DCCIK课件.ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,*,主要内容,肿瘤生物治疗的概况,自体免疫细胞治疗,自体免疫细胞治疗技术管理规范,我们的自体免疫细胞治疗工作,实验室质控和临床管理,该技术领域的发展趋势和问题,肿瘤生物治疗（Biotherapy）是继手术、放疗和化疗后发展的第四类恶性肿瘤治疗方法，是通过调动宿主的天然防卫机制或给予机体某些物质来调节宿主与肿瘤的反应以取得抗肿瘤的效应，也就是利用和激发机体的免疫反应来对抗、抑制和杀灭肿瘤细胞。与传统的治疗方法不同，生物治疗主要是调动人体的天然抗肿瘤能力，恢复机体内环境的平衡,。,肿瘤生物治疗是以现代分子生物学、细胞生物学和免疫学等前沿科学为基础，利用机体对肿瘤的免疫应答，通过生物手段改变肿瘤和机体之间的相互作用，调动机体对肿瘤的防御机制，达到控制肿瘤生长，延长患者生存期，提高患者生活质量的目的，生物治疗已经成为肿瘤综合治疗中的重要治疗方法,。,发展历程,1984年11月,Rosenberg 研究组经美国食品和药品检验局（USA Food and Drug Administration,FDA）批准，首次应用IL-2与LAK协同治疗肾细胞癌、黑素瘤、肺癌、结肠癌等肿瘤患者。3年后又建立肿瘤浸润性淋巴细胞（TIL)对恶性黑色素瘤的治疗方法。,自此生物治疗正式成为了一种临床治疗手段，经过了近30年的不断发展和完善，先后出现了生物反应调节剂治疗（细胞因子、疫苗、抗体等）、生物靶向治疗、基因治疗等，其中肿瘤的细胞免疫治疗发展最为突出，涌现出来CIK、DC、NK等多种细胞免疫疗法。,向肿瘤患者输入具有抗肿瘤活性的免疫细胞，直接杀伤肿瘤细胞或激发机体抗肿瘤免疫反应，从而达到治疗肿瘤的目的，这一过程称为肿瘤过继细胞治疗（adoptive cell therapy,ACT)。,通过对自体免疫细胞进行体外激活和扩增，然后将其重新输回肿瘤患者体内，并辅以合适的生长因子，促使其在体内发挥杀伤肿瘤细胞的作用，可以叫做自体免疫细胞治疗。,自体免疫细胞治疗,通过恢复与增强肿瘤患者自身的免疫系统，使自身的免疫细胞在数量、免疫监测和免疫杀瘤功能方面得到放大和增强，从而有效地杀灭患者术后和放化疗后体内残存的肿瘤细胞，达到预防复发与转移、控制病情（肿块停止生长扩大、缩小、甚至消失）、提高生活质量、延长生存期，甚至彻底消除肿瘤的目的。,它具有特异性强、效果显著、几无副作用等优点，正在逐步成为肿瘤综合治疗的一个重要手段，也是当前肿瘤治疗基础研究和临床应用的热点与发展方向。,自体免疫细胞治疗分类,LAK细胞,淋巴因子激活的杀伤细胞,TIL细胞,肿瘤侵润性淋巴细胞,CD3AK细胞,CD3,单克隆抗体激活的杀伤细胞,TAK细胞,肿瘤抗原激活的杀伤细胞,CIK细胞，,细胞因子诱导的杀伤细胞,DC细胞，,树突状细胞,DC-CIK细胞，树突状细胞（,DC）刺激的CIK细胞,NK细胞，,自然杀伤细胞,DC-T细胞，,经基因修饰的自体DC细胞激活T淋巴,细胞,10,自体免疫细胞治疗的基本过程,外周血,淋巴、单核,细胞因子：,IL2,、,INF-,、,CD3+,、其他,培养、刺激、活化,扩增,质检及鉴定（细菌、真菌、支原体、内毒素）,分次回输,2011年医学及生理学奖诺贝尔获得者,树突状细胞(dendritic cell，DC)是由美国学者Steinman于1973年发现的，因其成熟时伸出许多树突样或伪足样突起而得名。,DC是目前所知的机体内功能最强的抗原提呈细胞，最大的特点是能够刺激初始T细胞(naive T cell)进行增殖。因此，DC是机体免疫应答的始动者，在免疫应答的诱导中具有独特的地位。,对DC的研究不仅有助于深刻了解机体免疫应答的调控机制，而且可以通过调节DC的功能来调节机体的免疫应答，对感染、肿瘤、移植排斥、自身免疫性疾病的发生机制的认识和防治措施的制定，具有重要意义。