分子生物学3第三章-有机体、染色体和基因.ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,第一节 生命有机体,第二节 原核生物染色体和基因,第三节 真核生物的染色体,第四节 真核生物的基因,第一节 生命有机体,一、生命有机体的划分,按照细胞的结构和遗传物质在细胞内的分布，生命有机体可,大致划分为：原核生物（,Prokaryotes,）,真核生物（,Eukaryotes,）,原核生物（,Prokaryotes,）,遗传物质类核或拟核,习惯上也称为染色体,类核或拟核,超分子的亚细胞生命形式,病毒（寄主为动、植物）使用真核生物的遗传法则,噬菌体(细菌或病毒)适应了原核生物的遗传策略,繁殖必须在寄主体内进行，因而遗传机制与寄主密切相关,如：病毒（virus）噬菌体(phage）,原核,真核,体积,小（110m）,较大(（5100m）,核膜,无核膜,有核膜,基因组,DNA与非组蛋白结合，基因组位于类核中,DNA与组蛋白及非组蛋白结合，形成染色体,细胞器,无,内质网、高尔基体、线粒体、叶绿体,能量代谢,无线粒体，氧化还原酶系统位于质膜上,氧化还原酶系统位于线粒体中,细胞骨架,无,由微丝、微管和中间纤维组成,分裂形式,裂殖或出芽,有丝分裂和减数分裂,真核细胞和原核细胞的区别：,第二节 原核生物染色体和基因,一、大肠杆菌（,Escherichia coli,E.coli,）,1、大肠杆菌在实际工作中,的重要性,1885 Theodor Escherich(德国),原命名为 Bacterium coli,将其属名改为 Escherichia 是为了纪念发现者,经常被当作是所有生物的,原型（archetype）,b、生长迅速，要求营养物质简单，能进行很多生理生化过程,c、,有性生殖，可进行遗传学的研究(如遗传杂交及遗传性状 的分析）,d、能够供应病毒的生长，进行病毒扩增的研究,a、在实验室中容易操作,因为:,类核中，染色体DNA成分占80，其余为RNA和蛋白质,4.6 x 10,6,bp的基因组DNA 与多种DNA结合蛋白质组装成,E.coli的染色体,基因组DNA为,双链环状,，总长度为1.3mm，1400,以上,的基因（共30004000个）都已定位,（1）染色体DNA,2、大肠杆菌的遗传物质,包括染色体DNA和质粒DNA,E.coli的基因结构的特点,a、,功能相关的几个结构基因以操纵元（operon）的形式存在,其中包括共同的调节基因、启动子（promoter）、操作子,（operator）,它们在基因转录时协同动作,i,Operon,RegulatoryGene,p,o,z,y,A,DNA,m-RNA,-Galactosidase,Permease,Transacetylase,Protein,E.col,i,染色体的基因图,b、功能相关的RNA基因也串联在一起(rrn 操纵元)，,如：16S rRNA、23S rRNA、5S rRNA基因转录在同一个,转录产物中,d,、RNA基因多拷贝,大多数的E.coli菌株都含,有七个rrn,（其中六个分布在,E.coliDNA的双向复制,起点附近）,c、,蛋白质基因通常以单拷贝的形式存在,3、大肠杆菌的酶类,细胞中含有核酸代谢所需的各种酶类,多种限制性内切酶（restriction endonuclease）,只在特异顺序碱基的位点上（迴文序列）与DNA结合，并沿,固定的位点切割,如：E.coli的 EcoR,的识别序列,5.G-A-A-T-T-C3,3.C-T-T-A-A-G.5,限制性内切酶,最基本的工具酶，,在DNA测序、片段分离、克隆DNA的环节都要用到,二、噬菌体（,phage,）,1、,X174噬菌体,很小的E.coli噬菌体,DNA为单链环状，有,5386,个核苷酸（Frederick Sanger,于1977分析测定，为此荣获第二次诺贝尔奖）,2、,X174噬菌体基因排列更加体现,经济原则,b、,DNA分子绝大部分用来编,码蛋白质，不翻译部分只占4,（基因之间的间隔区 控制基因表达的序列）,a、,11个蛋白质基因，只转录成,三个mRNA,重迭基因有以下几种情况：,*一个基因完全在另一个基因内部,如：B和A,E和D,其读码结构互不相同,c、,最显著的特点是有重叠基因,（overlapping genes 或,嵌套基因 nested genes）,-,ATG,-/-AATGCC-/-ATAACG-/-,TAA,-,A*,B,ATG,CCN-NNA,TAA,*部分重叠 K和C,*两个基因共用少数碱基对,如：A,*,和C D和J,-ATGA-,C,Start codon,-TAATG-,A*,Stop codon,D,Stop codon,J,Start codon,2、,噬菌体,双链DNA 长度48502bp(48Kb),*其DNA分子有三种存在形式,a、两个粘性末端分,离的线性分子,COS位点,(cohesive-end