认识无菌室及无菌操作.ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,*,认识无菌室及无菌操作,微生物实验室包括操作室、清洗消毒室和无菌室。无菌室必须是一间独立的房间。,室内光线应明亮，但避免阳光直射；四壁和地面应,平滑，便于清洁和消毒；室内通风良好；有安全、适宜的电源和充足的水源以及存放试剂及物品的橱柜。,一、无菌室,是微生物检测的重要场所与最基本的设施。,1、无菌室的结构,（1）无菌室通常包括缓冲间和操作间。,（2）工作间的内门与缓冲间的门力求迂回。,（3）无菌室每3m,2,的面积应配备紫外线灯。,（4）有条件的无菌室应设有0.5-0.7m,2,的传递窗。,（5）缓冲间内需配有清洁用的水源，安装自动开关，并有足够面积保证工作人员更换专用的工作服和鞋帽。,（6）工作间内设有固定工作台。有独立空调和空气净化设备。,缓冲间,操作间,2、无菌室的使用要求,（1）应密封良好，墙面和地面应当光滑，易于清洁，面向室外的窗户应为双层玻璃。,（2）工作台高度约为80cm，采用无渗漏、耐腐蚀的材料，便于清洁、消毒。工作台、地面和墙壁可用新洁尔灭或过氧乙酸溶液擦洗消毒，不得存放与实验无关的物品。,（3）无菌室每次使用前后应用紫外线灭菌灯消毒，照射时间不低于30min。关闭紫外灯后30min才能进入。紫外线灯管每隔两周需用酒精棉球擦拭。,（4）无菌室内应备有一些专用的仪器设备和器材。,（5）实验操作时，必须穿专门的工作服和鞋帽。,（6）需带入无菌室使用的仪器、平皿等物品，均应,包扎严格，并用适当方法灭菌。,（7）无菌室应具备适当的通风和温度调节的条件。无菌室的推荐温度为20-25，湿度为40%-60%，做好无菌室的使用记录和温湿度记录。,3、无菌室的无菌程度测定方法,将已配制并灭菌好的琼脂平皿（3-5个）放置在无菌,室工作位置的左、中、右等处，并开盖暴露15min，,然后倒置于36培养箱中培养48h，取出观察。,4、无菌室的消毒,（1）一般情况下可酌情定时用丙二醇溶液熏蒸消毒。,（2）霉菌较多时，先用5%石碳酸喷洒室内，再用甲醛熏蒸。,（3）细菌较多时，可采用甲醛和乳酸交替熏蒸。,二、超净工作台,三、生物安全柜,超净工作台与生物安全柜两者之间是有本质区别的，,生物安全柜是一种负压的净化工作台，正确操作生物,安全柜，能够完全保护工作人员、受试样品并防止交,叉污染的发生；而超净工作台只是保护操作对象而不,保护工作人员和实验室环境的洁净工作台,。,四、无菌操作,1、,无菌,是指物体中没有活的微生物的存在。,2、,无菌操作,是指防止微生物进入人体或物体的操作方法,3、无菌操作,（1）接种食品前，首先用肥皂洗手，然后用75%酒精棉球将手擦干净。,（2）接种用的吸管、平皿、培养基等器具必须经消毒。对已打开包装未使用完的器皿，不能留待下次使用。,（3）接种样品、转种菌种必须在酒精灯前操作，接种时，吸管从包装中取出后及打开试管盖都要过火消毒。,（4）从包装中取出吸管时，吸管尖部不能触及外露部位，使用吸管接种于试管或平皿时，吸管尖部不得触及试管或平皿边。接种时，打开培养皿时间应尽量短。平皿接种时，通常把平皿的面倾斜，把培养皿的盖打开一小部分进行接种。,（5）接种环和针在接种菌种前应经火焰灼烧全部金属丝。,五,、灭菌和消毒,是微生物实验技术中最基本的操作，从事药品生产和,检验的人员都应当了解消毒与灭菌的方法及其意义，,严格遵守操作规程，否则会影响产品质量，危害患者,安全。,1、,灭菌,杀灭物体中或物体上所有微生物（包括病原微生物和,非病原微生物）的繁殖体和芽孢的过程。灭菌方法分,为物理灭菌法和化学灭菌法。,2、,消毒,用物理、化学或生物学的方法杀死病原微生物的过程。,具有消毒作用的药物称为消毒剂。,3,、常用的消毒试剂,4,、常用的灭菌方法,（1）加热灭菌,通过加热高温使菌体蛋白质并行凝固，酶失活，从而,达到杀菌目的。加热灭菌法包括湿热灭菌和干热灭菌。,同一温度下，湿热的杀菌效力比干热大，湿热的穿透,力比干热强，可增加灭菌效力；湿热的蒸汽有潜热存,在，这种潜热，能迅速跳被灭菌物品的温度。,干热灭菌法,通过使用干热空气杀灭微生物的方法。通常是把待灭,菌的物品包装后，放入干燥箱中加热至160，维持,2h，适用于空玻璃仪器、金属器具的灭菌。,湿热灭菌法,a)巴氏消毒法,巴氏消毒法既可杀死液体中致病菌的繁殖体，又不,破坏液体物质中原有的营养成分。典型的温度时间组,合有两种：一种是61.162.8，30min，另一种是,87.7，10min，现多用后一种。巴氏消毒法适用于,或酒类的消毒,b)煮沸消毒法,将物品加热煮沸20-30min从而达到灭菌的目的，但是,不能完全杀灭芽孢。适用于器材、器皿及小型日用物,品等的消毒,c）高压蒸汽灭菌法,利用水的沸点随着蒸汽压力的升高而升高的原理。当,蒸汽压力达到103.4kPa时，水蒸气的温度升高到121,，经15-20 min，可全部杀死物品上的各种微生物,和它们的孢子或芽孢。,（2）过滤除菌,利用细菌不能通过致密具孔滤材的原理，除去对热不,稳定的药品溶液或液体物质中的细菌的方法。过滤法,一般只能除菌，不能除去支原体和病毒。过滤除菌的,效果与滤膜的性能、孔径的大小、密度、滤膜的厚度,等因素有关。,（3）辐射灭菌,利用电磁波杀死大多数物质中的微生物的一种有效方,法。用于灭菌的电磁波有微波、紫外线、X射线和,射线等。紫外线仅适用于空气及物品表面的消毒。,4、影响灭菌与消毒的因素,（1）微生物的特性,（2）微生物污染程度,（3）温度,（4）湿度,