,树突状细胞的来源,树突状细胞(DC)主要起源于骨髓中CD34,+,多潜能造血干细胞(,CD34,+,Hematopoietic progenitor cell,，简称,CD34,+,HPC,)，它经过4个阶段分化成为成熟的DC：,骨髓和血液中的前体DC；,外周非淋巴组织中的不成熟DC；,流出淋巴液和血液中成熟过程中的DC；,次级淋巴组织中的成熟DC。,树突状细胞的来源,DC的生物学功能,1.抗原提呈,高水平表达MHC-II,（组织相容性复合物）,类分子；,表达参与抗原摄取和转运的特殊膜受体；,有效摄取和处理抗原，然后迁移至T细胞区；,活化未致敏（naive）T细胞；,抗原提呈效率高，少数DC可以激活T细胞。,2.参与T细胞发育、分化和激活,3.参与B细胞发育、分化及激活,4.免疫调节和免疫监视功能,细胞因子诱导的杀伤细胞（CIK）,CIK,CIK是英文cytokine-induced killer 的缩写，中文为细胞因子诱导的杀伤细胞。,它是将人外周血单个核细胞（PBMC）在体外用多种细胞因子（抗CD3McAb、IL-2、IFN-、IL-1等）共同培养一段时间后获得的一群异质细胞。,过继性免疫细胞治疗的里程碑。,CIK之效应细胞,其中CD3+CD56+细胞是CIK细胞群体中主要的效应细胞，被称为NK样T淋巴细胞。,非MHC（组织相容性复合体）限制性杀瘤。,效应细胞为-NKT-CD3+CD56+,CIK之优点和缺点,增殖活性高：在培养的第15天数量就可以达到70多倍；,杀瘤活性高，而且杀瘤活性的维持不需要外源大量的IL-2的输入来维持；,杀瘤谱广：肾癌、恶性黑色素瘤、白血病、乳腺癌、直肠癌、胃癌、肺癌、食管癌、宫颈癌、卵巢癌、多发性骨髓瘤、恶性淋巴瘤（非T细胞淋巴瘤）等恶性肿瘤细胞都有显著的杀伤活性；,仅有非MHC（组织相容性复合体）限制性杀瘤作用，对占80%表达为MHC限制型的肿瘤细胞无杀伤作用，其杀伤作用受到局限。,DC-CIK,DC-CIK 是指与DC细胞共培养的CIK细胞。,成熟的DC可以通过型组织相容性抗原（MHC-）等途径提呈肿瘤抗原，有效抵制肿瘤细胞的免疫逃逸机制。CIK细胞和DC细胞是细胞免疫治疗的2个重要组成部分，两者联合可提高疗效。,问题：DC细胞不是效应细胞，本身无杀瘤作用。标准不统一，每家医院遵从自己的SOP。实验室制备较为复杂，实验室收获时机、临床应用时机、质检时间存在冲突，限制临床应用。,肿瘤免疫细胞治疗目前临床情况,1.LAK：早期的一种疗法，因为疗效小、毒性大，目前临床上已经基本不再使用。,2.TIL：必须取得瘤体，从中获得淋巴细胞进行培养，在临床实施方面的可行性较差。,3.TAK：不能解决抗原强度和呈递表达的效率，共刺激信号的提供等，因此疗效不稳定。,4.CIK和NK：,依靠非特异性杀伤，不是针对患者本身的肿瘤细胞进行专门杀伤，效力较低，需要输入大量的体外刺激的细胞，培养成本较高，培养时间长，病人经常会出现高热等副反应。,依赖一种叫做NK的淋巴细胞进行杀伤，如果肿瘤细胞表面表达了MHC分子，NKT细胞就无法对这种肿瘤细胞进行杀伤，且这种情况经常发生，即使原发肿瘤没有表达这种结构，转移的肿瘤也经常发生变化，从而逃避NKT细胞的杀伤。,5.DC瘤苗：在肾癌和黑色素瘤方面取得了一定的疗效，但当在肿瘤抗原比较复杂的情况下，该方法实施效果不佳。,6.具有负向免疫调节作用的调节性T细胞：还处于早期的研究阶段。,过继性免疫疗法存在的问题,肿瘤抗原表达弱,MHC-,分子消失;,培养细胞本身的抗肿瘤作用差;,肿瘤细胞的免疫逃逸,对,MHC-,肿瘤细胞的限制型杀伤,记忆细胞的比例,自体免疫细胞治疗新技术,链式激活的免疫细胞,DC-CIK,基因修饰的DC细胞激活T淋巴细胞,免疫负调控因子抑制技术,产生干扰素的杀伤 DC,IKDC,链式激活的免疫细胞 DC-CIK,链式激活的免疫细胞（Cascade Primed Immune cells,简称DC-CIK细胞，又名：链式CIK）。