实验细胞化学染色POX.pptx

,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,细胞化学染色,沧州医专医学技术系 侯振江,1/73,细胞化学染色,，是一个以,形态,为基础，结合利用,化学,或,生物化学,技术对血细胞内各种化学成份作,定位,、,定性,及,半定量,分析方法。,用于研究,血细胞生理,、,病理,和化学结构；,临床上为一些血液病诊疗、判别诊疗、疗效观察、预后监测和发病机制探讨，提供主要依据。,2/73,血细胞化学染色基本要求是在,原位,显示细胞成份和结构，反应产物应是,有色沉淀物,，含有一定,稳定,性。,血细胞化学染色可显示,糖原,、,脂类,、,酶,、,蛋白质,等。,3/73,（一）,固定,固定有,物理法,与,化学法,，,物理法,为干燥和火焰固定，,化学法,最惯用是甲醛、乙醇、丙酮和醋酸等。,血细胞化学染色流程,4/73,（二）,显示,1,、,偶氮偶联法,：利用人工合成酶底物，在酶作用下，产生分解产物，再与重氮盐结合引发偶氮偶联，使其形成不溶性偶氮色素，以此证实酶存在。,2,、,联苯胺法,：粒细胞和单核细胞中过氧化物酶作用于过氧化氢，释放新生态氧，使无色联苯胺形成蓝色沉淀。,5/73,3,、,普鲁士蓝法,：细胞内、外铁与酸性亚铁氰化钾作用，形成蓝色亚铁氰化铁沉淀。,4,、,雪夫反应,：过碘酸氧化细胞内糖类中乙二醇基形成乙醛基，醛基与雪夫试剂作用，使无色品红形成红色沉淀。,5,、,金属从容法,其它还有物理学方法，如脂溶性染料染色（显示脂质）、荧光显示、放射自显影以及体外活体染色亦惯用于临床血液细胞学诊疗。,6/73,（三）,细胞化学定量,粗略估量,，以染色反应强弱，受色深浅，人为地域别为阴性和各种程度阳性。,百分法,，只能反应细胞阳性率，不能反应受色强弱。,积分法,，是惯用半定量法，将等级估量与百分率相结合它既反应了细胞阳性率高低，又反应了细胞受色强弱。,7/73,下面介绍几个惯用细胞化学染色方法,这些方法学在白血病判别诊疗上含有主要意义。,8/73,一、过氧化物酶染色（,POX,）,（一）,四甲基联苯胺法,(TMB),【,原理,】,粒细胞,和,单核细胞,胞浆内髓,过氧化物酶,（,POX orMPO,）分解,过氧化氢,，释放,新生态氧,，使,无色,联苯胺氧化成,蓝色,联苯胺，后者深入变成,棕色,化合物从容于,细胞质,内。,9/73,POX,新生态氧,O,过氧化氢,（基质中）,四甲基联苯胺,TMB,（无色）,联苯胺蓝（蓝色）,亚硝基铁氰化钠,蓝色颗粒,（浆内酶部位）,粒、单核,细胞胞浆,【,原理,】,四甲基苯醌二胺,(,棕色,),自我脱氢氧化,10/73,【,试剂,】,1%TMB,亚硝基铁氰化钠饱和溶液,1%,过氧化氢溶液,稀过氧化氢溶液,瑞氏染色液,11/73,【,操作,】,1.,取,0.1%TMB,乙醇溶液,lml，,加亚硝基铁氰化钠饱和溶液,10,l,，,混合溶液呈淡,棕黄色,。,2.,在新鲜干燥血片上，加混合溶液,0.5ml,放置,lmin,后，再加稀过氧化氢溶液,0.7ml，,染色,6min。,3.,瑞氏染液复染,15,20min。,4.,油镜镜检。,12/73,【结果】,细胞质内有,蓝黑色颗粒,者为阳性。