阴道微生态评价和其适宜技术培训课件.ppt

,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,阴道微生态评价和其适宜技术,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,阴道微生态评价和其适宜技术,*,阴道微生态评价和其适宜技术,护理生殖道,关注微生态,最重要！,2,阴道微生态评价和其适宜技术,阴道,粘膜,阴道,正常,菌群,阴道,免疫,系统,阴道微生态概念,阴道防御系统,阴道微生态是阴道最重要的防御系统,3,阴道微生态评价和其适宜技术,阴道原籍菌(乳酸杆菌),数量:8x10,7,cfu/ml,5%,95%,1,2,3,正常育龄妇女阴道菌群由六种不同种类的,细菌以及念珠菌、支原体等组成,。,正常阴道内有100种微生物存在。,这些微生物在阴道内形成生态平衡。,阴道菌群（阴道的微生态系统）,阴道微生态概念,4,阴道微生态评价和其适宜技术,CFU(Colony-Forming Units),经培养所得菌簇形成单位的英文缩写。,细菌（可见）和真菌的测量单位。cfu:colony-,forming unit，,菌落形成单位,，将稀释后的一定量的菌液,通过浇注或涂布的方法，让其内的微生物单细胞一一分,散在琼脂平板上，待培养后，每一活细胞就形成一个菌,落。与常规利用显微镜对微生物数量进行测量不同，主,要是对可见（即多数情况下形成菌落）的细菌数量进行,测量的单位。,意思就是每毫升菌液中含有多少单细胞！,5,阴道微生态评价和其适宜技术,阴道粘膜上皮细胞,纵切面示意图,（过路菌）,乳杆菌（原籍菌）,（条件致病菌）,是由不同种属,的宿主传来的,是其自身宿主个体对其,无免疫反应或低免疫反应，,是宿主个体固有的菌群,是由同种属不同,宿主个体传来的,阴道微生态概念,6,阴道微生态评价和其适宜技术,乳杆菌的作用机制,分解糖原，维持阴道酸性环境,。,产生多种抑菌物质：,乙酸、16-18碳脂肪酸,H,2,0,2,、乳酸菌素、硬脂酸等。,竞争粘附：,也称占位性保护。,竞争营养物质：,大量定位于阴道中的乳杆菌处,于竞争优势状态，利用阴道上皮,细胞中的糖原，减少其他细菌的,碳源供应，通过竞争营养物质而,干扰一些厌氧菌如白色假丝酵母,菌（白念）的生长。,7,阴道微生态评价和其适宜技术,维持酸性环境,形成保护性菌膜,杀灭致病菌,乳酸杆菌,正常阴道菌群作用,阴道微生态平,衡的核心：,维持乳酸菌特别是产H,2,O,2,乳酸菌在阴道菌群中,的优势地位！,在阴道粘膜表面形成一层保护性菌膜，,防止入侵微生物在阴道粘膜上定植,乳酸菌产生的乳酸使阴道,分泌物维持酸性环境；,乳酸菌产生的H,2,O,2,可,杀灭入侵的致病菌。,阴道微生态概念,8,阴道微生态评价和其适宜技术,乳杆菌,数量减少,，,生,化指标改变,，,阴道,微生,态破坏,阴道菌,群失调,各类,阴道炎,加重,阴道菌,群失调,各种,诱因,各类阴道炎的共性,-源于或伴有微生态破坏！,为什么要关注阴道微生态,9,阴道微生态评价和其适宜技术,菌群演变造成菌群结构改变，特点：,1、厌氧菌需氧菌、等条件致病菌大量增加,2、乳酸菌特别是产过氧化氢乳酸菌减少或消失,所有的阴道感染都源于或伴有阴道微生态改变,10,阴道微生态评价和其适宜技术,乳酸菌%,厌氧菌%,加德纳菌%,支原体%,LB-,LB,正常,80-100,70-100,10-40,0-30,20-40,宫颈炎,10-40,10-30,30-50,20-40,60-80,BV,0-20,0-10,40-70,60-80,40-60,滴虫阴道炎,10-40,0-20,10-30,0-30,20-40,霉菌阴道炎,20-50,0-40,20-30,10-40,20-30,老年性阴道炎,0-20,0-10,40-60,20-40,50-60,11,阴道微生态评价和其适宜技术,通过形态学、生物化学、,免疫学和分子生物学 等,方法所获得的阴道菌群,数量和功能方面的信息,分析阴道,菌群结构,的演替,正常优势菌,的菌群数量,与功能变化,条件致病,微生,物菌,群数量与,功能变化,外来,致病,微生,物菌,群数量与,功能变化,机体反,应,水平,如何评价阴道微生态？