科内讲课脑脊液常规检验规范.ppt

,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,本文档所提供的信息仅供参考之用，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,本文档所提供的信息仅供参考之用，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。,脑脊液标本的采集与处理,1.脑脊液主要由临床医师采集，一般行腰椎穿剌，必要时从小脑延髓池或侧脑室穿剌采集。,将脑脊液分别收集于3个无菌试管中，每管l2ml：,第一管做化学或免疫学检査,第二管做病原微生物学检査,第三管做理学和显微镜检査。,2.标本采集后无特殊处理要求，应立即送检，,不超过1小时,。久置可致,细胞破坏,，影响细胞计数及分类检査，,葡萄糖分解,使含量降低，以及病原菌破坏或溶解。病原微生物检验标本须室温条件下运送，以免冷藏致某些微生物死亡。,脑脊液标本的采集与处理,3.细胞计数管应避免标本凝固，遇高蛋白标本时，可用EDTA盐抗凝（血常规管）。,脑脊液标本的采集与处理,检验项目,一般形状检查,化学检查,有形成分及病原微生物检查,免疫学检查,一般形状检查,颜色,正常脑脊液颜色为无色透明，病理情况下可有不同的改变：,1.,红色,：穿刺损伤出血，蛛网膜下腔出血，脑室出血。,2.,黄色,：颅内陈旧性出血。,3.,米汤样,：为白细胞增多，见于化脓性脑膜炎,4.,绿色,：可见于铜绿假单胞菌、肺炎链球菌、化脓性链球菌引起的脑膜炎。,5.,褐色或黑色,黑色,可见于侵犯脑膜的,中枢神经系统黑色素瘤,；,褐色,可见于,脑出血的康复期,。,透明度,welcome to use these PowerPoint templates,New Content design,10 years experience,1,.,正常为清澈透明,；病理情况下可有不同改变的混浊,脑脊液中细胞数大于300,10,6,/L或含大量细菌、真菌时呈不同程度混浊。,2,.,结核性脑膜炎,时呈,毛玻璃样浑浊,；,3.,化脓性脑膜炎,时呈,脓性浑浊,；,4.,正常脑脊液可因穿刺过程中带入红细胞而呈轻度浑浊。,化学检验,Pandya,试验：,脑脊液中球蛋白（glubin，Glb）与苯酚结合，可形成不溶性蛋白盐而下沉，产生白色浑浊或沉淀，即潘（Pandy)试验阳性,蛋白质定性试验,阴性：清澈透明，不显雾状。,阳性：,：,极弱阳性微呈白雾状，在黑色背景下，才能看到。,1+,：,为灰白色云雾状；,2+：,为白色浑浊；,3+：,为白色浓絮状沉淀；,4+：,为白色凝块,结果判定,Pandya,试验,临床意义,正常时多为阴性,。有,脑组织,和,脑膜感染性,疾患（如化脓性脑膜炎、结核性脑膜炎、中枢神经系统梅毒、脊髓灰白质炎和流行性脑炎等）、,蛛网膜下腔出血,及蛛网膜下腔,梗阻,等时常呈,阳性反应,。脑出血时多呈强阳性反应，如外伤性血液混入脑脊液中，亦可呈阳性反应。,有形成分分析,一、红细胞计数：,1,、澄淸标本：,可混匀脑脊液后用滴管直接滴入血细胞计数池，静置,1,分钟，在高倍镜下,.,计数,5,个大方格内红细胞数，乘以,2,即为每微升红细胞数。如用升表示，则再乘以,10,6,。,一、红细胞计数：,2,、浑浊或血性标本：,取混匀的脑脊液,20l,加入红细胞稀释液,0.38ml,（稀释,20,倍），混匀后充池，静置下沉,2,3,分钟，计数中央大方格四角和正中中方格内红细胞数（,5,个中方格），乘以,1000,即为毎,升脑脊液的细胞总数。对压线细胞按“,数上不数,下、数左不数右”的原则。,二、白细胞计数,1、,非血性标本,：,小试管内加入冰酸酸12滴，转动试管，使内壁沾有冰酸酸后倾去，然后滴加混匀脑脊液34滴，待数分钟红细胞溶解后，混匀充池，按白细胞计数法计数。,二、白细胞计数,2、混浊或血性标本：,将混匀脑脊液用1%冰醋酸溶液按全血白细胞计数法稀释后进行计数。,二、白细胞计数 校正,因穿刺出血而来的白细胞数，用下式公式进行校正。