,（）无颗粒从容；,（,）颗粒细小，分布稀疏；,（,+,）颗粒较粗，局灶分布；,（,+,）颗粒粗大，分布较密，占胞质,1/22/3,；,（,+,）颗粒粗大，呈团块分布；,（,+,）全部胞质均部满颗粒，可覆盖胞核。,13/73,14/73,骨髓片,POX,染色,15/73,【临床意义】,（,1,）,粒系,：,POX,主要分布在,粒细胞,和,单核细胞,内，伴随粒细胞,成熟,程度而逐步增强，中性分叶核粒细胞为,强,阳性,。,嗜酸,性粒细胞阳性程度,最强,，其阳性颗粒比中性粒细胞粗大，有折光。,碱性,粒细胞为,阴性,。,16/73,（,2,）,单核细胞,：,原始单,核细胞为,阴性,反应，,幼稚单,核细胞和,成熟单,核细胞呈,弱阳性,反应，颗粒细小，弥散分布。,17/73,（,3,）,其它细胞,淋巴,细胞、,浆,细胞、,幼红,细胞、,组织,细 胞、,巨核,细胞均呈,阴性,反应。,（,4,）,血小板过氧化物酶,主要定位于,幼稚型,巨核细胞核膜上，可作为原巨核细胞一个标志物，有利于,FAB M7,识别。,18/73,（,5,）,过氧化物酶染色,主要用于,判别急性白血病类型,，,急性髓细胞白血病多呈,阳性,反应，以,M3和M2,型反应最,强,，,MI和M5,型反应较,弱,，,故有利于区分,M3,和,M5,型。,急性淋巴细胞白血病,呈,POX,阴性,反应，故为,急性髓细胞,和,淋巴细胞白血病判别,主要指标。,19/73,注意事项,涂片应,新鲜制作、厚薄适宜,。,TMB,配制在,85,88,乙醇溶液中染色效果很好,，勿用,90,95,乙醇，不然细胞表面蛋白质很快凝固，妨碍试剂向胞内渗透而使显色反应减弱或消失。,过氧化氢溶液需新鲜配制,，其浓度与加入量不能随意更改。涂片中粒细胞看不见阳性颗粒，红细胞呈棕色或绿色，即表示过氧化氢过浓。若,过氧化氢加于血片上不产生气泡，则示无效,。,染色液适宜,pH,值应为,5.5,，若,pH,值,10,个铁颗粒。,正常范围：30,%90%，,平均60,%，,多见,型，少见,型，无,、,型。,66/73,细胞内铁,67/73,（,3,）,环形铁粒幼红细胞,：,指含铁颗粒,6,个,，其中,2/3,以上,铁颗粒,围绕核周排列成完整环形或不完整,环形,。,正常或非铁粒幼细贫血,无,环形铁粒幼细胞，,铁粒幼细贫血,中环形铁粒幼细胞,6%,。,68/73,环形铁粒幼细胞,69/73,【临床意义】,1,缺铁性贫血,时，,骨髓细胞外铁显著降低，为,“,一,”,“,士,”,，细胞内铁平均,5.9%,，仅为,I,型。,经有效铁剂治疗后，外铁增多。,所以骨髓铁染色是诊疗,缺铁性贫血,及指导,铁剂治疗,主要方法。,70/73,2,铁粒幼细胞性贫血,时，,外铁,“,2,”,一,“,3,”,，内铁平均,70%,，其铁粒粗大，以,型为主，出现较多环形铁粒幼细胞。,所以，本试验是诊疗,铁粒幼细胞贫血,有效方法。,MDS,也可出现环形铁粒幼细胞。,71/73,3,.非缺铁性贫血,如巨幼细胞贫血、溶血性贫血、再生障碍性贫血等骨髓铁正常或不一样程度增加。,但再生障碍性贫血不会出现环形铁粒幼细胞，可作为与,MDS,判别参考。,4,.继发性贫血部分患者细胞内铁可降低，但细胞外铁不降低。,72/73,谢谢！,73/73,