药品杂质解决方案.ppt

,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,青蛙,QQ,：,10024240,L/O/G/O,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,青蛙,QQ,：,10024240,药品杂质解决方案,1,目 录,杂 质 的 定 义,杂 质 的 分 类,不同种类杂质限度的确定,1,2,3,不同种类杂质限度的确定,4,杂质分析方法的选择,4,方法学验证注意的几个要点,5,2,杂质的定义,ICH Q3A,（,R2,）：新原料药中的杂质,Impurity:Any component of the new drug substance that is not the chemical entity defined as the new drug substance,杂质：不属于新原料的化学实体的任何新原料中的成分,（除原料药结构式成分之外的其他所有成分）,3,ICH,简介,四大块：,Quality Guidelines,（质量）,Safety Guidelines,（安全）,Efficacy Guidelines,（有效）,Multidisciplinary Guidelines,（多学科，除了上述三类）,4,ICH,简介,M4,：,CTD,M7,：基因毒性杂质,M8,：,eCTD,Q1D:,稳定性试验的括号法和矩阵法,Q1E,：稳定性数据的评价,推荐：,ICH,质量管理文件汇编,SFDA,药品认证管理中心,2010,年出版，只到,Q10,，有错误的地方。但是一些翻译比较符合中国药品注册语法习惯，也可以作为英文不好的对比参考。平时还是多关注,ICH,网站。,5,与杂质直接相关的,ICH,文件,Q3A,（,R2,）：新原料药中的杂质,Q3B,（,R2,）：新药制剂中的杂质,Q3C,（,R5,）：残留溶剂,Q3D:,元素杂质（,2013.7.26,。目前还是讨论稿，但是可 以参考，因为比较容易判断，本次不讲）,M7,：基因毒性杂质（,2013.2.6,）,6,杂质的分类,Q3A,：,有机杂质：起始物料、,副产物,、中间体、,降解产物,、试,剂（如：,N-,甲基吗啉,),、配位体（如：,EDTA,）、,催化剂。,无机杂质：试剂、配位体、催化剂；重金属或其他残留金属,；无机盐；其他物质（如过滤介质、活性炭）,残留溶剂：反应中使用的，,API,降解（酯水解得羧酸和醇）等。关注二类、三类溶剂中一类溶剂的残留。,M7,：,基因毒性杂质,7,杂质的分类（续）,其他：,外源性污染物：微生物，内毒素等。,多晶型：晶型杂质。,对映异构体。,总结：质量标准中检查项基本都与杂质相关,8,讨论,9,FDA,规定铅、砷、汞、镉必检,理由是这些元素污染无处不在，但是暂缓执行。反对理由之一可以用,GMP,来控制。,ICH Q4D,把上述元素定义为,1,类元素，即使不使用也需要进行风险评估；同样的钒、钼、硒、钴,2A,类的同样也是不使用也要风险评估。,ICH,的要求更严格，静等正式稿出台。,（,ICH,对元素的分类较原来,EMEA,的分类不同，需要注意）,限度的确定,重要性,限度是方法开发、验证的前提。,例：某方法验证结果检测限是,100ppm,（,0.01%,）,但是最终通过药理,/,毒理计算的限度是,10ppm,，彻底推翻了前期方法开发、验证的所有工作,。,10,限度的确定,有关物质,包括绝大多数的起始物料，副产物，中间体，降解产物。（原因：药理,/,毒理很难查到。自己去做相关的研究，仿制药不太现实。）,不包括试剂，配位体，催化剂，与残留溶剂一起讨论。