NY∕T 4425-2023 饲料中米诺地尔的测定.pdf

2023?12?22发布2024?05?01实施饲料中米诺地尔的测定46中华人民共和国农业行业标准备案号：XXXX-XXXX65.120CCS B44252023Determination of minodixil in feeds中华人民共和国农业农村部发 布N Y/T 前言本文件按照G B/T 标准化工作导则第部分:标准化文件的结构和起草规则 的规定起草.请注意本文件的某些内容可能涉及专利.本文件的发布机构不承担识别专利的责任.本文件由农业农村部畜牧兽医局提出.本文件由全国饲料工业标准化技术委员会(S A C/T C)归口.本文件起草单位:上海市兽药饲料检测所、上海市农业科学院.本文件主要起草人:黄士新、张婧、王博、严凤、吴剑平、曹莹、白冰、商军、杨海锋、黄家莺、华贤辉、徐汀、潘娟、司文帅、陶玉洁、贡松松.N Y/T 饲料中米诺地尔的测定范围本文件描述了饲料中米诺地尔的液相色谱串联质谱和高效液相色谱测定方法.本文件液相色谱串联质谱法适用于配合饲料、浓缩饲料、精料补充料、添加剂预混合饲料和混合型饲料添加剂中米诺地尔的测定;高效液相色谱法适用于浓缩饲料、精料补充料、添加剂预混合饲料和混合型饲料添加剂中米诺地尔的测定.本文件液相色谱串联质谱法检出限为 g/k g、定量限为 g/k g,高效液相色谱法的检出限为 m g/k g、定量限为 m g/k g.规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款.其中,注日期的引用文件,仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件.G B/T 分析实验室用水规格和试验方法G B/T 动物饲料试样的制备术语和定义本文件没有需要界定的术语和定义.液相色谱串联质谱法(仲裁法)原理试样中的米诺地尔用甲醇振荡提取,经混合型强阳离子固相萃取小柱净化,液相色谱串联质谱仪测定,外标法定量.试剂或材料除非另有规定,仅使用分析纯试剂.水:G B/T ,一级.甲醇.甲醇:色谱纯.乙腈:色谱纯.甲酸:色谱纯.氨水甲醇溶液:取m L氨水,加甲醇()稀释至 m L,混匀.甲酸溶液:取m L甲酸(),加水稀释至 m L,混匀.甲酸乙腈溶液:取m L甲酸(),加乙腈()稀释至 m L,混匀.标准储备溶液(m g/m L):称取米诺地尔标准品(C A S号:,纯度不低于)m g(精确至 g)于 m L棕色容量瓶中,用甲醇()溶解定容.以下避光保存,有效期为个月.标准中间溶液(g/m L):准确移取标准储备溶液()m L于 m L棕色容量瓶中,用 甲酸溶液()定容.避光保存,有效期为个月.标准中间溶液(g/m L):准确移取标准中间溶液()m L于 m L棕色容量瓶中,用 甲酸溶液()定容.避光保存,有效期为个月.N Y/T 标准系列溶液:分别准确移取适量标准中间溶液()于棕色容量瓶中,用 甲酸溶液()稀释、定容,配制成浓度为 n g/m L、n g/m L、n g/m L、n g/m L、n g/m L、n g/m L标准系列溶液.临用现配.混合型强阳离子固相萃取小柱:m g/m L.微孔滤膜:m,水系.仪器设备 液相色谱串联质谱仪:配电喷雾离子源.天平:精度为 g和 g.振荡器:转速 r/m i n r/m i n.离心机:转速不低于 r/m i n.涡旋混合器.固相萃取装置.氮吹仪.样品按G B/T 的规定制备试样,不少于 g,粉碎使其全部通过 mm孔径的分析筛,充分混匀,装入磨口瓶,备用.试验步骤 提取平行做份试验.