,脑脊液白细胞校正数=脑脊液白细胞计数值,出血增加的白细胞数,出血,增加的白细胞数=,外周血白细胞数脑脊液红细胞数/外周血红细胞数,总式,三、细胞分类,1,、直接分类法,白细胞计数后，将低倍镜换到高倍镜，直接在高倍镜下根据细胞核形态分别计数单个核细胞（包括淋巴细胞、单核细胞）和多个核细胞，应数,100,个白细胞，并以百分率表示。若白细胞数少于,100,个，应直接写出单个核、多个核细胞的具体数字，用分数表示。如：白细胞,50,个中淋巴细胞有,30,个，报告：淋巴细胞,30/50,。,三、细胞分类,2,、染色分类法,如直接分类法不易区分细胞或临床需要分类结果时，可,将脑脊液离心沉淀,1500,转,5,分钟,，取沉淀物,2,滴，,加正常血清,1,滴,，推片制成薄膜，置室温或,37,温箱内待干，行,瑞氏染色（经验：染液,3,滴,+,缓冲液,7,滴，染,3,分钟,。否则染黑不易辩认细胞类型）。用高倍镜或油镜分类。如见有不能分类的细胞，应请有经验技术人员复核，并另行描述报告，如脑膜白血病细胞或肿瘤细胞、内皮细胞等。,如果用玻片离心沉淀仪，则取,0.5ml,脑脊液制片。,如果,白细胞总数在,30,个以下，可不做分类计数。,四、仪器法细胞计数、分类,仪器：血细胞分析仪,要求：,标本无凝固物；,清洗仪器管道，直至细胞本底为,0,。,最好使用体液细胞模式（专用通道）,检测标本。,细胞计数参考区间,红细胞计数：010,6,/L。,白细胞计数：,成人（08）10,6,/L;,儿童（015）10,6,/L；,新生儿（030）10,6,/L。,细胞分类参考区间,成人：,淋巴细胞40%80%,单核细胞15%45%，,中性粒細胞6%。,新生儿：,淋巴细胞5%35%,单核细胞50%90%,中性粒細胞8%。,脑脊液常规检验注意事项,1.计数应在标本,采集后1小时内完成,。如放置过久，,细胞会破坏,、沉淀或纤维蛋白礙集，导致计数不准确。,2.细胞计数时，应注意,新型隐球菌与白细胞区别,。前者不溶于醋酸，加优质墨汁后可见荚膜。,3.使用计数板后应立即淸洗，以免细胞或其他成分黏附在计数板上，影响使用。,脑脊液常规检验临床意义,1、中枢神经系统病变时，脑脊液细胞数可增多，,增多程度及细胞种类与病变性质有关。,2、病毒性脑膜炎、结核性膜炎或真菌性脑膜炎,时，细胞数可中度增加，常以淋巴细胞为主，早,期伴有中性粒细胞及单核细胞。,3、细菌感染时，如化脓性脑膜炎，细胞数显著增,加，早期以中性粒细胞为主。,脑脊液常规检验临床意义,4、脑寄生虫病时，可见较多嗜酸性粒细胞。,5、脑室或蛛网膜下腔出血时，脑脊液内可见多数,红细胞、红细胞吞噬细胞及含铁血黄素细跑。,6、脑膜白血病和脑膜癌时，可见白血病细胞或癌,细胞。,墨汁染色,墨汁染色,原理,：在菌细胞周围存在黏多糖荚膜物，应用墨汁湿片法能证明荚膜的存在，新型隐球菌的荚膜取代了墨汁中的胶状碳粒，呈现清楚无色透明的晕圈环绕着菌体,新型隐球菌,染色镜检,1,、,将标本,3000转离心10分钟,，,取10l沉淀,物放于载玻片上。,2,、取10l墨汁加于沉淀物上，再覆盖上盖,玻片，注意先将盖玻片一边接触墨汁而后,缓缓斜放下，使其不产生气泡。,3,、在低倍镜下寻找有荚膜的菌细胞，找到,后，转换高倍镜确认。,新型隐球菌,染色镜检,4,、,结果报告,(1)如果涂片在墨汁的黑背景下呈现清楚的晕圈，并且在晕圈内可见菌细胞，报告“墨汁染色阳性”。,(2)如果涂片在墨汁的黑背景下无清楚的晕圈，,报告“墨汁染色阴性”,。,新型隐球菌,染色镜检注意事项,1,、,加的墨汁不要太多，以免加盖玻片时外溢造成污染。,2,、脑脊液墨汁染色阳性则高度怀疑新型隐球菌。,3,、注意将隐球菌与白细胞进行仔细鉴别，,隐球菌菌体中央有折光颗粒，而白细胞没有,。,新型隐球菌,染色镜检注意事项,4,、,因为墨汁染液不能高压灭菌，每次操作应进行阴性对照，以防墨汁污染造成假阳性。,5,、,阳性标本要求送微生物室培养鉴定，同时请主管辨认复核,。,脑脊液常规检验,分析后质量控制,：,1、危急值报告。,2、复查复核、审核签发。,3、保留标本。,4、特殊交班。,Thank you!,