大肠菌群计数检验.ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,*,大肠菌群计数检验,大肠菌群是指一群在,37,C,培养,24,小时能分解乳糖产酸产气、需氧及兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌。,作为粪便污染指标，有广泛的卫生学意义,食品中大肠菌群数系以每,100g,（或,mL,）检样内大肠菌群最可能数（,themostprobablenumber-,简称,MPN,）表示。,旧国家标准,第一法 大肠菌群,MPN,计数法,第二法 大肠菌群平板计数法,第一天,第,1,、,3,、,5,、,7,小组：使用第一法（附带做第二法中，两个平板接种），以自来水为样品。,第,2,、,4,、,6,小组：使用第二法（附带做第一法中，,3,个试管初发酵试验），以污水为样品。,第一法：检样稀释与初发酵试验,MPN,：表示食品中大肠菌群数是以每,100ML,或克检样内大肠菌群最大可能数。一般采用,9,管法,.,一般样品,25ML,（克）,+225ML,生理盐水,=1,：,10,，从,10,-1,取样,1ML,，接种到,3,管,LST,（月桂基硫酸盐胰蛋白胨肉汤）中。,从,10,-1,取样,1ML+9 ML,生理盐水,=1,：,100,，从,10,-2,取样,1ML,，接种到,3,管,LST,中。,从,10,-2,取样,1ML+9 ML,生理盐水,=1,：,1000,，从,10,-3,取样,1ML,，接种到,3,管,LST,中。,第二法：检样稀释与平板计数,检样稀释：同上。,平板计数：,1,、每个稀释度接种,2,个无菌平皿，每皿,1mL,稀释样品，另外一个平皿加,1mL,生理盐水作空白对照。,2,、及时将,1520mLVRBA,（结晶紫中性红胆盐琼脂）倾注每个平皿中。,3,、待琼脂凝固后，再加,34mLVRBA,覆盖表层。翻转平板培养。,第二天,第一法 复发酵试验,用接种环从产气的,LST,肉汤管中分别取培养物,1,环，移种于煌绿乳糖胆盐肉汤（,BGLB,）管中，,36,1,培养,48h,2h,，观察产气情况。产气者，计为大肠菌群阳性管。,第二法 平板菌落数的选择与证实试验,平板菌落数的选择,选取菌落数在,15CFU,150CFU,之间的平板，分别计数平板上出现的典型和可疑大肠菌群菌落。典型菌落为紫红色，菌落周围有红色的胆盐沉淀环，菌落直径为,0.5mm,或更大。,证实试验,从,VRBA,平板上挑取,10,个不同类型的典型和可疑菌落，分别移种于,BGLB,肉汤管内，,36,1,培养,24 h,48 h,，观察产气情况。凡,BGLB,肉汤管产气，即可报告为大肠菌群阳性,。,（,2,）原理,溴甲酚紫，中性时呈蓝紫色，酸性时呈黄色，如果颜色不变（呈蓝紫色），说明无产酸的大肠菌群；如果颜色变黄色，说明可能出现能分解乳糖,产酸,的大肠菌群。,胆盐可以抑制其它细菌生长繁殖。,分解乳糖产酸,产气,的大肠菌群，看小倒管中的气体。,1,产气,2,不产气,杜氏发酵管产气情况,第四天：大肠菌群计数报告,第一法：,确证大肠菌群,LST,阳性管数，检索,MPN,表（见附录），报告每,g,（,mL,）样品中大肠菌群的,MPN,值。,第二法：,经最后证实为大肠菌群阳性的试管比例乘以结晶紫中性红胆盐琼脂（,VRBA,）中计数的平板菌落数，再乘以稀释倍数，即为每,g,（,mL,）样品中大肠菌群数。例：,10,-4,样品稀释液,1mL,，在,VRBA,平板上有,100,个典型和可疑菌落，挑取其中,10,个接种,BGLB,肉汤管，证实有,6,个阳性管，则该样品的大肠菌群数为：,100,6/10,10,4,/g,（,mL,）,=6.0,10,5,CFU/g,（,mL,）。,