上课微生物的实验室培养课件.ppt

单击此处编辑标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,上课微生物的实验室培养,*,单击此处编辑标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,上课微生物的实验室培养,*,单击此处编辑标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,上课微生物的实验室培养,*,上课微生物的实验室培养,巴斯德,法国，微生物学家,失败的原因：发酵物中混入了杂菌,2,上课微生物的实验室培养,课题,1,微生物的实验室培养,3,上课微生物的实验室培养,1.,何为培养基？,3.,各种培养基的具体配方不同，但其基本成分都相同，都包括哪些营养成分？,自主学习,:,2.,按照物理形态、化学成分，培养基的种类有哪些？,基础知识,(,一,),培养基,4,上课微生物的实验室培养,人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质。,(,一,),培养基,1.,概念：,5,上课微生物的实验室培养,液体培养基,固体培养基,据物理性质分,2.,类型及应用：,常用于工业生产,用于微生物的分离、鉴定、计数,加琼脂,半固体培养基,6,上课微生物的实验室培养,琼脂：,7,上课微生物的实验室培养,液体培养基：,表面生长,均匀混浊生长,沉淀生长,8,上课微生物的实验室培养,1.,培养基：,微生物生存的环境和营养物质,1.,基本成分：,思考：微生物“吃”什么？,碳源、氮源、水、无机盐,碳源,无机碳源：,有机碳源：,CO,2,、,CO,3,2,-,、,HCO,3,-,牛肉膏、蛋白胨等,自养微生物,异养微生物,9,上课微生物的实验室培养,氮源,无机氮源：,有机氮源：,NH,4,、,NO,3,-,牛肉膏、蛋白胨、酵母膏、尿素等,注：含,C,、,H,、,O,、,N,的,有机物,是,异,养型微生物的：,碳源,、,氮源,、,能源。,10,上课微生物的实验室培养,(,一,),培养基,3.,营养要素,还需满足微生物生长对,pH,、,特殊营养物质,以及,氧气,的要求。,如,:,生长因子,(,即细菌生长必需，而自身不能合成的化合物,如维生素、某些氨基酸、碱基,),并非所有微生物都需添加特殊营养物质,此外：,11,上课微生物的实验室培养,牛肉膏蛋白胨培养基配方,牛肉膏,5.0g,蛋白胨,10.0g,NaCl 5.0g,将上述物质溶解后，用蒸馏水定容至,1000ml,。,配方中的各成分为微生物提供了哪些营养？,(,一,),培养基,3.,营养要素：,碳源、氮源、磷酸盐和维生素,氮源和维生素,无机盐,H,2,O,12,上课微生物的实验室培养,天然培养基（含有天然成分：,如：牛肉膏、蛋白胨等）,合成培养基,据化学成分分,2.,类型及应用：,常用于工业生产,常用于分类、鉴定,13,上课微生物的实验室培养,液体培养基,固体培养基,据物理性质分,天然培养基,合成培养基,据化学成分分,选择培养基,鉴别培养基,据用途分,2.,类型及应用：,(,一,),培养基,常用于工业生产,用于微生物的分离、鉴定、计数,加琼脂,常用于工业生产,常用于分类、鉴定,培养、分离出特定微生物,鉴别不同种类的微生物,在培养基中加入某种化学物质，以抑制不需要的微生物的生长，促进所需要的微生物的生长。,根据微生物的代谢特点，在培养基中加入某种指示剂或化学药品配制而成。