（原因：药理,/,毒理可以查到，实在查不到，参考有关物质项）,主要指导文件：,Q3A,11,限度的确定,有关物质,Title in here,Title i here,最大日剂量,报告阈值,鉴定阈值,界定阈值,2g/,天,0.05%,0.10%,或者日摄入量,1.0mg,（以较低者为准，,1g/,天为界限）,0.15%,或者日摄入量,1.0mg,（以较低者为准，,0.67g/,天为界限）,2g/,天,0.03%,0.05%,0.05%,12,限度的确定,有关物质,例：某药品的最大日剂量为,0.5g,报告阈值：,0.05%,鉴定阈值：,0.10%,*,（,0.5g0.10%=0.5mg,1.0mg,）,界定阈值：,0.15%,（,0.5g0.15%=0.75mg,1.0mg,）,*：注意是,0.10%,，不是,0.1%,。只要不超过,0.15%,，都可以修约为,0.1%,。因此,0.10%,是比,0.1%,要严格的一个限度。,13,限度的确定,有关物质,“原始”结果,%,报告结果（,%,）,报告阈值,=0.05%,杂质的总摄入量（,mg,）,判断,鉴定阈值,界定阈值,0.044,未报告,0.2,未超过,未超过,0.0963,0.10,0.5,未超过,未超过,0.12,0.12,0.6,已超过,未超过,0.1649,0.16,0.8,已超过,已超过,14,限度的确定,有关物质,注意：,超过鉴定阈值杂质，在结构确认取得相应杂质对,照品后，应用外标法重新定量，以判断是否超过,界定阈值。,（因此对于仿制药来讲，不同于原研药品中已知杂,质的未知杂质，最好做到鉴定阈值以下）。,更详细的内容参考,ICH Q3A,讨论：,1,、个人经验，很多药典标准（,EP,，,USP,）不考虑用量，直接就是未知杂质不超过,0.10%,。,2,、现在高纯药物很多最大杂质也不超过,0.05%,，不,报告是否合适？可能,0.01%,的报告阈值更合适。,15,限度的确定,基因杂质,一、基因杂质的判断,二、限度的确定,16,限度的确定,基因杂质,一、,基因毒性杂质的判断：,1.,网站查询。例如：,toxnet.nlm.nih.gov/cpdb/index.html,(,苯甲醇，这里有收录，但是没有给出半数致癌量；但,NTP,的报告显示没有基因毒性）,2.,软件判定。详见,CDE,培训资料。,3.,结构判断。见下页：,17,18,限度的确定,基因杂质,19,限度的确定,基因杂质,20,限度的确定,一般毒性杂质,以下是重点内容：,一般毒性杂质的范围（,个人定义，有待商榷）,只要能查到毒理,/,药理数据的杂质。包括溶剂、试剂、催化剂、配位体；某些起始物料，中间体，反应副产物。,暂时不包括无机杂质，个人对无机杂质某些内容存有异议。,例：锡。无机锡是低毒，,ICH,Q3D,给的限度也很宽松,(,口服,PDE,：,6400g/,天）。但是有机锡特别是丁基锡是高毒的，也是环境公害物。即使我们投料时用的是诸如四氯化锡这样的无机物，但是参与的是有机反应，这种情况怎么处理？,个人暂时还没有对,Q3D,深入的研读，可能某些地方没有注意到，希望向熟悉的朋友学习。,21,限度的确定,一般毒性杂质,限度：直接选用,0.10%,，,10ppm,，,1ppm,？（不合理）,CDE,培训也反复讲到杂质限度，最科学合理的应该是根据毒理,/,药理数据来确定；包括前面讲的有关物质也最好用这样的方法。但是,CDE,及本人所参加过的所有培训均没有讲具体应该怎么确定。,苏州,CTD,培训在讲杂质研究的时候提出两个问题：,1,、怎么样根据毒理,/,药量计算限度？,Q3A,和,Q3B,没有给出办法。,2,、怎么样降到安全水平？,这是没有当场解决的,2,个问题。,答案：,1,、,Q3C,附录,3,给出办法。,2,、,1,）通过计算公式合理调整把限度提高。