儿童听力筛查未通过的原因及耳聋基因检测分析.pdf

Chin J Otorhinolaryngol Integ Med 2023.Vol.31.No.51 扬州大学临床医学院，苏北人民医院耳鼻咽喉头颈外科（江苏扬州，225001）通信作者：关兵，主任医师.Email:耳聋是耳鼻喉科门诊就诊较多的一类疾病，也是临床上最常见的遗传病之一。在我国的听力残疾者中，0耀6 岁听障儿童有 80 万，每年新生听障儿童在 3 万人（比例为 3%）以上，多以中重度及极重度聋为主，若加上迟发性耳聋和药物性耳聋患者，每年新增加的聋儿可达 6 万多人。通过常见耳聋基因筛查可以诊断其中 40豫的病例，GJB2、SLC26A4、线粒体基因及 GJB3 基因突变是造成中国人聋病的主要遗传致病因素1。我国虽已经普遍实行新生儿听力筛查制度，但仍有部分患儿不能及时发现而错过窑 临床研究 窑doi:10.16542/ki.issn.1007-4856.2023.05.002儿童听力筛查未通过的原因及耳聋基因检测分析王莹1关兵1徐丽1于爱民1常玲美1揖摘要铱 目的 探讨儿童听力筛查未通过原因及耳聋基因筛查的意义。方法 扬州市就诊我院门诊的 14 岁及以下入学儿童听力筛查未通过 245 人，所有儿童均行声导抗及耳声发射检查，5 周岁及以上儿童进行纯音测听检查，5 周岁以下儿童进行行为测听检查，不能配合者行 ABR 检查。基因筛查采用 4 个基因（GJB2、SLC26A4、12SrRNA 和 GJB3）20 个位点的高通量测序。结果复测通过 64 人（26.12%），耵聍栓塞及外耳道疾病 31 人（12.65%），分泌性中耳炎 132 人（53.88%），急慢性中耳炎 12 人（4.90%），先天性中耳胆脂瘤 2 人（0.82%），小儿听神经病 1 人（0.41%），感音神经性聋 1 人（0.41%），大前庭水管综合征 2 人（0.82%）。GJB2 基因杂合突变 9 人（3.67%），未筛查出纯合突变或复合杂合突变；SLC26A4 基因杂合突变 1 人（0.41%），纯合突变 1 人（0.41%）；线粒体 12SrRNA 基因突变携带 1 人（0.41%），未发现 GJB3 基因突变携带者。结论 听力和耳聋易感基因联合筛查对发现耳聋和迟发性耳聋具有协同作用，解除病因和给予正确指导可降低耳聋的发生率。揖关键词铱 听力筛查；耳聋基因；耳聋Etiology of hearing screening failure in children and analysis of deafness genedetectionWANGYing,GUAN Bing,XU Li,YU aimin,CHANG linmeiDept of Otorhinolaryngology,Northern Jiangsu People爷s Hospital Affiliated to Yangzhou University,Yangzhou,Jiangsu,225001,China【Abstract】Objective To explore the causes of hearing screening failures and the significance of deafness gene screening inchildren.Methods Acoustic immittance tests and transiently distortion product otoacoustic emission(DPOAE)tests were conducted in245 school children under the age of 14 in Yangzhou who were referred after failing hearing screening bilaterally or unilaterallyChildren aged 5 years or older also underwent pure tone hearing threshold testing while those under 5 years underwent behavioralaudiometry testing.Those who could not cooperate receivedauditory brainstem responses(ABR)testing.Gene screening usedhigh-throughput sequencing of 20 loci of 4 genes(GJB2,SLC26A4,12SrRNA and GJB3).Results Sixty-four children(26.12%)passedthe second screening,Potential causes for failing screening included cerumen embolism and external auditory canal diseases(n=31,12.65%),secretory otitis media(n=132,53.88%),acute or chronic otitis media(n=12,4.90%),congenital