,德国慕尼黑大学医学院免疫研究所教授Rudolf Wank发明的一种用于肿瘤自体免疫细胞治疗新技术。,基因修饰的DC细胞激活T淋巴细胞,重组腺相关病毒转染树突状细胞获得的细胞毒性T细胞技术，rAVV-DC-CTL 或称ACTL技术。,Survivin,muc1肿瘤相关抗原DC细胞刺激。,其他,免疫负调控因子抑制技术-iAPA技术,Si-Yi Chen et al.发现：,SOCS1(,Suppressor of Cytokine Signaling 1,),是一种重要的免疫负调节因子,(,antigen presentation attenuator,APA)，对,DC,细胞的抗原呈递起负调节作用，限制抗原呈递的时间和强度，从而限制自体抗肿瘤免疫反应。,该研究第一次提出了抑制免疫负调控因子来增强,DC,疫苗的概念。,产生干扰素的杀伤 DC,IKDC技术,这种细胞同时具备 DC 和 NK的某些特点，既具有细胞毒活性和抗肿瘤活性，同时可以产生 IFN，并且还有潜在的抗原提呈功能。,这种细胞是 一种新的、独立的细胞亚型，而非 2 种不同细胞的混合体。IKDC 可同时表达 CD11c、MHC 分子、CD40、CD86，B220，CD49b，Gr1，CD122，NK11，NKG2D。,IKDC可以分泌高水平的 IFN，IKDC 的细胞膜表面可表达大量的 MHC分子及协同刺激分子，通过交叉提呈激活 T 淋巴细胞杀伤肿瘤细胞。IKDC 具有将机体的天然免疫与适应性免疫相结合，形成联合抗肿瘤效应的潜能。,目前，所有关于 IKDC 的研究还仅限于对小鼠的研究。,为规范自体免疫细胞（T细胞、NK细胞）治疗技术临床应用，保证医疗质量和医疗安全，制定本规范。本规范为医疗机构及其医师开展自体免疫细胞（T细胞、NK细胞）治疗技术的最低要求。,自体免疫细胞治疗技术是指从自体外周血中分离的单个核细胞经过体外激活和扩增后输入患者体内，直接杀伤肿瘤细胞或病毒感染细胞，或调节和增强机体的免疫功能。本管理规范适用于在临床上已完成安全性和有效性认证，并符合伦理要求，只涉及自体T细胞和NK细胞作为治疗手段的医疗技术。,一、医疗机构基本要求,（一）医疗机构开展自体免疫细胞（T细胞、NK细胞）治疗技术，应,当与其功能、任务相适应。,（二）三级甲等医院，具有卫生行政部门核准登记的与应用自体免疫细胞（T细胞、NK细胞）治疗技术有关的诊疗科目。,（三）具有与自体免疫细胞（T细胞、NK细胞）治疗相关的科室，科室人员组成包括有与开展人体免疫细胞（T细胞、NK细胞）治疗技术相适应的执业医师、执业护士、具有免疫学专业背景的专家和自体免疫细胞（T细胞、NK细胞）制剂制备技术人员；具备开展自体免疫细胞（T细胞、NK细胞）治疗技术的场地、设备和设施；具备从事自体免疫细胞（T细胞、NK细胞）治疗质量控制的专业检验科室和人员。,（四）医院设有管理规范、运作正常的由医学、法学、伦理学等方面专家组成的自体免疫细胞（T细胞、NK细胞）治疗技术临床应用与伦理委员会。,（五）有至少2名具备自体免疫细胞（T细胞、NK细胞）治疗技术临床应用能力的本院在职医师，有经过自体免疫细胞（T细胞、NK细胞）治疗相关知识和技能培训的、与开展的自体免疫细胞（T细胞、NK细胞）治疗相适应的其他专业技术人员。,二、人员基本要求,（一）自体免疫细胞（T细胞、NK细胞）治疗医师,1.取得医师执业证书，执业范围为开展本技术应用相关专业。,2.有10年以上开展本技术临床应用相关专业临床诊疗经验，具有副主任医师及以上专业技术职务任职资格，在本医院连续工作不少于2年。,3.经过卫生行政部门认可的自体免疫细胞（T细胞、NK细胞）治疗技术系统培训并考核合格。,（二）自体免疫细胞（T细胞、NK细胞）制备实验室人员,1.制备自体免疫细胞（T细胞、NK细胞）实验室至少有1名副高级及以上专业技术职务任职资格的总体负责人，从事细胞制备的操作人员应具有相关专业（生物、免疫、检验和医学）大学（专）本科及以上学历，有不少于50例实验性免疫细胞制备经验，经专业技术培训并考试合格。