临床基因扩增检验实验室质量管理和标准化问题及思考培训课件.ppt

Click to edit Master title style,Click to edit Master text styles,Second level,Third level,Fourth level,Fifth level,*,*,本文档所提供的信息仅供参考之用，不能作为科学依据，请勿模仿；如有不当之处，请联系网站或本人删除。,临床基因扩增检验实验室常规检测流程,标本采集、运送和,保存,实验室接收标本,扫条码,标本离心、开盖,加样器、核酸提取、,离心机、温育仪,扩增仪、杂交仪、,测序仪、芯片仪,结果分析报告,报告发出、用于疾,病诊断治疗,标,本,和,试,剂,准,备,仪器,设备,维护,校准,质控结,果分析,试剂,方法,的性,能验,证、,试剂,批质,检,信,息,系,统,哪些是影响质量的关键环节,？,瓶颈在哪里,？,？,“,We,have,a,dream,”,“,室内质量控制,”？,“,质量监控指标,”？,“,质量追求,”？,“,室间质量评价,”（“,能力验证,”）能带给我们,什么？,“,无基因,”和“,无核酸,”概念？,“,灵魂,”？,SOP,的,修改,？,“,精髓,”？,“,自由王国,”？,我国临床实验室质量管理的发展,卫生部临床检验中心成立，其后各省市临床检验中心相继成立,1982,年,2002,年,2005,年,2006,年,-,2010,年,临床实验室总体上的经验管理,室内质量控制和室间质量评价,临床基因扩增检验实验室管理暂行办法（卫医发,200210,号）,ISO15189,认可,(ISO,15189:2007.,Medical,laboratoriesparticular,requirements,for,quality,and,competence,.,Geneva:,International,Organization,for,Standardization,2007.,医疗机构临床实验室管理办法卫医发,200673,号）,医疗机构临床基因扩增检验实验室管理办法（卫办,医政发,2010194,号）,明确指出临床分子诊断实验中,防,“,污染,”,的重要性,，以及,“,污染,”,的来源,。,然后,从实验室的组织和仪器设备,、,分析前,、,分析过程中,和,质量控制,四个方面,做出详细规定。,该指南首次提出为,避免污染,，以,PCR,为检测手段的实验室应,分为四个区,，分,别为试剂准备区、标本制备区、扩增区和产物分析区。,在各分区的基础上，,提出单一的工作流向,和,各区物品不能混用,等原则，并且,针对各分区的工作特点和防止,“,污染,”,的要求，对该区工作性质、工作流程、,穿着、仪器设备和使用耗材做出详细描述。,在该指南中还针对,样本收集,、,运送,环节中需要注意的关键点给出了防止,“,污染,”,并且保持样本稳定性提出了建议，以尽量避免由于分析前环节导致的假阳性,或假阴性结果。,在该指南的第三部分中，该指南分析了标本处理、逆转录及扩增、污染和产,物分析几个临床基因检测的影响因素，其中着重阐述了临床分子诊断实验的,大敌,“,污染,”,的来源及其防范措施。,该指南最后介绍了临床分子检测如何进行质量控制。,IFCC,临床诊断中分子扩增方法质量评价基础指南简介,Neumaier,M,Braun,A,Wagener,C.,Fundamentals,of,quality,assessment,of,molecular,amplification,methods,in,clinical,diagnostics.,International,Federation,of,Clinical,Chemistry,Scientific,Division,Committee,on,Molecular,Biology