site),c、,闭合环状分子,（粘性末端,互补，DNA连接酶连接）,b、带有切刻的环状分子（开环的,粘性末端互补后未连接的）,*其基因均是按功能相近的聚集成簇的（两个正调节基因N,和Q除外）,*存在形式,在寄主体内有,溶源生长周期,（原噬菌体）和,溶菌生长周期,两种生活途径,第三节 真核生物的染色体,一、概述：,*真核DNA组蛋白 核小体,*核小体折叠压积 染色质（chromatin）,（其它的蛋白质和RNA）,*大部分细胞生活周期里以染色质的形式存在（弥散状）,M,期染色体形式,*染色质有两种型,a、常染色质：密度较低，能被表达,b、异染色质：密度较高，不被表达（着丝粒、端粒）,Cell cycle,Interphase 间期,:G1+S+G2,M phase,(mitosis 有丝分裂):,二、组蛋白（Histone）,与Euk.的DNA结合的一类碱性蛋白质,*染色体的主要蛋白质组分,*富含Lys、Arg等碱性氨基酸，11KD 23KD,*核心组蛋白有H2A、H2B、H3和H4，另一种为H1,*与DNA紧密结合,*保守性强，但H1的保守性较弱,H2B,H2A,H3,H4,a,2,a,3,a,1,a,2,a,3,a,1,a,2,a,3,a,1,a,2,a,3,a,1,L1,L2,a,N,*,组蛋白八聚体（,Histone octamer,）,H2A与H2B、H3与H4的亲和力强，,通过C端的疏水氨基酸结合,两个H3、H4先形成四聚体 结合两个H2A和H2B的异二聚体,组蛋白八聚体,二、核小体（Nuclearsome）,*染色体结构的第一个层次，构成染色质的,基本结构单位,*足量的微球菌核酸酶处理染色质可得到,146bpDNA 组蛋白,八聚体核小体的,核,心颗粒,直径约10nm,1、核小体的组成,组蛋白八聚体,146bp的,核心DNA,146bp的核心DNA在组蛋白八聚体上盘绕1.8圈,Mononucleosomes typically have 200 bp DNA.End-trimming reduces the length of DNA first to 165 bp,and then generates core particles with 146 bp.,微球菌酶处理所得核小体DNA长度的变化,Chromatosome,166 bp,2 superhelical turn,Histone H1,*组蛋白H1把核小体,“封锁”起来,其中，,166bp核小体DAN的堆积比为10,56nm线性长度,5.6nm螺线管,连接 DNA,100 bp,平均 55 bp,Nucleosome,Histone H1,Nucleosome repeat:,Core+linker DNA,200 bp,2、染色体结构的形成,（1）首先若干个核小体形成念珠状结构,The 10 nm fiber is a continuous strong of nucleosomes.,每个核小体单位包括：200bp左右的DNA、一个组蛋白八聚体、一分子H1,高度有序,左手螺旋,每圈包括六个核小体,30 nm fiber,(直径30nm),Solenoid(螺线管）,（2）,30nm纤丝,的构成,染色质结构的第二层次,a、组成,Nuclear matrix(,核基质),protein complex,30 nm fiber,300 nm,b、体内存在状态,从DNA到染色体的过程,Compaction ratio=8000,Centromere,着丝粒,Telomere,有丝分裂中期的染色体,姊妹染色单体,Nuclear matrix,核基质,30nm 纤丝环,Chromatid 染色单体,3、着丝粒（centromere,或中心粒),和端粒(telomere),（1）着丝粒(centromere),Yeast centromere,富含AT,两侧有高度重复的,卫星DNA,属异染色质区,a、真核染色体线性DNA末端的特殊DNA序列,b、有数百个拷贝的,短的正向重复序列,且总是3端富含G,如：人体内,5-TTAGGG-3,c、复制靠端粒酶（,telomerase,核蛋白,),来完成，不同于正常DNA的复制,d、端粒DNA形成,特殊的二级结构,（G四联体形成四链结构）以使染色体末端免遭降解,（2）端粒(Telomere),第四节 真核生物的基因,Genome&genes,(基因组和基因的关系）,Genome,:,all DNA sequences in a cell,Genes:,编码某一蛋白质或RNA的一段DNA序列（a stretch of continuous DNA sequence encoding a protein or RNA）,C-value,is the quantity of DNA in the genome(per haploid set of chromosomes).,C-value paradox,(C值矛盾)refers to the lack of a correlation between genome size and genetic complexity,一、相关概念,基因组（genome）,：是指细胞或生物体的全套遗传物,质，即生物体维持配子或配子体正常功能的全套染色体,所含的全部基因（DNA）。