,14,上课微生物的实验室培养,练习,下列有关培养基的叙述正确的是（）,A.,培养基是为微生物的生长繁殖提供营养的基质,B.,培养基只有两类：固体培养基和液体培养基,C.,固体培养基中加入少量水即可制成液体培养基,D.,微生物在固体培养基上生长时，可以形成肉眼可见的单个细菌,A,15,上课微生物的实验室培养,要从多种细菌中分离某种细菌，培养基要用（）,A.,固体培养基,B.,液体培养基,C.,加入青霉素的培养基,D.,加入高浓度食盐的培养基,A,练习,16,上课微生物的实验室培养,下列叙述错误的是（）,A.,培养乳酸菌时需要在培养基中添加维生素,B.,培养霉菌时需将培养基中的,pH,调至碱性,C.,培养细菌时需将,pH,调至中性或微碱性,D.,培养厌氧微生物时则需要提供无氧的条件,B,练习,17,上课微生物的实验室培养,碳源、氮源、生长因子的比较,含义,功 能,碳源,氮源,生长因子,凡能提供所需碳元素的物质,凡能提供所需氮元素的物质,生长必不可少的微量有机物,构成细胞物质和一些代谢产物，有些还是异养生物的主要能源物质,合成蛋白质、核酸以及含氮的代谢产物,酶、核酸等的组成成分,18,上课微生物的实验室培养,1,、何为无菌技术？无菌技术包括哪些方面？,2,、消毒和灭菌的区别？,3,、常用的消毒方法有哪些？,4,、常用的灭菌方法有哪些？,自主学习：,(,二,),无菌技术,19,上课微生物的实验室培养,1.,获得纯净培养物的关键：,防止外来杂菌的入侵,2.,无菌技术包括：,1,、对,实验操作的空间、操作者的衣着和手,，进行清洁和消毒；,2,、用于,微生物培养的器皿、接种用具和培养基,等进行灭菌；,(,二,),无菌技术,P15,思考题,20,上课微生物的实验室培养,3,、为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在,酒精灯火焰附近,进行；,4,、实验操作时应,避免,已经灭菌处理的材料用具与周围物品,接触,。,21,上课微生物的实验室培养,练习,下列操作与无菌技术无关的是（）,A.,接种前用肥皂洗双手，再用酒精擦拭双手,B.,接种前用火焰烧灼接种针,C.,培养基在,50,左右时搁置斜面,D.,在酒精灯火焰旁边完成,C,22,上课微生物的实验室培养,消毒,使用较为,温和,的物理或化学方法，杀死物体,表面或内部,的,部分,微生物,(,不包括芽孢和孢子,),。,3.,消毒与灭菌,灭菌,使用,强烈,的理化因素杀死物体内外,所有,的微生物，包括,芽孢和孢子,。,理化因素的作用强度,消灭微生物的数量,芽孢和孢子能否被消灭,(1),定义,23,上课微生物的实验室培养,1,、,煮沸消毒法,:,100,煮沸,5-6min,，日常生活中广泛应用,2,、,巴氏消毒法,：,70-75,煮,30min,或,80,煮,15min,，牛奶、啤酒等,不宜进行高温消毒的,3,、,化学药剂消毒法,:,75%,酒精、氯气、石炭酸、煤酚皂溶液等,4,、,紫外线消毒法：,用于接种室空气消毒,(2),消毒的方法：,3.,消毒与灭菌,24,上课微生物的实验室培养,1,、灼烧灭菌：,用于微生物接种工具，如：接种环、接种针或其他金属用具等，及接种过程中试管口或锥形瓶口的灭菌,(3),灭菌的方法：,3.,消毒与灭菌,25,上课微生物的实验室培养,2,、,干热灭菌：,160-170,下加热,1-2h,。,用于玻璃器皿、金属用具等能耐高温、,需保持干燥的物品。,3,、,高压蒸气灭菌：,100kPa,、,121,下维持,15-30min.,广泛用于培养基及多种器材、物品。,(3),灭菌的方法：,3.,消毒与灭菌,26,上课微生物的实验室培养,P16,请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。如果需要，请选择合适的方法。,（,1,）培养细菌用的培养基与培养皿,（,2,）玻棒、试管、烧瓶和吸管,（,3,）实验操作者的双手,答：（,1,）（,2,）需要灭菌；（,3,）需要消毒,。,旁栏思考,27,上课微生物的实验室培养,练习,细菌培养过程中分别采用了高压蒸汽、酒精、火焰灼烧等几种不同的处理方法，这些方法依次用于杀灭哪些部位的杂菌（）,A.,接种针、手、培养基,B.,高压锅、手、接种针,C.,培养基、手、接种针,D.,培养基、手、高压锅,C,28,上课微生物的实验室培养,变形题,培养基、培养皿、接种环、实验操作者的双手、空气、牛奶所采用的灭菌、消毒方法依次是（）,化学消毒 灼烧灭菌,干热灭菌 紫外线消毒,高压蒸汽灭菌 巴氏消毒法,A.B.,C.D.,A,29,上课微生物的实验室培养,关于微生物营养物质的叙述中，正确的是（）,A.,是碳源的物质不可能同时是氮源,B.,凡碳源都提供能量,C.,除水以外的无机物只提供无机盐,D.,无机氮源也能提供能量,D,练习,规律：对异养微生物来说，含,C,、,H,、,O,、,N,的,化合物既是微生物的碳源，又是氮源；,有机碳源能提供能量，无机碳源不能提供能量；,无机物也可提供碳源、氮源和能源。