,2,）工艺人员想办法优化工艺，避免使用或者产生此杂质；或者针对这个杂质进行特别的精制，降低其残留量。,22,限度的确定,一般毒性杂质,23,EMA/CHMP/CVMP/SWP/169430/2012,（关于公共设备清洁验证）,关于残留限度，建议采用,PDE,，根据具体的毒理,/,药理数据来确定。,ICH Q3C,附录,3,24,ICH Q3C,附录,3,F3,：短期接触急性毒性研究的可变系数。,=1,研究时间至少为动物寿命一半（鼠、兔,1,年，猫、,狗、猴,7,年）,=1,器官形成的整个过程的生殖研究。,=2,啮齿动物,6,个月或者非啮齿动物,3.5,年的研究,=5,啮齿动物,3,个月或者非啮齿动物,2,年的研究,=10,更短的研究时间,F4,：用于产生严重毒性情况的系数。,=1,与母体毒性有关的胎儿毒性。,=5,无母体毒性的胎儿毒性。,=5,受母体毒性影响的致畸反应。,=10,无母体毒性影响的致畸反应。,F5,：一个可变系数，可用在没有建立不反应的量（,NOEL,）时。,25,ICH Q3C,附录,3,公式中除,NOEL,外其他的参数均已确定，,NOEL,多数情况下是不好得到的。一般是以,LOEL,代替（某种物质被人体或动物接触后，任何反应频率或严重性在生物学上明显增加的最低剂量。）,26,ICH Q3C,附录,3,27,ICH Q3C,附录,3,NOEL,的确定：,2,、,根据相应的动物试验资料确定,NOEL,（或,LOEL,）。,动物试验资料的获得：,各种数据库、文献，如：,Q3C,附录,3,3,、另外一个重要的公式，理想气体状态方程：,PV=nRT,很多资料吸入性研究，浓度是以,ppm,计，（算研究物质在空气中的浓度），这是一个分子个数比。需要用此方程转换成,mg/L,或者,mg/m3,的单位。,29,计算用的其他数据,大鼠的体重,425g,小鼠的呼吸量,43L/,天,怀孕大鼠体重,330g,兔呼吸量,1440L/,天,小鼠体重,28g,豚鼠呼吸量,430L/,天,怀孕小鼠体重,30g,人呼吸量,28800L/,天,豚鼠体重,500g,狗呼吸量,9000L/,天,罗猴体重,2.5kg,猴呼吸量,1150L/,天,兔体重（不论是否怀孕）,4kg,小鼠水消耗量,5ml/,天,比格犬体重,11.5kg,大鼠水消耗量,30ml/,天,大鼠呼吸量,290L/,天,大鼠食物消耗量,30g/,天,30,小结,31,例,1.,二乙胺残留限度的确定,举例,1,：二乙胺残留限度的确定。,CAS No.,：,109-89-7,美国国家毒理学纲要，,ntp.niehs.nih.gov/?objectid=D16D6C59-F1F6-975E-7D23D1519B8CD7A5,TR566,Toxicology and Carcinogenesis Studies of Diethylamine(CAS No.109-89-7)in F344/N Rats and B6C3F1 Mice(Inhalation studies),32,33,例,1.,二乙胺残留限度的确定,178,页，工程浩大，内容详实，感谢万恶的美帝。,没必要全部看懂，只需确定几个重要的参数,:,1,、试验动物的种属：小鼠，,F1=12,。,2,、试验时间：,2,年，小鼠的整个生命周期，,F3=1,（短、中、长。试验时间越长，越具有代表性，优选其数据。）,3,、产生的病变的具体情况：呼吸道病变，未有致癌性的证据。不是很严重的毒性，,F4=1,4,、产生病变的最低浓度,LOEL,：吸入试验，,16ppm,（注意理想气体方程转换）,5,、小鼠的接触时间（用于计算接触总量）：每天,6,小时，每周,5,天。,6,、其他：,F2=10,，,F5=1,（产生反应的量以确定），体重调整,50kg,。