,all DNA sequences in a cell,比如,人,基因组的全长为大约,3 X 10,9,对,碱基，编码,3-4万个基因,基因（Genes,）：,编码某一蛋白质或RNA的一段DNA序 列。（a stretch of continuous DNA sequence encoding a protein or RNA）,基因组和基因,C值（C-value）,：一种生物体的单倍体基因组DNA的总量。,the quantity of DNA in the genome(per haploid set of chromosomes,).,C值反常理论（,C-value paradox),支,原,体,细,菌,酵,母,霉,菌,蠕,虫,昆,虫,鸟,类,两,栖,类,哺,乳,类,10,10,10,9,10,8,10,7,10,6,从编码每类生物所需要的,DNA的量的最低值,看，生物细胞中的C值具有从低等生物到高等生物逐渐增加的趋势,植物,鸟类,哺乳动物,爬行动物,两栖动物,硬骨鱼,软骨鱼,棘皮动物,甲壳动物,昆虫,软体动物,蠕虫,霉菌,藻类,真菌,格兰氏阳性菌,格兰氏阴性菌,支原体,阴影部分为一个门内C-值的范围,低等动物的,C,值大于高等动物,如：两栖类的,C,值大于哺乳类,肺鱼的,C,值比哺乳动物大,10,15,倍,同一门中的动物,C,值变化很大,如：两栖类中的,C,值变化很大，可相差,100,倍,家蝇的比果蝇的大,6,倍,C值反常（,C-value paradox)：基因组的大小与基因组的复杂性之间缺乏一定的联系,。,（the lack of a correlation between genome size and,genome,complexity）,许多的DNA序列不编码蛋白质,表现：,二、真核生物DNA的复性动力学,(重新结合动力学 Re,association,kinetics）,基因组DNA的提取,超声处理或剪切到一定的长度(x 100-1000 bp),温度变性,退火（Re-annealing）,测量并捕捉退火过程得出复性动力学曲线,CC,0,1（1kC,0,t）,(紫外吸收法、羟基磷灰石柱层析法),真核生物复性动力学研究,Highly repetitive DNA,moderately repetitive DNA,unique DNA,Human,E.coli,三,、,真核生物基因组的DNA类型,高度重复序列、,中度重复序列,单一序列,复性反应分为三相，每相代表不同复杂长度的序列类型,1、高度重复序列（,Highly repetitive sequence）,分布于,着丝点,端粒区,（原位杂交）,结构基因两侧,往往没有转录功能，（着丝粒 纺锤体）,占基因组的,10-60%,长度,2,10bp(6,100bp),，重复数以 百万次,106,许多富含AT高度重复序列可以用密度梯度离心法分离出来,卫星DNA（Satellite DNA）：,将DNA切成数百个碱基对的片,段进行超速离心时，由于富含AT的简单高度重复序,列区段浮力密度较小，因而很容易和总体DNA分开，,即常会在主要的DNA带的上面有一个次要的带相伴随,Mouse genome DNA,30%GC in satellite DNA,CsCl 离心,ACAAACT,1.1x10,7,拷贝,卫星,25%genome,ATAAACT,3.6x10,6,拷贝,卫星,8%genome,ACAAATT,3.6x10,6,拷贝,卫星,8%genome,Satellites comprise more than 40%of the genome,果蝇（Drosophila）,卫星,DNA,n,5 ATAAACTATAAACTATAAACT 3,3 TATTTGATATTTGATATTTGA 5,（根据重复频率和大小又可分为小卫星和微卫星DNA）,数目可变的串联重复或,小卫星,(,Variable number tandem repeats.VNTR,),短的串联重复 5-50 copies,有共同的核心序列，,同一群体中个体间重复次数变动很大，所以个体间长度变化很大（DNA长度多态性）,可利用其得到DNA指纹图（DNA finger printing）,DNA指纹图的制作,DNA指纹图在法医上得到广泛应用,限制性内切酶切割DNA,电泳分离不同长度的DNA片段,小卫星探针与之杂交,显示不同长度的小卫星片段,微卫星（Microsatellite)又称简单序列重复（simple Sequence Repeat,SSR),一般以,1,6,个碱基为核心序列,存在于基因组的广泛区域：基因的间隔区，内含子，外显子，调控区,不同物种，微卫星含量不同：真核生物平均,50,150kb,一 