cholesteatoma(n=2,0.82%),auditory neuropathy in children(n=1,0.41%),sensorineural deafness(n=1,0.41%),enlarged-vestibular-aqueduct-syndrome(n=2,0.82%).There were 9（3.67%）GJB2 carriers,and no homozygous mutation or heterozygous mutation was found;There were 2（0.82%）SLC26A4 carriers,among whom1 showed homozygous mutation without heterozygous mutation.There was one mitochondrial 12S rRNAmutation（0.41%）and no GJB3 mutation was found.Conclusion The combined screening of hearing and deafness susceptibility geneshas a synergistic effect on the discovery of deafness and late-onset deafness.Relieving the etiology and giving correct guidance canreduce the incidence of deafness.【Key words】hearing Screening;deafness Genes;deafness325中国中西医结合耳鼻咽喉科杂志 2023 年第 31 卷第 5 期检测出 9 人为 GJB2 基因杂合突变，听力检查均正常，未测出纯合或复合杂合突变；测出 SLC26A4（IVS7-2AG 位点）杂合突变 1 人，为 14 岁女孩，IVS7-2AG 位点纯合突变 1 人，为 4 岁女孩，均为最佳治疗时机。2019 年 6 月耀2021 年 11 月本院对本市部分学校的 14 岁及以下入学儿童共 6235 人进行了 DPOAE 和耳语试验的听力筛查，其中未通过 245 人，245 人听筛未通过者均进行声导抗及耳声发射检查，同时 5 周岁及以上儿童进行纯音测听检查，5 周岁以下儿童进行行为测听检查，不能配合者行 ABR 检查。基因筛查采用 4 个基因（GJB2、SLC26A4、12SrRNA 和 GJB3）20 个位点的高通量测序，以期明确病因，为其康复治疗及遗传咨询提供指导。资料与方法1 一般资料接受研究的对象为 2019 年 6 月耀2021 年 11 月江苏省扬州市开学行 DPOAE 和耳语试验听力筛查未通过学生 245 人，男 142 人，女 103 人，年龄 4耀14岁，平均 6依1.5 岁，所有儿童均收集详细临床资料并常规体检，排除外伤及可能影响听力的其他系统疾病，如脑膜炎、先天性畸形等。2 方法2.1 听力学检查所有儿童均行声导抗及耳声发射检查，5 周岁及以上儿童进行纯音测听检查，5 周岁以下儿童进行行为测听检查，不能配合者行 ABR 检查。2.2 基因检查所有儿童指尖采集 3ml 末梢静脉血，涂于耳聋基因检测卡片上，送往天津华大基因科技有限公司科学研究所对其最常见的 4 个耳聋基因的 20 个位点进行检测，包括：GJB2 基因（176_191del16、35delG、299_300delAT、235delC），SLC26A4(PDS)基因（IVS7-2AG、589GA、1174AT、281CT、1226GA、IVS15+5G A、1229C T、1975G C、2162C T、2027T A、2168AG），mtDNA 12SrRNA（1494CT、1095TC、1555AG），GJB3 基因（547GA、538CT）。3 诊断标准3.1 分泌性中耳炎耳镜下见鼓膜内陷黄染或有液平面，声导抗示B 型或 C 型曲线，双耳镫骨肌反射消失；ABR 波 I潜伏期明显延长，鼓膜穿刺抽出液体可确诊2。3.2 听神经病临床主要表现为患者能听到其音却不能理解其意，言语识别率与纯音测听不成比例下降，声导抗图呈 A 型，镫骨肌反射不能引出或阈值升高3，耳声发射和耳蜗微音电位可引出；ABR 明显异常或引不出。3.3 大前庭水管综合征（LVAS）高分辨率 CT 水平位示上半规管总脚到前庭水管外口 1/2 处的直径1.5mm,被认为前庭水管扩大4。结果1 耳鼻喉科诊断结果，见表 1。表 1 245 人耳鼻喉科诊断结果1 例听神经病经治疗听力恢复欠佳，大前庭水管综合征 2 人佩戴助听器，并建议行人工耳蜗植入手术，保守治疗后听力未能恢复。余经治疗后听力基本恢复正常，见表 2。