DB22∕T 1678-2012 豆芽中4-氯苯氧乙酸钠残留量的测定 液相色谱-质谱∕质谱法(吉林省).pdf

ICS 67.060 X 11 DB22 吉林省地方标准 DB 22/T 16782012 豆芽中 4-氯苯氧乙酸钠残留量的测定 液相色谱-质谱/质谱法 Determination of 4-Chlorophenoxyaceticacid in bean sprout LC-MS/MS method 2012-12-17 发布 2013-01-01 实施吉林省质量技术监督局 发 布 DB22/T 16782012 I 前 言 本标准按照GB/T 1.1-2009和GB/T 20001.4-2001给出的规则起草。本标准由吉林出入境检验检疫局提出并归口。本标准起草单位：吉林出入境检验检疫局技术中心。本标准主要起草人：杨帆、张勋、杨璐、宋清莲、顾婷婷、张代辉。DB22/T 16782012 1 豆芽中 4-氯苯氧乙酸钠残留量的测定 液相色谱-质谱/质谱法 1 范围 本标准规定了豆芽中 4-氯苯氧乙酸钠残留量的液相色谱-质谱/质谱测定方法。本标准适用于豆芽中 4-氯苯氧乙酸钠残留量的测定。2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法。3 原理 试料中的 4-氯苯氧乙酸钠用稀碱提取后，在酸性条件下用固相萃取柱将其吸附，甲醇洗脱，液相色谱-质谱/质谱仪测定，外标法定量。4 试剂材料 除另有说明外，所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的一级水。4.1 氢氧化钠(NaOH)：优级纯。4.2 磷酸二氢钠（NaH2PO42H2O）：优级纯。4.3 磷酸（H3PO4）。4.4 甲醇（CH3OH）：色谱纯。4.5 氢氧化钠溶液(0.01 mol/L)：准确称取 0.40 g 氢氧化钠（4.1），溶于水并稀释至 1 000 mL。4.6 50%的磷酸溶液：取 100 mL磷酸，加水稀释至 200 mL。4.7 磷酸盐缓冲液(0.01 mol/L)：称取 1.56 g 的磷酸二氢钠（4.2）加水溶解，并定容至 1 000 mL，用50%的磷酸溶液(4.6)调节 pH 值至 4.0。4.8 4-氯苯氧乙酸钠（C8H7ClO3Na，4-Chlorophenoxyaceticacid，CAS 号：13730-98-8）：纯度99%。4.9 4-氯苯氧乙酸钠标准溶液储备液（100 mg/L）：准确称取适量 4-氯苯氧乙酸钠标准物质（4.8）用甲醇溶解并全部转移至 100 mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，混匀，0 4 可避光保存 6 个月。4.10 4-氯苯氧乙酸钠标准工作液的配制：准确吸取 1.0 mL 标准溶液储备液（4.9）置于 100 mL容量瓶中用甲醇稀释成 1.0 mg/L 的稀释液，准确吸取该稀释液适量于容量瓶中，用甲醇依次配制成浓度为0.01 mg/L、0.02 mg/L、0.05 mg/L、0.1 mg/L、0.2 mg/L 的系列标准溶液。4.11 HLB 固相萃取柱：6 mL/500 mg。使用前依次用 5 mL 甲醇、5 mL水活化，保持柱体湿润。4.12 滤膜：0.22 m，有机系。DB22/T 16782012 2 5 仪器 5.1 液相色谱-质谱/质谱仪：配备电喷雾离子源（ESI）。5.2 高速匀浆机。5.3 高速离心机：10 000 r/min。5.4 旋转蒸发仪。5.5 天平：感量 0.0001 g 和 0.01 g。5.6 涡旋混合器 6 试样的制备 取有代表样品采用四分法分样后，经粉碎机粉碎，混匀，密封，作为试料，标明标记。7 分析步骤 7.1 提取 称取样品 10.0 g（精确至 0.01 g）于 50 mL离心管中，加入 20 mL 0.01 mol/L氢氧化钠溶液（4.5），用高速匀浆机混匀 3 min，10 000 r/min 离心 3 min，上清液转入 50 mL 容量瓶，残渣再分别用 15 mL、10 mL 0.01 mol/L 氢氧化钠溶液（4.5）重复提取各 1 次，合并上清液，并用 0.01 mol/L氢氧化钠溶液（4.5）定容至刻度，摇匀，备用。