,30,上课微生物的实验室培养,二、实验操作,1.,制备牛肉膏蛋白胨培养基（用于培养细菌）,31,上课微生物的实验室培养,培养皿,32,上课微生物的实验室培养,二,.,实验操作,(,以培养大肠杆菌为例,),.,制备牛肉膏蛋白胨培养基,1.,计算,2.,称量,3.,溶化,4.,灭菌：,将锥形瓶放入高压蒸气灭菌锅，在压力,100kPa,、温度为,121,，灭菌,15,30min,。,5.,倒平板,:,待培养基冷却到,50,左右时，在酒精灯附近倒平板。,2d,后观察平板，无杂菌污染才可用来接种。,33,上课微生物的实验室培养,倒平板操作,34,上课微生物的实验室培养,2.,无菌范围：,实验操作空间消毒,操作者的手、衣着消毒,实验用具灭菌,实验操作过程,二,.,无菌技术：,防止外来杂菌的污染,1.,消毒与灭菌：,酒精灯旁操作,超净工作台,35,上课微生物的实验室培养,答：可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到,刚刚不烫手,时，就可以进行倒平板了。,2.,为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？,答：通过灼烧灭菌，,防止瓶口的微生物污染,培养基。,问题讨论,1.,培养基灭菌后，需要冷却到,50,左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？,36,上课微生物的实验室培养,3.,平板冷凝后，为什么要将平板倒置？,4.,在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？,答：,平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以,防止皿盖上的水珠落入培养基,，造成污染。,答：空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，因此,最好不要用,这个平板培养微生物。,37,上课微生物的实验室培养,三,.,菌落,38,上课微生物的实验室培养,单个,或少数菌体,2.,特征：,大小、形状、光泽度、,颜色、透明度等。,3.,功能：,1.,定义：,三,.,菌落,鉴定菌种,的重要依据,固体,培养基上,大量繁殖,子细胞群体,39,上课微生物的实验室培养,2,、纯化大肠杆菌,:,接种方法有：,平板划线法,和,稀释涂布平板法,平板划线法,:,通过接种环在琼脂固体培养基表面连续画线的操作,将聚集的菌钟逐步稀释分散到培养基的表面,.,在数次画线后,可以分离到由,一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体,这就是,菌落,.,微生物的接种技术,40,上课微生物的实验室培养,41,上课微生物的实验室培养,微生物的恒温培养,43,上课微生物的实验室培养,微生物的恒温培养,44,上课微生物的实验室培养,6,支试管，分别加入,9ml,无菌水,1ml,10,1,1ml,10,2,1ml,10,3,1ml,10,4,1ml,10,5,1ml,10,6,稀释涂布平板法：,a.,梯度稀释菌液：,菌液,微量 移液器,45,上课微生物的实验室培养,稀释涂布平板法：,a.,梯度稀释菌液：,b.,涂布平板：,不超过,0.1ml,滴,灼,试,涂,46,上课微生物的实验室培养,稀释,10,3,倍,稀释,10,4,倍,稀释,10,5,倍,各梯度分别涂布,3,个平板,1,个不涂布作空白对照,47,上课微生物的实验室培养,1).,为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？