2 基因检查结果疾病人数占比耵聍栓塞2610.61%耳内异物10.41%外耳道胆脂瘤10.41%外耳道炎31.22%分泌性中耳炎13253.88%急性中耳炎93.67%慢性化脓性中耳炎31.22%先天性中耳胆脂瘤20.82%小儿听神经病10.41%感音神经性聋10.41%大前庭水管综合征20.82%未查出耳部疾病6426.12%总人数245100.00%表 2 基因检测结果（总人数=245 人，检出阳性结果人数 12 人，GJB2 基因未检出）基因名称基因型GJB2c.235delC/Wt检出人数（人）1c.176del16/Wt3检出率0.41%1.22%疾病诊断正常正常c.299delAT/Wt52.04%正常SLC26A4c.IVS7-2AG/c.IVS7-2AG10.41%LVASc.IVS7-2AG/wt10.41%LVASmtDNA12SrRNAc.1555AG10.41%正常合计124.90%正常326Chin J Otorhinolaryngol Integ Med 2023.Vol.31.No.5中重度感音神经性聋，双耳平均听力为 50耀70dB,颞骨 CT 平扫示前庭水管扩大明显，余耳部结构未见异常，声导抗为 A 型曲线。线粒体 12SrRNAc.1555AG 突变 1 人，7 岁女孩，听力目前正常，嘱其避免使用耳毒性药物，未发现 GJB3 基因携带者。3 新生儿听力筛查结果245 人均接受过新生儿听力筛查，初筛为出生后 72 小时，复筛为出生后 42d，仍不能通过者，出生后 3 个月行听力学诊断。245 人有 2 人 42d 听力复筛未通过，3 个月时检查发现其中 1 人为单耳神经性听力下降，1 人为双耳前庭水管扩大患儿，见表 3。表 3新生儿听力筛查结果（总人数=245）讨论耳聋是人类最常见的致残疾病之一，严重影响着人类的生存质量。某些病毒感染及环境因素可导致耳聋发生,如巨细胞病毒、风疹病毒感染，脑外伤、早产、出生前或出生后感染等。其中大约 60%的耳聋是由遗传因素引起的5，50%以上的重度先天性耳聋跟遗传有关6。目前已被发现的耳聋基因有 200 多种7，但绝大多数遗传性聋仅与几个耳聋基因变异有关。我国遗传性耳聋主要由 GJB2、SLC26A4、GJB3和线粒体 12SrRNA 基因突变引起8。目前我国新生儿听力筛查已日趋成熟且达到了全覆盖，对新生儿听力障碍的早发现起到了积极的作用，为后期的早诊断、早干预打下了基础，极大的降低了因聋致哑的发生率。较多文献报道听力和聋病易感基因联合筛查可发现部分听力筛查不能发现的药物性聋和迟发性聋患儿9，10，有待全国进一步普及。扬州市大部分幼儿园及小学常规每年进行一次听力筛查，该次筛查总人数为 6235 人，未通过245 人（245/6235,3.93%）。本研究收集听力检查未通过儿童 245 例，进行常规听力检查及耳聋易感基因检测，进行总结分析。发现复测听力通过 64 人（26.12%），耵聍栓塞及外耳道疾病 31 人（12.65%），分泌性中耳炎 132 人（53.88%），急慢性中耳炎 12人（4.90%），先天性中耳胆脂瘤 2 人（0.82%），小儿听 神 经 病 1 人（0.41%），感 音 神 经 性 聋 1 人（0.41%），大前庭水管综合征 2 人（0.82%）。大部分听力未过者为分泌性中耳炎，此疾患在学龄前儿童高发，儿童人群普查分泌性中耳炎的发生率为 15%耀40%11，叶辉等12研究亦发现分泌性中耳炎在听筛未通过学龄前儿童中占比率较高，达 52.18%，由于本文筛查人群不仅仅是学龄前，还包含小学的 14岁以下入学人群，故听力筛查结果较学龄前儿童低（132/6235，2.12%),但在听力筛查未通过 245 人中占比例仍然很高 53.88%。听力检查阳性者中查出耳部疾病者为 181 人（73.88%），听力检查阳性患者中听力可逆的 178 人（72.65%），大前庭水管综合征 2 人及 1 例听神经病听力未能恢复正常。245 人基因检查结果显示，GJB2 基因杂合突变9 人（3.67%），未查出纯合突变或复合杂合突变；SLC26A4 基因杂合突变 1 人（0.41%），纯合突变 1人（0.41%）；线粒体 12SrRNA 基因突变携带 1 人（0.41%），未发现 GJB3 基因突变携带者。在我国散发性聋病患者中，GJB2 基因占 13.63%，是我国最常见的聋病致病基因13。本研究中有 12 人检测出基因突变，其中 9 例与 GJB2 有关（75%,9/12），与该结论相契合。GJB2 基因纯合突变或复合杂合突变可导致先天性重度或极重度耳聋，此类患者在出生后早期就容易被发现，故未在入学儿童检查中查出 GJB2基因的纯合突变或复合杂合突变。SLC26A4 基因的纯合突变或复合杂合突变可导致常染色体隐性遗传性聋 DFNB4 和 Pendred 综合征（前庭水管扩大或伴神经性聋、内耳畸形和甲状腺肿）14，是我国排名第二位的致聋基因，可表现为先天或后天中度以上感音神经性耳聋。我国在前庭水管扩大人群中 SLC26A4 基因热点突变 IVS7-2AG 检出率最高，达71.9%15，本研究查出 2 例大前庭水管综合征儿童，均通过颞骨 CT 平扫确诊，基因检查 1 例为 IVS7-2AG 纯合突变，1 例为 IVS7-2AG 杂合突变，与该结论相符。理论上而言，杂合突变的患者还应存在另一突变位点，考虑本研究仅筛查了 SLC26A4 基因的常见的 10 个位点，还需进一步测序明确诊断。线粒体 12SrRNAc.1555AG 突变 1 人，7 岁女孩，听力正常，患者母亲听力亦正常，经验证母亲亦是线粒体 12SrRNAc.1555AG 突变，线粒体 DNA突变为母系遗传，与药物性聋相关，嘱其母女避免使用氨基糖苷类耳毒性药物，通过家系分析，对家系中尚未发病的母系家庭成员进行宣教预警，是一种有效的前瞻性防聋策略。