实验五-大肠杆菌与沙门氏菌.ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,实验六,细菌生化特性试验,扬州大学兽医学院,18 八月 2025,实验原理,各种细菌在其新陈代谢中，由于利用营养物质的能力有所差异，排泄的代谢产物亦不同，所以利用这点进行生化试验，可达到鉴定细菌种的目的，尤其在鉴定肠道杆菌时，生化试验是极其常用的一种方法。,一、目的要求,学习常用的生化实验方法；,掌握,大肠杆菌与沙门氏菌,的主要生化特点。,个体为杆状,散在或成对,G,二、背景知识介绍,大肠杆菌,中等大小,0.4-0.72-3m,大肠埃希氏菌是这个菌群的代表成原；,与广泛的兽医临床病征有关，如：,犊牛的肠道感染和水泻；,幼猪的水泻和腹泻，断奶仔猪水肿病；,狗的尿道感染；,鸡：脐炎、眼炎、肠炎、肝周炎、肺炎、,气囊炎、腹膜炎、肉芽肿等,。,个体为杆状,散在或成对,G,沙门氏菌,是一大群寄生于人和动物肠道内、生化特性和抗原结构相似，,G,，兼性厌氧的无芽胞直杆菌。,在医学、兽医和公共卫生上均十分重要：,绝大多数沙门氏菌对人和动物有致病性；,能致人和动物多种不同临床表现的沙门氏菌病；,人类食物中毒的主要病原之一。,伤寒沙门氏菌,鼠伤寒沙门氏菌,除,雏沙门,和,鸡沙门氏菌,外，其余各菌具有周生鞭毛。,三、实验材料,常规接种工具：接种棒、酒精灯等,革兰氏染色液、玻片、滴管 等,菌种,:,大肠杆菌的普通琼脂（或麦康凯）培养物（,1,个,/,组）,沙门氏菌的普通琼脂（或麦康凯）培养物（,1,个,/,组）,大肠杆菌、沙门氏菌的邓亨氏蛋白胨水培养物；,大肠杆菌、沙门氏菌的葡萄糖蛋白胨水培养物。,培养基：,三糖铁斜面（,1,支,/,人）,生化管：,葡、乳、麦、甘、蔗、,H,2,S,、尿、枸（,1,套,/,人）,试剂：,吲哚试剂、,M.R,试剂、,V-P,试剂 等,四、实验内容,观察,大肠杆菌在普通琼脂上的生长表现；,大肠杆菌在麦康凯平板上生长表现；,沙门氏菌在普通琼脂上的生长表现；,沙门氏菌在麦康凯平板上生长表现；,大肠杆菌与沙门氏菌的革兰氏染色、镜检；,记录结果。,三糖铁琼脂接种,挑取待试菌菌落穿刺接种三糖铁底部并涂布于斜面；,置,37,培养。,生化管接种培养,糖发酵试验：,葡 乳 麦 甘 蔗,H,2,S,试验；,尿素酶试验；,枸橼酸盐利用试验。,葡 乳 麦 甘 蔗,H,2,S,尿 枸,葡 乳 麦 甘 蔗,H,2,S,尿 枸,大肠杆菌,沙门氏菌,大肠杆菌,沙门氏菌,置,37,培养,吲哚试验,接种大肠杆菌或沙门氏菌于,5mL,邓亨氏蛋白胨水中，置,37,培养,3-5d,；,静置分层后，沿试管壁加入吲哚试剂,1mL,；,上层变为红色者为阳性反应。,乙醚,混匀,分层,吲哚试剂,阳性,阴性,吲哚试验原理,蛋白质中的色氨酸,有些细菌,如大肠埃希氏菌,吲哚,对位二甲基氨基,苯甲醛,+,玫瑰吲哚,红色,试剂配方一：,对二甲基氨基苯甲醛,1g,无水乙醇,95mL,浓盐酸,20mL,试剂配方二：,对,二甲基,氨基苯甲醛 5g,戊醇（或异戊醇）75m,L,浓盐酸,25m,L,先用乙醇溶解试剂后加盐酸，避光保存。,M.R,试验,接种大肠杆菌或沙门氏菌于,5mL,葡萄糖蛋白胨水中，置,37,培养,3-5d,）；,于培养物中加入几滴试剂；,变红色者为阳性反应，,桔红到黄色则为阴性。,M.R,试剂,阳性,阴性,V-P,试验,接种大肠杆菌或沙门氏菌于,1mL,葡萄糖蛋白胨水中，置,37,培养,3-5d,）；,于培养物中加入,0.5mL V-P,甲液；,随后加,V-P,乙液,0.5mL,，轻摇；,静置,10-15min,。,15min,内变红者为阳性。,V-P甲液,V-P,乙液,阳性,阴性,M.R,与,V-P,试验原理,M.R,试验,：,甲基红是一种,pH,指示剂：,当细菌分解葡萄糖产酸且产酸量大时；,在加入甲基红指示剂后显红色为阳性。,pH 4.4-6.2,红 黄,葡萄糖,丙酮酸,乙酰甲基甲醇,2,3-,丁二烯醇,某些细菌能发酵,二乙酰,碱,V-P,试验,：,+,胨中的胍基化合物,注意：,通常,M.R,和,V-P,试验是密切相关：,如果一个微生物,M.R,是阳性，则,V-P,是阴性；或者相反。,粉红色化合物,+,M.R,试剂,V-P,试剂,甲基红,0.02g,95,酒精,60mL,蒸馏水,40mL,甲液：,萘酚酒精溶液,（,萘酚,5g,无水乙醇,100mL,）,乙液：,KOH,溶液,（,KOH 40g,，水,100ml,）,将甲液和乙液分装棕色瓶中，于,4-10,保存。,五、结果观察,大肠杆菌的生长表现,普通琼脂,：形成圆形、光滑、湿润、半透明、灰白色菌落，直径约,23mm,；,麦康凯,：琼脂上形成,红色菌落,较大的菌落。,三糖铁琼脂,斜面,产酸（黄色）,底部,产酸（黄色）,产气,H,2,S,反应模式表示：,A,A,；,沙门氏菌的生长表现,普通琼脂,：生长不良；,麦康凯,：琼脂上形成,灰白色菌落,。,三糖铁琼脂,斜面,产碱（红色）,底部,产酸（黄色）,产气,H,2,S,反应模式表示：,K,A,(,),；,(,),细菌的染色、镜检,大肠杆菌,沙门氏菌,G,直杆菌，大小,0.4-0.72-3m,，,无芽胞，两端钝圆，散在或成对。,生化管接种培养,葡 乳 麦 甘 蔗,H,2,S,尿 枸,葡 乳 麦 甘 蔗,H,2,S,尿 枸,大肠杆菌,沙门氏菌,/-,吲哚、,M.R,、,V-P,试验结果,大肠杆菌,沙门氏菌,吲哚试验,M.R,试验,V-P,试验,吲哚试验,M.R,试验,V-P,试验,六、思考题,革兰氏染色特性与形态特点？,在麦康凯平板上的生长表现？,在三糖铁琼脂上的生长表现？,常规糖发酵情况？,IMViC,试验结果？,大肠杆菌与沙门氏菌：,