,-,阴道微生态评价,的内涵,为什么要关注阴道微生态,12,阴道微生态评价和其适宜技术,形态学生物标志物,菌群数量与功能的变化,形态学评价-菌群数量的变化,：,形态学的方法,系统的方法,-阴道微生态评价内容,阴道微生态评价的内容,13,阴道微生态评价和其适宜技术,标本中细菌分布、排列的密集程度，即每克或每毫升标本中的菌落数。,分级标准,(放大倍10100观察每视野平均细菌数),I级（记为“+”）,1个9个,II级（记为“+”）,10个99个,III级（记为“+”）,100个以上,IV级（记为“+”）,细菌聚集成团,(涂片中所见细菌种类),I级（记为“+”）,能辨别13种细菌；,II级（记为“+”）,能辨别46种细菌；,III级（记为“+”）,能辨别710种细菌；,IV级（记为+）,能辨别11种以上细菌。,(局部有无炎症,-菌群的致病性),有无白细胞、脓细胞渗出，,有无吞噬现象等。,？,菌群的密集度,机体炎性反应,菌群的多样性,优势菌,阴道微生态形态学评价,存在的问题,形态学评价结果的可靠性,与实验室人员的技能和责任有关,不能了解阴道菌群中正常优势菌和有害菌的功能,阴道微生态评价的内容,14,阴道微生态评价和其适宜技术,A、,正常优势菌功能,生物学标志,B、,致病微生物与条件致病微生,物,增殖,的生物学标志,C、,机体反应性,的生物学标志,了解菌群数量的变化,形态学评价,生物标志物,了解菌群,数量与功,能的变化,阴道微生态,系统,评价,阴道微生态评价的内容,15,阴道微生态评价和其适宜技术,唾液酸苷酶,BV,门冬酰胺蛋白酶,霉菌性阴道炎,胱胺酰蛋白酶,滴虫性阴道炎,乳酸脱氢酶,急性化脓性阴道炎,透明质酸酶,BV、淋菌性阴道炎,白细胞酯酶,宫颈炎及各种阴道感染,短链脂肪酸（如乙酸、琥珀酸）增加,单胺和多胺增加（胺试验阳性）,菌胞壁糖类（如阿拉伯醇糖）增加,阴道微生态评价的方法,生物化学,方法,微生物学,方法,分子生物学,方法,免疫学,方法,1,优势菌(乳酸菌)功能,的生化标志物,2 致病与条件致病微生,物,增殖,的生化标志物,3 机体反应性,的生化标志物,乳酸菌代谢包括：过氧化氢、,乳 酸,乳酸菌素,微生物,代谢产物,细菌、衣原体等病原体大量增殖白细胞,吞噬病原体过多病原体释放的水解酶和,毒素分解白细胞壁白细胞酯酶释放到胞,外,分泌物中白细胞酯酶活性增高。,16,阴道微生态评价和其适宜技术,过氧化氢浓度,SNA,活性,LE,活性,生态优势菌指标,致病菌指标,宿主反应指标,卫生部十年百项计划推广项目,江西省星火计划项目,浙江省医药卫生科技重点推广项目,了解阴道菌群结构,和功能的变化，,评价阴道的微生态状况,阴道微生态评价适宜技术,阴道微生态评价适宜技术-,细菌性阴道病联合测定,技术介绍,17,阴道微生态评价和其适宜技术,标本采集要规范,各种病原体的性质和检测要求,的,不同，决定了标本的种类、取材部位、和保存条件标本运输方式等都有不同，采集标本上如有错误或疏忽，都会影响检验结果,。,标本采集的规范,18,阴道微生态评价和其适宜技术,检验原理,H,2,O,2,阴道乳酸杆菌标志物,唾液酸苷酶NAase加德纳菌、游动弯曲杆,菌等BV致病菌的标志物。,白细胞酯酶炎性细胞的标志物。