GJB3 基因是我国克隆和鉴定的第一个耳聋致病基因16，该基因在正常人群中突变频率较小，本研究亦未发现 GJB3 基因突变携带者。本研究中 4 种易感基因的携带率为 4.90%，略低于国内其他研究，考虑本研究中听力检查未通过儿结果初筛人数复筛人数通过232（94.69%）243（99.18%）单耳未通过9(3.67%)1（0.41%）双耳未通过4(1.63%)1（0.41%）327中国中西医结合耳鼻咽喉科杂志 2023 年第 31 卷第 5 期9Lou H,Meng Y,Piao Y,et al.Predictive significance oftissue eosinophilia for nasal polyp recurrence in theChinese population.Am J Rhinol Allergy.2015,29(5):350-356.10陈彦球,李添应,瞿申鸿,等.慢性鼻-鼻窦炎患者血清中常见变应原检测J.中华耳鼻咽喉头颈外科杂志,2005,40(5):381-382.11汪普,赵俐菁,张志利,等.玉屏风散对老年慢性鼻窦炎患者炎症因子水平及免疫功能的影响.中国老年学杂志,2015,35(8):2134-2136.12王会宾,刘江峰.克拉霉素强化治疗用于慢性鼻窦炎患者的疗效、安全性及对血清炎性细胞因子的影响J.中国医学文摘（耳鼻咽喉科学）,2022,37(6):123-125.13汪普,赵俐菁,张志利.玉屏风散对老年慢性鼻窦炎患者炎症因子水平及免疫功能的影响.中国老年学杂志,2015,35:2134-213614王晓国,吉爱国.NF-kB 信号通路与炎症反应.生理学进展,2014,45(1):68-71.15Kim J,Sanders SP,Siekierski ES.Role of NF-kappa B incytokineproductioninducedfromhumanairwayepithelialcells by rhinovirus infectionJ Immunol.2000,165(6):3384-339216Mofiuchi H,Moriuchi M,Fauci AS.Nuclear factor-kappaBpotentlyup-regulatesthepromoteractivityofANTES，a chemokine that blocks HIV infectionJImmunol.1997,158(7):3483-349117Zhang W,Zeng YH,Yu XS.Changes in nasal secretion ofECP，EGF and IL-6 in patients with chronic sinusitisbefore and after endoscopic sinus surgery and their clinicalsignificance.Otolaryngol Ophthalmol Shandong Univ.2018,32(3):63-6718张涛,唐海红,郑宏良.大环内酯类抗菌药物治疗慢性鼻-鼻窦炎的机制及应用.第二军医大学学报,2018,39(12):134-1369.（收稿：2023-05-11修回：2023-07-04）童中器质性疾病占大部分有关。本研究发现 1 例SLC26A4 基因纯合突变，未发现 GJB2 纯合突变，与SLC26A4 基因突变多导致迟发性听力下降有关。该研究中线粒体 12SrRNAc.1555AG 突变的患者听力筛查通过，2 例大前庭水管综合征患者听力检查未过，经基因检测测出 1 例 SLC26A4（IVS7-2AG 位点）杂合突变，1 例 IVS7-2AG 位点纯合突变。本研究采用听力检查及耳聋易感基因联合检查的方法对听力初筛未通过的学龄儿童进行检测，可发现部分听力检查不能发现的药物性聋患儿，并能明确部分迟发性聋儿的病因。参考文献1Posukh O,Pallares-Ruiz N,Tadinova V,et al.Firstmolecular screening of deafness in the Altai RepublicpopulationJ.BMC Med Genet,2005,6(12):6-12.2倪道凤.婴幼儿中耳炎的诊断和治疗J.临床耳鼻咽喉科杂志，2005，19(13):577-5793王秋菊，Arnold Starr.听神经病：从发现到渐入精准J。中华耳鼻咽喉头颈外科杂志，2018，53(3):161-171.4王秋菊，韩东一，兰兰，等.大前庭水管综合征的诊治策略研究J.中华耳科学杂志，2006，4(4):315-321.5Cynthia C.Morton,Walter E.Newborn Hearing Screening-A Silent RevolutionJ.N Engl J Med,2006,354(20):2151-2164.6Morton CC.Genetics,genomics and gene discovery in theauditory systemJ.Hum Mol 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