称取试样g(精确至 g),于 m L离心管中,准确加入 m L甲醇(),r/m i n振荡提取 m i n,r/m i n离心m i n,准确移取上清液 m L于 m L离心管中,加入m L 甲酸溶液(),涡旋混匀,备用.净化固相萃取小柱()依次用m L甲醇()和m L水预淋洗,取备用液()全部过柱,依次用m L水和m L甲醇()淋洗,用m L氨水甲醇溶液()洗脱,收集洗脱液,于 下用氮气吹干,准确加入m L 甲酸溶液(),溶解,涡旋混匀,用微孔滤膜()过滤,待测.测定 液相色谱参考条件液相色谱参考条件如下:a)色谱柱:C 柱,柱长 mm,内径 mm,粒径 m,或性能相当者;b)流动相:A相为 甲酸溶液(),B相为 甲酸乙腈溶液(),梯度洗脱程序见表;c)柱温:;d)流速:m L/m i n;e)进样量:L.表梯度洗脱程序时间,m i nA相,B相,N Y/T 质谱参考条件质谱参考条件如下:a)电离方式:电喷雾电离,正离子模式(E S I);b)检测方式:多反应监测(MRM);c)脱溶剂气:L/h;d)反吹气:L/h;e)雾化器温度:;f)电离电压:k V;g)离子源温度:.h)多反应监测(MRM)离子对、锥孔电压及碰撞能量见表.表米诺地尔多反应监测(MRM)离子对、锥孔电压及碰撞能量参考值被测物名称监测离子对m/z锥孔电压V碰撞能量e V米诺地尔 a a为定量离子.标准系列溶液和试样溶液测定在仪器的最佳条件下,分别取标准系列溶液()和试样溶液()上机测定.米诺地尔特征离子质量色谱图见附录A.定性测定在相同试验条件下,试样溶液中米诺地尔的保留时间应与标准系列溶液(浓度相当)中米诺地尔的保留时间一致,其相对偏差在 之内.根据表选择的监测离子对,比较试样谱图中米诺地尔监测离子对的相对离子丰度与浓度接近的标准系列溶液中监测离子对的相对离子丰度,若偏差不超过表规定的范围,则可判定为样品中存在米诺地尔.表定性测定时相对离子丰度的最大允许偏差单位为百分号相对离子丰度 最大允许偏差 定量测定以米诺地尔的浓度为横坐标、定量离子对峰面积为纵坐标,绘制标准曲线,其相关系数应不低于 .用单点或多点进行定量,试样溶液中待测物的浓度应在标准曲线的线性范围内.如超出范围,应将试样溶液用 甲酸溶液()稀释后,重新测定.单点校准定量时,试样溶液中待测物的浓度与标准溶液浓度相差不超过.试验数据处理试样中米诺地尔含量以质量分数计.多点校准按公式()计算,单点校准按公式()计算.wVV Vm n()式中:w 试样中米诺地尔含量的数值,单位为微克每千克(g/k g);由标准曲线得到的试样溶液中米诺地尔的浓度的数值,单位为纳克每毫升(n g/m L);V 试样提取液体积的数值,单位为毫升(m L);V 净化后最终定容体积的数值,单位为毫升(m L);换算系数;N Y/T V 用于净化的上清液体积的数值,单位为毫升(m L);m 试样质量的数值,单位为克(g);n 稀释倍数.wAVVs AsVm n()式中:A 试样溶液的色谱峰面积;s 标准溶液中米诺地尔浓度的数值,单位为纳克每毫升(n g/m L);As 标准溶液色谱峰面积.测定结果以平行测定的算术平均值表示,保留位有效数字.精密度在重复性条件下,次独立测定结果与其算术平均值的绝对差值不大于其算术平均值的.高效液相色谱法 原理试样中的米诺地尔用甲醇振荡提取,经混合型强阳离子固相萃取小柱净化,高效液相色谱仪测定,外标法定量.试剂或材料除非另有规定,仅使用分析纯试剂.水:G B/T ,一级.甲醇.甲醇:色谱纯.乙腈:色谱纯.甲酸:色谱纯.氨水甲醇溶液:取m L氨水,加甲醇()稀释至 m L,混匀.甲酸溶液:取m L甲酸(),加水稀释至 m L,混匀.磷酸溶液:取m L磷酸,用水稀释至 m L,混匀,过滤.