,34,例,1.,二乙胺残留限度的确定,35,例,1.,二乙胺残留限度的确定,36,例,1.,二乙胺残留限度的确定,37,例,1.,二乙胺残留限度的确定,38,例,2.,三苯基膦残留限度的确定,三苯基膦：,CDE,共性问题解答，新药，第十一个问题。,39,例,2.,三苯基膦残留限度的确定,三苯基膦：,CAS,号,：,603-35-0,先查,ntp.niehs.nih.gov,，未收载。,继续查找，在,esis.jrc.ec.europa.eu/index.php?PGM=dat,40,41,例,2.,三苯基膦残留限度的确定,里面记载的试验很多，要选取最严格的试验：,比格犬吸入毒性试验，接触浓度浓度为,0,、,0.0018,、,0.00945mg/L,每天,6,小时，每周,5,天，共试验,4,周；结论：高浓度发现神经功能缺损，两个浓度均使中枢神经系统发生组织学变化；未发现其具有基因毒性。,注意：这里面的浓度是,mg/L,，不是,ppm,。没必要换算浓度了,。,42,例,2.,三苯基膦残留限度的确定,43,例,2.,三苯基膦残留限度的确定,44,例,2.,三苯基膦残留限度的确定,45,例,2.,三苯基膦残留限度的确定,注意：,如果某品种一次给药,100mg/,天。,10,天为一周期，仅在周期第一天给药。因为毒性是一种长期的接触毒性。每天的给药剂量应是,100/10=10mg.,46,篇外,1.,47,篇外,1.,调整后：,A,：,乙腈,:0.1%,磷酸溶液,=40:60,B,：乙腈,:0.1%,磷酸溶液,=90:10,48,时间（分钟）,流动相,A,流动相,B,015,100,0,1530,100,到,0,0,到,100,3040,0,100,4050,0,到,100,100,到,0,5055,100,100,篇外,1.,49,篇外,2.HPLC,方法开发必须了解的小常识,50,1,、甲醇、乙腈,1,）乙腈紫外吸收较甲醇低，特别是在低波长处。,2,）乙腈比甲醇柱压低,3,）与水混合时，混合溶液的极性变化。乙腈，比例与极性线性变化。甲醇，非线性。,4,）纯乙腈的洗脱能力比纯甲醇强。同比例的乙腈水比同比例的甲醇水洗脱能力强。,5,）乙腈与水混合，吸热，溶液温度低，在缓慢恢复至室温时产生气泡。甲醇与水混合，放热。气泡容易放出。,6,）乙腈价格高。,总结：开发方法时，优选乙腈。但要注意气泡可能对基线造成的影响。最终可以考虑甲醇替代乙腈，以降低成本。,篇外,2.HPLC,方法开发必须了解的小常识,51,2,、缓冲盐,1,）流动相,pH,值得改变可影响弱酸弱碱的保留时间，对酯等中性化合的保留时间基本无影响。一般规律是抑制电离，保留时间增加。,2,）磷酸盐比醋酸盐的紫外吸收低,3,）钾盐比钠盐的溶解度高。,4,）一般浓度为几十个,mmol/L,。太低缓冲能力达不到，太高盐析出。,5,）如果要用,MS,检测技术，一定选用挥发性缓冲体系，例如，甲酸铵体系。,6,）强的酸、碱一般不能用调节,pH,的方法改变保留。选用相应的离子对试剂。,篇外,3.GC,方法开发必须了解的小常识,52,1,、实验室必备，弱极性，中等极性，强极性三根柱子。,2,、降低温度可以延长保留时间。但是对于甲醇，乙醇这种极性溶剂来讲，换极性色谱柱更有效增加保留时间。,3,、水做溶剂，直接进样。最大的压力不是来自于对色谱柱的的损伤。而是在常用溶剂里面水的蒸发膨胀系数最大。,1l,的水蒸发后气体体积在,1000l,以上。而安捷伦气相的进样衬管体积不到,900l,。多于的体积会四散流走。有可能向来气方向扩散，造成管路污染,精密度差，基线升高，甚至鬼峰出现。而通过清洗进样口是无法消除，必须换管路。,4,、,GC,难点不是开发方法本身，而是在于仪器设备的维护。建议动手能力强、思维活跃的男生来做,GC,。,Thank You!,53,