,Techniques.,Clin,Chem.,1998;44(1):12-26,项目,名,称,内,容,1,2,3,4,5,6,7,8,9,10,11,12,13,14,CLSI/NCCLS,MM1A,CLSI/NCCLS,MM2-A2,CLSI/NCCLS,MM3-P2,CLSI/NCCLS,MM5-A,CLSI/NCCLS,MM6,CLSI/NCCLS,MM7-A,CLSI/NCCLS,MM9-A,CLSI/NCCLS,MM10-P,CLSI/NCCLS,MM12-P,CLSI/NCCLS,MM13-A,CLSI/NCCLS,MM14-A,CLSI/NCCLS,MM14-A2,CLSI/NCCLS,MM16-P,CLSI/NCCLS,MM20-A,基因疾病,的分子诊断方法,免疫球蛋白和,T,细胞,基因重排,检测,传染性疾病,的分子诊断方法,分子血液病理学的核酸扩增检测,传染性疾病,定量,的分子检测方法,医学,遗传,检测中荧光原位杂交方法,实验室诊断医学中的核酸,测序,方法,传染性疾病的基因分型,诊断用核酸,芯片,分子诊断方法中,标本收集、运输、处理和储存,分子诊断方法中的,能力验证,分子检测能力验,/,室间质量评价设计,外源,RNA,对照用于基因表达检测,分子遗传检测的质量管理,美国,CLSI,制订的一些与分子检测有关的导则或指南,Charles,Darwin,初级,中级,高级,目前，我们尚在何处？,Wehave,a,dream,!,I,“,室内质量控制,”？,定义：由,实验室工作人员,，采取,一定的方法和步骤,，连续,评价本实验室工作的可靠性程度，旨在,监测和控制本实验,室工作的精密度,，提高本室常规工作中批内、批间样本检,验的一致性，以,确定测定结果是否可靠、可否发出报告的,一项工作,。,一定的方法和步骤,：,室内,质控品,检测？,实验室,环境条件,？,仪器设备,维护校准,？,试剂方法,性能验证,？,SOP,？,人员,培训,？,如何发现实验室检测的质量问题,？,“地震”之前的征兆,疾病如“阑尾炎”的症状及指标,右下腹反跳痛,恶心、呕吐,低烧,食欲不振,白细胞数增加等,实验室在质量上“患病”的可能症状,（,质量监控指标,）是什么？,实验室“,质量监控指标,”？,分析前,：标本差错率、,标本不合格率,（凝块、,溶血、容器破损、标本量不够、超出允许时间,等）,（可从自查、投诉等得到信息）,分析中,：,室内质控（真失控率、超出,2SD,频,率）,、,检测阳性率,、假阳性率、阳性结果连续,出现数、假阴性率、结果差错率、检测失败率、,仪器故障频率、标本的日检测量、仪器日和定,期维护的执行情况等等,。,分析后,：报告及时率、报告差错率、报告遗失,率、报告召回率、,医生和患者有效投诉率,、纠,纷发生率等,。,实验室的“,质量追求,”？,（标本、数据）差错率,?,（,1.0,）,%,仪器故障频率,?,（,95,）,？,室内质控,真,失控率,?,（,0.5,）,%,有效投诉率,?,（,1.0,）,/,每百个报告,设置“,质量目标,”的意义,？,目标,:,是个人、部门或整个组织所期望的成果,目标,是永远,不变,的吗？,如果该实验室统计,2012,年的,差错率为,0.1%,、,报告及时率为,98%,、,有效,投诉率为,0.5/,百个报告,，原来定的上述质量目标还适用吗？如何修改？,为什么要参加“,室间质量评价（,EQA,）,”,？,政府法规规定？,三甲医院评审要求？,自我教育（,Self-education),？,质量改进需要,?,如何进行和使用“,EQA,”？,EQA,样本应与临床标本,同等对待同时检测,（,特,殊对待,：重复多次检测、使用常规检测不用的,“好方法”检测等）,EQA,对实验室的质量改进作用：,出现检测结果,不符问题,寻找原因,并,评估对临床标本的检测,错误风险,采取措施进行,改进,（仪器设备、试,剂、人员操作流程等）,能不能对,EQA,样本特殊对待,？