,2.从事质量检验的工作人员应具有相关专业大学（专）本科及以上学历，经专业技术培训并考试合格。,（三）其他相关卫生专业技术人员,经过自体免疫细胞（T细胞、NK细胞）治疗相关专业系统培训并考核合格,。,三、技术管理基本要求,（一）细胞质量控制要求,1.提供自体免疫细胞（T细胞、NK细胞）制剂制备的实验室应具备省级以上药品监督管理部门和疾病预防控制中心认证的GMP制备室，有细胞采集、加工、检定、保存和临床应用全过程标准操作程序（SOP）和完整的质量管理记录。制定并遵循cGMP实验室维护标准操作程序（SOP）。,2.自体免疫细胞（T细胞、NK细胞）制剂制备要求：体外操作过程的细胞培养成分和添加物（培养液、细胞因子、血清等）以及制备过程所用的耗材，其来源和质量认证，应符合临床使用的质量要求，原则上鼓励采用无血清培养基、自体血清或者自体血浆。不允许使用异种血清或者血浆。,3.自体免疫细胞（T细胞、NK细胞）制剂制备质控标准：,（1）细胞制品外源因子的检测包括：细菌、真菌、支原体和内毒素。参照现行版中国药典生物制品相关规程进行。,（2）细胞质量指标：每批细胞应注明来源并加以标记或确定批号；细胞数量应满足临床最低需求，存活率应不低于80%；纯度和均一性已达到临床应用水平；体外检测细胞具备正常功能和生物学效应，如细胞具有的某种生物学功能，分泌某种产物的能力，表达某种标志的水平等。,无菌试验：每批培养的细胞在患者输注前均应进行无菌试验。建议在培养开始后34天起每间隔一定时间取培养液样品，包括患者回输前48小时取样，按现行版中国药典生物制品无菌试验规程进行。在患者使用前，取培养液及/或沉淀物用丫啶橙染色或革兰染色，追加一次污染检测。进行长期培养的细胞，应进行支原体检查。对每一批细胞终制剂应留样检测。如果留样发现阳性结果或发现几次阳性结果后，应及时对生产过程进行检查。如果在细胞制备的早期发现有污染的情况，应终止该批细胞制品的继续制备。,4.细胞制备实验室应具有自体免疫细胞（T细胞、NK细胞）制备及检定过程的原始记录和检定报告，并永久保存。,三、技术管理基本要求,（二）自体免疫细胞（T细胞、NK细胞）治疗技术临床应用伦理要求原则为：科学性原则、不伤害原则、知情同意原则、对病人有利原则、尊重原则。治疗前患者及家属应享有充分的知情权，应当向患者和家属告知治疗目的、治疗风险、治疗后注意事项、可能发生的并发症及预防措施等，并签署知情同意书。,（三）严格遵守自体免疫细胞（T细胞、NK细胞）治疗技术操作规范和诊疗指南，根据患者病情、可选择的治疗方案、患者经济承受能力等因素综合判断治疗措施，因病施治，合理治疗，严格掌握自体免疫细胞（T细胞、NK细胞）治疗技术临床应用适应证和禁忌证。,（四）自体免疫细胞（T细胞、NK细胞）治疗由2名以上具有自体免疫细胞（T细胞、NK细胞）治疗技术临床应用能力的、具有副主任医师以上专业技术职务任职资格的本院在职医师提出，经本院自体免疫细胞（T细胞、NK细胞）治疗技术临床应用与伦理委员会审核通过后实施，并制定合理的治疗与管理方案。,（五）自体免疫细胞（T细胞、NK细胞）治疗医师应当在治疗手术结束后的48小时内书面向本单位自体免疫细胞（T细胞、NK细胞）治疗技术临床应用与伦理委员会报告病例相关情况。,三、技术管理基本要求,（六）自体免疫细胞（T细胞、NK细胞）产品必须有cGMP细胞实验室负责人完成质量控制检测并签字后方能用于治疗。医疗机构应建立完整的自体免疫细胞（T细胞、NK细胞）治疗技术临床应用不良反应（事件）处理预案和紧急上报程序，并严格遵照执行。,（七）建立并配备专职人员严格管理自体免疫细胞（T细胞、NK细胞）治疗技术临床应用数据库，完善病人的长期跟踪、随访制度，并按规定进行随访、记录。建立细胞样本存档的标准操作程序，样本和文本数据保存期限为30年。