个微卫星,不同微卫星在不同物种中丰度不同：哺乳动物基因组，,(,AC)n,最丰富，植物基因组，,(,AT)n,最丰富,真核生物基因组中，二核苷酸微卫星最丰富，三核苷酸微卫星比二核苷酸微卫星低,10,倍，四核苷酸微卫星更少,作为,DNA,分子标记，构建遗传图谱,2、中度重复序列 (,middle repetitive sequence,),100-几千bp/copy,10-10,4,copies/genome,占基因组的1040（小鼠占20，果蝇中占15）,分散在不重复序列之间,无编码功能的中度重复序列,如：Alu 家族,有编码功能的中度重复序列,如：rDNA tDNA Histone gene,a、以Alu序列为代表的不编码序列,Alu family（Alu 家族）：在长约300bp的片段中，大多,数片段含有一个限制性内切酶Alu,的酶切位点,（AGCT）,均匀分散在整个genome中的非重复序列间,在人类genome中占1 3,Alu序列显然是一个编码7SL RNA的基因衍生来的,7SL RNA-,一种信号识别颗粒的组分,b、有编码基因产物的中等重复序列,rDNA tDNA,Histone gene cluster 往往以基因家族的形式组织,低等真核生物 10-20%,高等植物 80%repetitive sequence,高等动物 50%,大部分结构基因位于非重复的DNA序列内,3、单拷贝序列,四、基因簇与基因家族,（Gene cluster、Gene family）,基因家族（Gene family）,:真核生物的基因组中许多来源相同，,结构相似、功能相关的一组基因,简单多基因家族：5SrRNA基因家族,复杂多基因家族：各个成员并不都是相同的,组蛋白基因家族,，,rRNA,、,tRNA,基因家族,目前基因家族可分为三类：,基因簇（gene cluster）,：基因家族的各成员紧密成簇，排列,成大段的串联重复单位，定位于染色体的特殊区域,由发育阶段控制的多基因家族：人类珠蛋白的基因家族,串联重复基因簇的特点：,各成员之间有高度的序列一致性,拷贝数高 几十 几百,非转录的间隔区短而一致,正好满足组蛋白基因、rRNA 基因和 tRNA的 基因产物被细胞大量需要,组蛋白基因、rRNA 基因和 tRNA,往往以串联重复基因簇的形式出现,a、组蛋白基因家族（Histone gene family）,H,1,H,4,H,2B,H,3,H,2A,一个重复单位,(基因簇 gene cluster),的组织情况,组织方式因不同生物而异：,基因次序、转录方向、间隔区的长短、重复频率,不转录间隔区,参见 P359页图1220,不算是典型的串联重复基因簇,(有些,以散在形式出现,),海胆,组蛋白基因表达特点：没有内元 没有多聚A尾巴 P359页,b、rRNA 基因家族（rDNA gene family）,海胆,450copies,烟草,750 copies,果蝇,100 copies,T,18s,T,5.8s,T,28s,NT,18s,T,5.8s,T,45s,41s,20s,32s,28s,5.8s,18s,重复单位的组织,一个重复单位内的,转录的间隔区,（内元）,重复单位之间的,不转录间隔区,c、tRNA基因,tRNA约长 70 80 bp，其基因约长140 bp,(内元),串联重复排列，但各重复单位内的各tRNA基因可以不同,c、5SrRNA基因,简单多基因家族,成簇排列、10,2,10,3,、10,4,拷贝,1,2,3,3 不转录的间隔区,1 5S rRNA,2 假基因,重复单位间由重,度重复序列隔开,假基因（,Pseudogenes,）：,与正常基因结构相似，但没有正常,功能的DNA序列 P363页,d、由发育阶段控制的多基因家族,人类珠蛋白基因家族典型的,血红蛋白,在基因组中可形成稳定的无活性的拷贝,珠蛋白,血红素,2,2,不同的亚基由各自,的基因编码,发育过程中的珠蛋白（血红蛋白）的亚基组成,两种亚基的编码基因分别形成两个不同的基因簇,并存在于不同的染色体上,每个基因簇中的基因按其在发育过程中的表达次序从5,3,排列在编码链上(其中包括有功能的基因和假基因),2,2,2%97%1%,-样亚基,-样亚基,Each of the a-like and b-like globin gene families is organized into a single cluster that includes functional genes and pseudogenes.,四、割裂基因（splitting gene）,不连续基因（discontinuous gene ）、,断裂基因（,interrupted gene）,概念：编码某一RNA的基因中有些序列并不出现在成熟,的RNA序列中，成熟RNA的序列在基因中被其他的,序列隔开,P360页的表述有一定的片面性,1、割裂基因的发现,通过成熟mRNA（或cDNA）与编码基因的DNA杂交试,验而发现,7 