,能不能与别的,实验室对结果,？,甚至直接采用厂家的结果,？,“,无基因,”或“,无核酸,”,概念的重要性,！,尊敬的李教授,：,您好！,来信请教一个问题，具体情况,是这样的：我这儿使用的,PCR,仪是,ABI,7300,，用的是达安公司的,HBV-,DNA,试剂，去年,12,月中旬的一次试,验中发生了,爆管事件,，事件发生后，,已经按照,SOP,规程进行了消毒处理，,到现在已经有,半年,了，可,还是不能,消除污染,。,PCR,实验室在,三楼,，现,在即使加样操作放在同一幢楼房的,一楼,进行，其余如混匀、温育、离,心等还放在原来的实验室，扩增也,在原来的实验室，阴性对照孔所加,对照都未如标本一样处理（因此暴,露在空气中的时间很短），可是,阴,性对照孔仍有扩增,，大约在,21,个,循,环的时候开始，,阴性对照显示的,Ct,约为,26,左右,。请问这是什么原因，,怎么处理才能消除污染。盼指点！,刘,X,20130508,刘大夫,：,PCR,实验室一旦出,现严重污染，消除将会比较,困难，通常可采用下述方法：,（,1,）,开窗通风,;,（,2,）,采用次,氯酸钠溶液擦地面及实验台,面，甚至墙面,;,（,3,）,增长紫外,照射时间,；（,4,）,用,75%,乙醇,空中喷雾，然后用于次氯酸,钠溶液擦地面及实验台面。,上述措施每天都要进行，直,至污染消除。,不知你是否按,上述方法进行？如没有，你,可以这样试，并请将效果告,诉我。,此外，在实验室出现严重污,染后，如还要进行工作，则,可临时更换一个厂家试剂，,应就可以。,20130508,李教授：您好！我是上次,向您请教,PCR,实验室污染,如何清除的小刘，我们按,照您的指点进行处理，,现,在实验室污染已经完全清,除,，非常感谢！以后我们,会更加注意操作的规范及,相关知识的学习！,2013.7.18,尊敬的李教授：,您好！您所说的措施我,都实行过，只不过,除通风外，,其余措施仅实施过很少几次,，,我将按您所说措施处理一段,时间再看看。另外，再请教,两个问题,：（,1,）,上述措施,要在三个区都进行吗,？（,2,）,楼房第三层污染，在第一层,操作怎么也会受到影响,？,谢谢您拨冗指教！,刘,X,20130508,实例,：,EGFR,基,因突变检测出现,实验室“污染”,实验室质量管理的“,灵魂,”？,SOP,等于试剂盒说明书吗,？,标准操作程序（,SOP,）,源于一些,标准文件（,如仪器,试剂说明书、国际国内标准文件,）,和实验室,实际工,作经验积累。,因此,高于相关标准文件！,SOP,是实验室的“,最高标准,”,！,有,可操作性,的SOP是,质量管理,的“,灵魂,”,！,“文字”,加,“图,片”,的,SOP,能给,我们带来什么,？,如何实现,SOP,的“,可操作性,”？,有一个,SOP,很容易,有一个可操作性的,SOP,很难吗？,SOP,装订成册？,SOP,的第一版、第二版、第三版、,？,SOP,文件在什么时候需要修改,？,“,修,”一个东西的前提是这个东西一定,是出了“,问题,”或“,故障,”！,发现,SOP,有“,故障,”的途径：室内质控和室,间质评,失控,、,差错,、,投诉,、评审的,不符合,项,、,查出异因,采取措施,保证消除,不再出现,纳入,标准,（,SOP,）,预防！,实验室质量管理的,“精髓”,人,是错误的来源,？,追根溯源往往是,管理,上的问题,！,出现问题怎么办,？,防止,同样的问题出现第二,次,是质量管理的,“精髓”！,厦门公交要装自动爆玻器 按下按钮一推玻璃就碎,厦门买罐装汽油实名制,个人购买需开两份证明,-,搜狐新闻,.htm,全面质量管理的工作循环,:,PDCA,4,个阶段，,8,个步骤,第一阶段（,P,lan,）有,4,个步骤：,分析并找出问题,；找出问题产生的,原因,；,确定最主,要原因,；制定,改进措施,计划。