抗体；,抗,PM-1,抗体：多发性肌炎（,PM,），,皮肌炎（,DM,），,抗,ss,-A,抗体和抗,ss,-B,抗体：干燥综合症（,SS,），,SLE,RA,抗,RNP,抗体：混合结缔组织病（,100%+,）,MCTD,。,抗组蛋白抗体：多种自身免疫病，药物性狼疮。,2,、其它自身抗体,抗胞浆内线粒体抗体,抗核糖体抗体,抗溶酶体抗体,抗红细胞抗体,抗血小板抗体,抗淋巴细胞抗体,抗受体抗体,抗平滑肌抗体,抗横纹肌抗体,3,、循环免疫复合物（,CIC,）,CIC-,抗原杭体复合物，易沉积于皮肤，肾脏,结节性多动脉炎（,+,）,SLE（+）,AS（+）,局部免疫性炎症反应,（二）肿瘤标志物检测,TM,种类,:30,多种免疫检测项目,作用,:,辅助诊断、疗效现察、预后判断,端粒酶,:,一种新的,TM,表,3,常见肿瘤标志物诊断价值及应用,(,一,),表,3,常见肿瘤标志物诊断价值及应用,(,二,),注：首选指标 第一补充指标 第二补充指标,TM,检测的注意事项,（,1,）动态检测,TM,的含量变化,（,2,）定期测定,TM,的含量,（,3,）联合检测综合分析,Th,1,、,Th,2,检测,Th,1,和,Th,2,检测的难点,（,1,）不能直接检测,Th,1,和,Th,2,细胞,（,2,）分泌的相应细胞因子量少,（,3,）原装进口试剂昂贵,（,4,）其他部分细胞分泌,Th,1,/Th,2,型细胞因子,表,5 Th,1,、,Th,2,型细胞因子的产生细胞,(,四,),全身性炎症反应免疫标志物,严重感染、严重创伤、胰腺炎、严重的自身免疫病,前炎症介质,SIRS,诱发,CRP、SAA,TNF-、IL-1、IL-6、IL-8,APP,DIC、ARDS、MODS等,伴发,检测,（五）病原体和新传染的抗原抗体检测,病毒：汉坦病毒、埃博拉病毒、,HCV,、,HIV,、,TTV,细菌：军团病杆菌，大肠杆菌,O157,：,H7,，,猪链球菌,新病原体：朊病毒,蛋白传染因子,伯氏疏螺旋体（莱姆病）,人类埃立克体,肺炎衣原体（手足口病）,（六）细胞凋亡（,apoptosis,）,检测,细胞凋亡：一种不同于坏死的由基因调控的细胞主,动死亡过程。,调节因素：激素、细胞因子、抗体、超抗原、,K,、,NK,、,化疗药物等,调节基因：诱导凋亡基因：,P,53,、,Ced-3,、,Ced-4,、,Fas/apo-1,等；,抑制凋亡基因,：,Ced-2,、,Ced-9,、,V-,raf,等,表,6,凋亡与疾病,（,七）,Mb,、,cTnI,检测,Mb,检测意义,（,1,）,AMI,发病早期,1,4,小时升高,（,2,）,AMI,发病,6,10,小时均升高,（,3,）,AMI,发病,24,小时内可恢复到正常,（,4,）,Mb,含量与心肌细胞损伤呈正相关,（,5,）,Mb,双峰提示再梗死或再扩展,缺点：骨骼肌损伤,Mb,升高,cTnI,检测意义,意义：（,1,）,AMI,发病后,3,6,小时血中,cTnI,开始升高,（,2,）,AMI,发病,14,20,小时达高峰,（,3,）,AMI,发病,5,7,天（平均,99,小时）恢复正常,（,4,）,cTnI,峰值是判断梗死面积及心功能的参考,指标,（,5,）,1/3,的,UA,其,cTnI,轻度增高，预后差,优点：（,1,）分子量小，易释放人血,（,2,）灵敏度高、特异性强,（,3,）与骨骼肌损伤无关,（,4,）升高持续时间长：,AMI,早期，后期均具诊,断价值,（八）淋巴细胞免疫表型分类,1.,成熟,B,和,T,细胞在光镜下难区分,2.,按淋巴细胞的,CD,抗原或表面受体不同进行分类,3.,采用,A,P,AA,P,法或免疫荧光法,(FCM),B-ALL型,T-ALL型,谢谢,苏州大学附属一院 检验科,顾国浩,临床免疫检测及其应用,一、概述,二、,临床免疫检测的任务和范围,三、免疫检测技术的发展,四、临床免疫检测的热点,4,、,T,细胞亚群检测,T,细胞：,CD,3,60%-80%,CD,4,30%-55%,CD,8,20%-30%,CD,4,/CD,8,1.5,-2.0,方法,:A,P,AA,P,法,FCM,测定,