,答：操作的,第一步,灼烧接种环是为了,避免,接种环上可能存在的,微生物污染培养物,；,每次,划线前灼烧接种环是为了,杀死上次,划线结束后，接种环上,残留的菌种,，,使下一次,划线时，接种环上的菌种直接,来源于上次划线的末端,，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到菌落。,划线,结束后,灼烧接种环，能及时,杀死,接种环上,残留的菌种,，,避免,细菌,污染环境,和,感染操作者,。,48,上课微生物的实验室培养,2).,在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？,答：,以免,接种环温度太高，,杀死菌种,。,3).,在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线,？,答：划线后，线条,末端,细菌的,数目,比线条起始处要,少,，每次从上一次划线的末端开始，能,使细菌的数目,随着划线次数的增加而,逐步减少,，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。,49,上课微生物的实验室培养,四、课题成果评价,（一）培养基的制作是否合格,如果未接种的培养基在恒温箱中保温,1,2 d,后,无菌落生长,，说明培养基的制备是,成功,的，否则需要重新制备。,50,上课微生物的实验室培养,（二）接种操作是否符合无菌要求,如果培养基上生长的菌落的,颜色、形状、大小基本一致,，并符合大肠杆菌菌落的特点，则说明接种操作是,符合要求,的；如果培养基上出现了其他菌落，则说明接种过程中，无菌操作还未达到要求，需要分析原因，再次练习。,51,上课微生物的实验室培养,（三）是否进行了及时细致的观察与记录,培养,12 h,与,24 h,后的大肠杆菌菌落的大小会有明显不同，及时观察记录的同学会发现这一点，并能,观察,到其他一些,细微的变化,。这一步的要求主要是培养学生良好的科学态度与习惯。,52,上课微生物的实验室培养,菌种的保存,1),、临时保藏：接种到固体斜面培养基，菌落长成后置于,4,冰箱保存。,2),、长期保存：甘油冷冻管藏法，,-20,固体斜面,53,上课微生物的实验室培养,本课题知识小结,:,54,上课微生物的实验室培养,【,典例解析,】,例,1,关微生物营养物质的叙述中，正确的是,:,A.,是碳源的物质不可能同时是氮源,B.,凡碳源都提供能量,C.,除水以外的无机物只提供无机盐,D.,无机氮源也能提供能量,解析：,无机氮源提供能量的情况还是存在的，,如,NH,3,可为硝化细菌提供能量和氮源。,D,55,上课微生物的实验室培养,例,2,下面对发酵工程中灭菌的理解,不正确,的是,:,A.,防止杂菌污染,B.,消灭杂菌,C.,培养基和发酵设备都必须灭菌,D.,灭菌必须在接种前,B,56,上课微生物的实验室培养,编号,成分,含量,粉状硫,10g,（,NH,4,）,2,SO,4,0.4g,K,2,HPO,4,4.0g,MgSO,4,9.25g,FeSO,4,0.5g,CaCl,2,0.5g,H,2,O,100ml,例,3,右表是某微生物培养基成分，请据此回答：,（,1,）右表培养基可培养的微生物类型是,（,2,）若不慎将过量,NaCl,加入培养基中。,如不想浪费此培养基，可再加入,.,用于培养 金黄色葡萄球菌,.,自养型微生物,含碳有机物,57,上课微生物的实验室培养,（,3,）若除去成分，加入（,CH,2,O,），该培养基可用于培养,。,（,4,）表中营养成分共有,类。,（,5,）不论何种培养基，在各种成分都溶化后分装前，要进行的是,。,（,6,）右表中各成分重量确定的原则是,（,7,）若右表培养基用于菌种鉴定，应该增加的成分是,。,固氮微生物,3,调整,pH,依微生物的生长需要确定,琼脂（或凝固剂）,编号,成分,含量,粉状硫,10g,（,NH,4,）,2,SO,4,0.4g,K,2,HPO,4,4.0g,MgSO,4,9.25g,FeSO,4,0.5g,CaCl,2,0.5g,H,2,O,100ml,58,上课微生物的实验室培养,谢谢大家,59,上课微生物的实验室培养,