,第二阶段（,D,o,）有,1,个步骤：执行计划,第三阶段（,C,heck,）有,1,个步骤：检查计划执行情况。,第四阶段（,A,ction,）有,2,个步骤：,总结、制定标准,（修改质量文件）,，以巩固提高；,发现新出现的问,题,，转入下一,PDCA,循环,。,37,PDCA,的特点,小环合成大环,不断循环，阶梯式上升,“,A”,是改进的动力之源,38,A,P,C,D,C,D,A,P,一个临床,PCR,实验室对全年,室内质控结果的分析举例,这次失控,反映的是,实验室的,什么,问题？,P,lan,问题,：质控品,结果偏低,原因分析,：对,出现失控的扩,增仪放置质控,的孔用沾蒸馏,水的棉签擦拭,后，结果正常。,最主要原因,：,仪器维护问题？,改进措施,：每,天实验后，对,仪器各孔进行,擦拭,。,D,o,按照,新的,仪器,维护,SOP,执行,C,heck,是否有,同样的,失控发,生？,是否执,行了新,SOP,？,A,ction,总结，,并将扩,增仪孔,的擦拭,维护写,进维护,SOP。,是否出,现新的,问题？,HBV,DNA,检测质控失控发现质控结果超出均值,3SD,）,投诉实例,1,：,标本不合格及仪器问题,肝病门诊方医生投诉患者谭,XX,2009.6.29,与,2009.7.13,两次,HBV,DNA,结果差异太大。,郭医生投诉患者唐,XX,2009.7.10,结果与患者临床,病情不符。,原因分析：,谭,XX0629,标本,严重脂血,。患者,4,月为小三阳，,7,为大三阳。怀疑,4,月、,7,月标本,是否来自同一人,。,措施是以后脂血标本拒收。三查三对。,唐,XX,标本的原始检测有问题，将同一天其他患者,标本重测，发现,2632-2639,共,8,份原为阴性的标,本中出现,6,个阳性，联系工程师是,当天仪器,（,PE5700,）阀门开关不正常,，导致部分结果无,法检测荧光造成假阴性。,患者,谭,XX,唐,XX,时间,090629,（标本,2872,）,090713,（标本,3011,）,090612,（标本,2639,）,090713,（标本,3011,结,果,1000,（原始）,1000,（复查）,9.13,10,8,（原始）,5.4,10,8,（复查）,1000,（原始）,6,10,6,（复查）,1.6,10,6,（原始）,5,10,5,（复查）,实例,3,：因为标本质,检造成不同实验室检,测结果不一样。,问题,：本实验室检测,KRAS,结果错误,原因分析,：重新切片，,并进行病理学评估，,去除正常组织，检测,结果与外院相同,最主要原因,：检测时,未富集肿瘤细胞,改进措施,：务必提取,DNA,，对标本进行,病理学评估，富集肿,瘤细胞,？,分析用质控（图）,控制用质控（图）,起来，不愿做,“奴隶”的人们！,不要做“质量管理”的奴隶！,“,必然王国,”：对“质量管理”及其规律还,没有形成真正的认识,，,不能,自觉地支配实验室按质量管理要求运行,的一种状态。,在社会历史中，必然王国指人受,盲目必然性的支配,，特别是,受自己所,创造的社会关系的奴役和支配,的社会状态。,要做“质量管理”的主人！,“,自由王国,”：,认识了“质量管理”及其规律,，并,自觉依照,这一认识来支配实验室按质量管理要求运行,的一种状态。,在社会历史中，自由王国指人,自己成为自然界和社,会的主人,，摆脱了盲目性，,能够自觉地创造自己历,史,的社会状态,。,走向质量管理“自由王国”的首要条件,高素质的“,人,”,高素质：,必要的,专业知识,和,技能,“,强,”,的,职业意识,“,认真,”,有用的几句话,复杂,的事情,简单,做,简单的事情,认真,做,认真的事情,重复,做,重复的事情,创新,做,谢谢,!,