,20,阴道微生态评价和其适宜技术,H,2,O,2（反应装置上部的反应孔）,阴道液中过氧化氢经过过氧化物酶作用，释放出新生态氧，后者在4-氨基安替吡啉存在下，使3,5-二氯-2-羟基苯磺酸氧化成红色或紫色，在反应系统中加入3,5-二氯-2-羟基苯磺酸的拮抗物，当标本中H,2,O,2,浓度2,mol/L，反应结果呈红色或紫色，呈色深度与,H,2,O,2,浓度成正比，标本中H,2,O,2,浓度,2,mol/L，反应结果呈蓝色。,结果判读：,阴性：显红色、紫色或蓝紫色,阳性：蓝色,参考范围：,2,mol/L为阴性,21,阴道微生态评价和其适宜技术,唾液酸苷酶活性测定,（反应装置中部的反应孔）,唾液酸苷酶水解5-溴-4-氯-3-吲哚神经氨酸盐，释放出溴吲哚基遇重氮盐起反应呈红色或紫色，呈色深度与唾液酸苷酶活性呈正比。,结果判读：,阴性：不显色或黄色,阳性：红色、紫色或蓝色，显蓝色表示唾液酸,苷酶活性浓度很高。,参考范围：,7U/ml为阴性,22,阴道微生态评价和其适宜技术,白细胞酯酶,（反应装置下部的反应孔）,白细胞酯酶水解5-溴-4-氯-3-吲哚乙酸盐，释放出溴吲哚基，后者在氧的条件下呈蓝色或绿色，呈色深度与白细胞酯酶活性成正比。,结果判读：参照比色板比色判读结果,阴性：“-”或“”,阳性：“+”、“+”、“+”,参考范围：白细胞酯酶,7U/ml为阴性,23,阴道微生态评价和其适宜技术,产过氧化氢乳酸,菌占优势地位,粘膜修复,炎症消失,无引发BV的,细菌繁殖,正 常,正 常,阴 性,异 常,增,高,阳 性,过氧化氢浓度,LE活性,SNa,活性,乳酸菌减少或消失,各种阴道感染,致病菌、条件致,病菌增加,阴道微生态评价适宜技术,24,阴道微生态评价和其适宜技术,纠正了以白细胞,升高才为“炎症”的,生殖道感染的概念,阴道感染诊断,治疗思路的新,突破,临床用途,指导妇产科临床医师从微生态角度重,新审视妇科感染性疾病；,关注感染及治疗后的阴道微生态状况，,树立,“将阴道微生态恢复正常作为阴道,炎治疗的最终目标”,的理念。,A、,弥补现有白带常规检查只做形态学检查、不做生化检查，不能准确判断感染的程度及阴道微生态、不能评价预后等不足；,B、,阴道微生态评价,C、,从微生态角度评价阴道炎是否治愈；,D、,阴道生态制剂的用药指标；,E、,了解产后阴道生态，确定是否恢复性生活；,F、,BV诊断与疗效评价，需氧菌阴道炎、衣原体感染筛查,。,阴道微生态评价意义,25,阴道微生态评价和其适宜技术,机体反应的生化标志物,白细胞对细菌的吞噬过程,阴道微生态评价的内容,26,阴道微生态评价和其适宜技术,白细胞数量与白细胞酯酶的关系,白细胞酯酶与被破坏的白细胞数量成正比,而白细胞数量与采样、涂片、月经周期有关,27,阴道微生态评价和其适宜技术,检测结果参考,28,阴道微生态评价和其适宜技术,序号,过氧化氢浓度,唾液酸苷酶,白细胞酯酶,临 床 判 读,1,2,mol/L,-,-,正常、无致病菌感染,2,2,mol/L,-,+,阴道清洁度下降，阴道炎症,3,2,mol/L,+,-,BV致病菌感染早期,4,2,mol/L,+,+,BV感染早期，并有可能伴有其他混合感染，如宫颈炎。,5,2,mol/L,+,-,细菌性阴道炎,6,2,mol/L,-,-,月经期、阴道冲洗后，,阴道生态平衡遭破坏,7,2,mol/L,-,+,其他生殖道感染,8,2,mol/L,+,+,细菌性阴道病，预后不良，伴有其他感染。,29,阴道微生态评价和其适宜技术,阴道分泌物检验结果,30,阴道微生态评价和其适宜技术,线索细胞（clue cell）,在脱落的阴道鳞状上皮细胞上粘附有大量的加德纳尔菌,上皮细胞互相粘连成团,细胞边缘不齐似锯齿壮,表面粗糙,有许多大小不等的颗粒或斑点,似撒有一层胡椒粉。核结构模糊不清或碎解,有时细胞呈溶解样。,31,阴道微生态评价和其适宜技术,32,阴道微生态评价和其适宜技术,