乙腈 磷酸溶液:取 m L乙腈()与 m L 磷酸溶液()混匀.标准储备溶液(m g/m L):称取米诺地尔标准品(C A S号:,纯度不低于)m g(精确至 g)于 m L棕色容量瓶中,用甲醇()溶解定容.以下避光保存,有效期为个月.标准中间溶液(g/m L):准确移取标准储备溶液()m L于 m L棕色容量瓶中,用乙腈 磷酸溶液()定容.避光保存,有效期为个月.标准系列溶液:分别准确移取适量标准中间溶液()于棕色容量瓶中,用乙腈 磷酸溶液()稀释、定容,配制成浓度为 g/m L、g/m L、g/m L、g/m L、g/m L、g/m L、g/m L标准系列溶液.临用现配.混合型强阳离子固相萃取小柱:m g/m L.微孔滤膜:m,有机系.仪器设备 高效液相色谱仪:配紫外检测器或二极管阵列检测器.天平:精度为 g和 g.振荡器:转速 r/m i n r/m i n.离心机:转速不低于 r/m i n.N Y/T 涡旋混合器.固相萃取装置.氮吹仪.样品按G B/T 的规定制备试样,不少于 g,粉碎使其全部通过 mm孔径的分析筛,充分混匀,装入磨口瓶,备用.试验步骤 提取平行做份试验.称取试样g(精确至 g),于 m L离心管中,准确加入 m L甲醇(),r/m i n振荡提取 m i n,r/m i n离心m i n,准确移取上清液m L于 m L离心管中,加入m L 甲酸溶液(),涡旋混匀,备用.净化固相萃取小柱()依次用m L甲醇()和m L水预淋洗,取备用液()全部过柱,依次用m L水和m L甲醇()淋洗,用m L氨水甲醇溶液()洗脱,收集洗脱液,于 下用氮气吹干,准确加入m L乙腈 磷酸溶液(),溶解,涡旋混匀,用微孔滤膜()过滤,待测.测定 高效液相色谱参考条件高效液相色谱参考条件如下:a)色谱柱:C 柱,柱长 mm,内径 mm,粒径m,或性能相当者;b)流动相:磷酸溶液()乙腈();c)柱温:;d)流速:m L/m i n;e)检测波长:n m;f)进样量:L.标准系列溶液和试样溶液测定在仪器的最佳条件下,分别取标准系列溶液()和试样溶液()上机测定.米诺地尔标准溶液高效液相色谱图见附录B.定性测定在相同试验条件下,试样溶液中米诺地尔的保留时间应与标准系列溶液(浓度相当)中米诺地尔的保留时间一致,其相对偏差在 之内.定量测定以米诺地尔的浓度为横坐标、色谱峰面积为纵坐标,绘制标准曲线,其相关系数应不低于 .用单点或多点进行定量,试样溶液中待测物的浓度应在标准曲线的线性范围内.如超出范围,应将试样溶液用乙腈 磷酸溶液()稀释后,重新测定.单点校准定量时,试样溶液中待测物的浓度与标准溶液浓度相差不超过.试验数据处理试样中米诺地尔含量以质量分数计.多点校准按公式()计算,单点校准按公式()计算.wVV Vm n()式中:w 试样中米诺地尔含量的数值,单位为毫克每千克(m g/k g);由标准曲线得到的试样溶液中米诺地尔浓度的数值,单位为微克每毫升(g/m L).N Y/T wAVVs AsVm n()式中:s 标准溶液中米诺地尔浓度的数值,单位为微克每毫升(g/m L).测定结果用平行测定的算术平均值表示,保留位有效数字.精密度在重复性条件下,次独立测定结果与其算术平均值的绝对差值不大于其算术平均值的.N Y/T 附录A(资料性)米诺地尔标准溶液特征离子质量色谱图米诺地尔标准溶液特征离子质量色谱图见图A .标引序号说明:米诺地尔定量监测离子();米诺地尔监测离子().图A 米诺地尔标准溶液(n g/m L)特征离子质量色谱图N Y/T 附录B(资料性)米诺地尔标准溶液高效液相色谱图米诺地尔标准溶液高效液相色谱图见图B .标引序号说明:米诺地尔.图B 米诺地尔标准溶液(g/m L)高效液相色谱图