introns,8 exons,R环,鸡的卵清蛋白基因DNA与其mRNA杂交图,1978 Gilbert,真核生物基因的新概念,Exon(外显子、外元),DNA 与成熟RNA间的对应区域,氨基酸的编码区（amino acid coding region）,非间隔区（unspacer）,is any segment of an interrupted gene that is,represented in the mature RNA product,原初转录物中通过RNA拼接反应而保留于成熟RNA中的,序列或基因中与成熟RNA序列相对应的DNA序列,Intron(内含子、内元),is a segment of DNA that is transcribed,but,removed from within the transcript by splicing,together the sequences(exons)on either side of it.,DNA 与成熟RNA间的非对应区域,氨基酸的非编码区（uncoding region）,间隔区（spacer）但被转录,原初转录物中通过RNA拼接反应而被去除的,RNA序列,或基因中与这种RNA序列相对应的,DNA序列,R环（R-loop）,：mRNA与编码单链DNA杂交时，不互补的,intron部分形成的环,割裂基因,前体mRNA,Introns 去除,Exons 连接,Precursor mRNA(pre-mRNA),Heterogeneous nuclear RNA(HnRNA),真核生物基因的转录物又称为,所以真核生物基因又称为,Splitting gene,Interrupted gene,间隔基因，断裂基因,前体mRNA,核内不均一 RNA,由于真核生物的绝大多数结构基因都含有内元,2、,Splitting Gene 的普遍性,a)真核生物（Eukaryots）中,绝大部分结构基因,tDNA,rDNA,mtDNA,cpDNA,b)原核生物（Prokaryots）中,SV40 大T 抗原gene,小t 抗原 gene,1984 Dr.Chu,T4 phage 的胸苷合成酶 gene,1017 dNt intron,Splitting gene 并非真核生物所特有,酵母Maturase 合成受 Cyt.b intron II 的自动控制,maturase 过剩,利用intron II,编码成熟酶,maturase 减少,提前剪切,intron II,3、,Splitting gene,概念的相对性,a),Intron,并非“含而不露”,Yeast 细胞色素b基因 Intron II 编码成熟酶,c),并非真核生物所有的结构基因均为,splitting gene,不是,splitting gene,b),Exon,并非“表里如一”,人类尿激酶原基因,Exon,I,不编码 氨基酸序列,Histone gene family,干扰素,Yeast,中多数基因（,ADH,）,(果蝇,ADH 乙醇脱氢酶,基因为间隔基因),4、,Splitting gene,存在的生物学意义,（内元的意义）,五、细胞器基因,P367 375页自学,持家基因（housekeeping gene）：有些基因是在所有的,细胞类型中都表达的，即这些基因的功能为所有细,胞所必须（或称组成型基因 constitutive gene）,如:三羧酸循环中的各种酶,奢侈基因(luxury gene):仅在某种特定类型的细胞中表达的基因,如：,名词解释,基因组 C-值 C值矛盾 基因家族 基因簇 割裂基因,Intron 内元 Exon 外元 R环 持家基因 奢侈基因,卫星DNA,简答题,1、何为C值矛盾，其表现在哪些方面。,2、E.coli的基因结构有何特点？,3、真核生物复性动力学的复杂性计算、重复频率计算。（如何根据复性动力,学曲线判断真核生物各种序列类型及其复杂性）,4、以E.coli、,X174噬菌体为例,说明原核生物基因组织的特点。,5、说出真核生物染色体结构中染色质丝的逐级组装过程。,6、真核、原核生物的结构基因的主要组织特点。,1、假定人类单个细胞总DNA为6109核酸对，以B-构型存在。请问人类单个细胞DNA总长度为多少？它们又是如何被组装在直径相对来说极其微小的细胞核内？（人类46条染色体）,2、从四种不同生物分离的核酸中各种碱基的比率（）如下,A T U G C,1 17 17 33 33 0.5 1.0,2 29 19 22 30 0.97 1.0,3 24 16 24 56 0.66 1.5,4 34 2.1 1.0,A T（或A U）,G C,AG,C T（或C U）,（1）对于每个物种，回答以下问题,a、核酸是DNA还是RNA？,b、是双链还是单链？,（2）填充物种四中缺少的碱基百分比,本章内容结束!,