7.2 净化 将7.1中的提取液加入2 mL 50%磷酸溶液（4.6），慢速通过已活化的HLB小柱，用2 mL 0.01 mol/L磷酸盐缓冲液（4.7）去杂质,弃去全部流出液，用5 mL甲醇洗脱，收集洗脱液在40下用氮气吹至近干，用甲醇溶解并定容至2 mL，经0.22 m滤膜，供液相色谱-质谱/质谱分析。7.3 空白试验 除不称取试料外，均按7.1、7.2进行。7.4 测定 7.4.1 色谱参考条件 色谱参考条件如下：a)色谱柱：C18色谱柱，150 mm2.1 mm（i.d.），粒径 3.5 m；b)柱温:30；c)流速：0.2 mL/min；d)进样量：10 L；e)进样方式：无分流；f)流动相：0.1%甲酸水-乙腈；g)流动相、流速及梯度洗脱条件见表 1。DB22/T 16782012 3 表1 流动相、流速及梯度洗脱条件 时间 min 流速 mL/min 0.1%甲酸水溶液 乙腈 0 0.2 70 30 5 0.2 0 100 8 0.2 0 100 8.1 0.2 70 30 16 0.2 70 30 7.4.2 质谱参考条件 质谱参考条件如下：a)电离方式：电喷雾电离（ESI）；b)扫描方式：正离子扫描，多反应监测（MRM）；c)去簇电压：-50 V；d)离子源温度：550；e)雾化气：1.5 MPa；f)辅助气：1.5 MPa；g)监测离子：见表 2。表2 目标化合物的监测离子对、去簇电压和碰撞能量 化合物名称 母离子 m/z 子离子 m/z 去簇电压 碰撞能量 127-50-20 4-氯苯氧乙酸钠 184 91-50-38 7.4.3 定性分析 在同一色谱/质谱条件下进行标准溶液和样品溶液的测定，如果样品溶液中检出的色谱峰的保留时间与标准物质色谱峰的保留时间一致，所选择的两对子离子的质荷比也一致，而且样品定性离子的相对丰度与浓度相当标准工作溶液的定性离子的相对丰度相比较，相对标准偏差不超过表3规定的范围，则可判定样品中存在该物质。标准溶液的多反应监测色谱图参见附录A。表3 定性确定时相对离子丰度的最大允许偏差 相对离子丰度 50%20%至50%10%至20%10%允许的相对偏差 20%25%30%50%7.4.4 定量测定 根据试料中被测样液中被测组分的含量情况，选取响应值相近的标准工作液进行分析，对于高浓度样品须适当进行系列稀释。标准工作液和样液中被测组分的响应值均应在仪器线性响应范围内。在上述色谱条件下，4-氯苯氧乙酸钠的参考保留时间为6.68 min，外标法定量。8 结果的计算和表述 DB22/T 16782012 4 用色谱数据处理机或按公式（1）计算试样中4-氯苯氧乙酸钠残留含量，计算结果需扣除空白值。mVcX=.(1)式中：X 试料中被测组分残留量，单位为毫克每千克（mg/kg）；c 从标准曲线读出的被测组分溶液浓度，单位为微克每毫升（g/mL）；V 样液最终定容体积，单位为毫升（mL）；m 样液所代表的最终试料的质量，单位为克（g）。计算结果保留两位有效数字。9 定量限、回收率、重复性和再现性 9.1 定量限 本方法定量限为0.01 mg/kg。9.2 回收率 样品中4-氯苯氧乙酸钠的添加浓度及其回收率参见附录B。10 精密度 10.1 重复性 在重复性条件下，获得的两次独立测试结果的绝对差值不大于这两个测定结果的算术平均值的15%。10.2 再现性 在再现性条件下，获得的两次独立测试结果的绝对差值不大于这两个测定结果的算术平均值的20%。DB22/T 16782012 5 A A 附 录 A（资料性附录）4-氯苯氧乙酸钠准品液相色谱-质谱/质谱图 图A.1 4-氯苯氧乙酸钠标准品液相色谱-质谱/质谱图（0.01 mg/L）4-氯苯氧乙酸钠 4-氯苯氧乙酸钠 4-氯苯氧乙酸钠 DB22/T 16782012 6 B B 附 录 B（资料性附录）不同添加水平回收率范围及重现性（n=10）表B.1 4-氯苯氧乙酸钠的添加回收率及重现性 样品 添加浓度 mg/kg 回收率范围%相对标准偏差%0.10 80.1101 7.94 0.20 85.298.3 4.83 豆芽 1.00 88.399.7 4.19 _