,（八）医疗机构和医师按照规定定期接受自体免疫细胞（T细胞、NK细胞）治疗技术临床应用能力评估，包括病例选择、手术成功率、严重并发症，死亡病例，医疗事故发生情况，治疗后病人管理，病人生存质量，随访情况和病历质量等。按规定及时向卫生行政部门上报本技术临床应用情况，上交备份数据及标本。,（九）其他管理要求,1分离、纯化细胞产品所需试剂和器械均必须经食品药品监督管理部门审批，具有临床应用的许可证。一次性耗材不能重复使用。使用经药品监督管理部门审批的医用物品和耗材，建立登记制度，保证来源可追溯。,2严格执行国家物价、财务政策，按照规定收费。,34,肿瘤的综合治疗,手术,化疗,放疗,生物治疗,肿瘤的绿色治疗,肿瘤治疗的增强剂,无任何副作用,提高免疫力,提高生存质量,预防、延缓复发、转移,增强其他治疗的效果,延长生存期,生物治疗可用于生物治疗的全疗程，绿色治疗，提升免疫力，无毒副作用。,生物治疗可于术前和术后使用。,术前可用于控制肿瘤体积，并且不会损害患者对手术的耐受力。,术后进行生物治疗后再进行化疗，有利于患者身体机能和免疫力恢复，提高化疗耐受性。,建议生物治疗和化疗、放疗间隔使用。,DC-CIK治疗联合肿瘤常规治疗的基本原则,恶性肿瘤,手术治疗,放化疗敏感（常规放化疗）,疾病稳定期,专科治疗,不能手术（,期，,期）复发者,可手术,放化疗不敏感,DC-CIK,治疗,化疗敏感 化疗后,DC-CIK,治疗,联合专科治疗,（靶向治疗）,DC-CIK,治疗联合内分泌或靶向治疗,DC-CIK,治疗,（微创介入）,（卵巢癌，乳腺癌，小细胞肺癌等）,放化疗间隙联合,DC-CIK,治疗,（肾癌，前列腺癌，黑色素瘤等）,（乳腺癌，卵巢癌，神经母细胞瘤，小细胞肺癌等）,化疗不敏感,（原发性肝癌，肾癌，前列腺癌等）,疾病稳定期,身体虚弱者应用血细胞分离机进行细胞采集过程中可能会出现不适反应，采集时间会适当延长。,细胞输注过程中极少数病人出现过敏症，如果患者出现严重过敏体征，如呼吸困难者，应停止细胞输注治疗，并作相应的临床对症处理。,细胞输注结束后，有部分患者出现发热（37.038.5之间）、困乏等症状，绝大部分在26小时内自行恢复正常。极少数超过39，对症处理即可。,我们团队的临床应用未见肝肾等严重功能损伤等不良反应报告。,细胞制备、储存过程关键质量控制点,实验室,良好操作规范,采集,运输,接收,制备,检测,质评,发放,储存,过程控制点,采集,细胞制备、储存过程关键质量控制点,采集,消毒,采集方式,物料：一次性单采套装，床上用品一人一换，房间使用前后紫外消毒,样本采集：采集时间、采集量、各类标识,采全血,采单个核细胞,细胞制备、储存过程关键质量控制点,运输,1,2,远离辐射，防辐射运输盒,温度控制：1525，动态温度记录仪,2,时间控制：,6,小时,细胞制备、储存过程关键质量控制点,接收,细胞制备、储存过程关键质量控制点,单个核细胞接收,1.,留血样，血袋标识，血浆标识,2.,患者健康状况登记表,复苏细胞接收,1.,细胞保存袋标识完整（患者姓名，住院号）,2.,包装完整,3.,交接表格,制备,细胞制备、储存过程关键质量控制点,制备,污染控制,细胞制备、储存过程关键质量控制点,双人操作,生物安全柜,隔离性培养,隔离性冷冻,隔离工作区及设备、设施,制备,生产控制,分血,扩增，冻存,细胞制备、储存过程关键质量控制点,淋巴细胞分离液加入量,离心速度,红细胞，血浆去除量,加入专利试剂时间,制备,冷冻控制,细胞制备、储存过程关键质量控制点,检测,细胞制备、储存过程关键质量控制点,细胞制备、储存过程关键质量控制点,评价,所有细胞档案资料完整性评价。,病原微生物检测结果评价。,细胞生物学检测结果评价。,合同条款变更确认评价。,年度细胞质量监测情况评价。,细胞制备过程全面评价。,细胞制备、储存过程关键质量控制点,储存,交叉污染控制！,该技术领域发展趋势和问题,谢谢您的聆听！请多指教。,仁心妙术,