低温胁迫下漯麦163的生理生化变化及抗寒基因表达分析.pdf

麦类作物学报2 0 2 3，43（10）：12 98 130 3Journal of Triticeae Crops网络出版时间：2 0 2 3-0 8-2 5网络出版地址：https：/lin k.c n k i.n e t/u r lid/6 1.1359.s.2 0 2 30 8 2 3.17 46.0 0 8低温胁迫下漯麦16 3的生理生化变化及抗寒基因表达分析doi:10.7606/j.issn.1009-1041.2023.10.10曹燕燕 葛昌斌，廖平安，崔江宽，黄杰，郭春强,王君，卢雯（1.漯河市农业科学院，河南漯河46 2 30 0；2.河南农业大学植物保护学院，河南郑州450 0 0 2）摘要：为明确拔节期低温对小麦新品种漯麦16 3的生理生化以及抗寒基因表达特性的影响，以漯麦163及其母本漯麦6 0 10 为材料，于拔节期在人工智能低温室进行低温胁迫，分析低温胁迫对两品种叶片叶绿素含量、超氧化物歧化酶（SOD)活性和脯氨酸含量的影响，并对抗寒相关基因（SOD、W C S12 0、LEA 和P5CS）的表达模式进行分析。结果表明，持续低温胁迫下，两个品种的叶绿素含量均显著下降，SOD活性和脯氨酸含量均呈现先升后降的变化趋势。对抗寒相关基因的表达模式进行分析，发现与对照（低温处理0 d)相比，低温胁迫下,SOD和WCS120基因的表达量在两品种中于处理后不同时间点均显著下降;LEA基因的表达量在漯麦6 0 10 中于处理后不同时间点显著下降，而在漯麦16 3中于低温处理1d后显著提高;P5CS基因的表达量在漯麦16 3于低温处理3d后以及在漯麦6 0 10 于低温处理2 d和3d后均显著提高。结合大田观察，发现漯麦16 3和漯麦6 0 10 均具有较强的耐倒春寒能力，可作为抗寒性亲本种质资源。关键词：小麦；拔节期；抗寒性；生理生化；抗寒基因中图分类号：S512.1;S330Physiological and Biochemical Changes and Expression Characteristics of ColdResistance Genes of Luomai 163 in Response to Low Temperature Stress(1.Luohe Academy of Agricultural Sciences,Luohe,Henan 462300,China;2.College of Plant Protection,HenanAbstract:In order to understand the effects of low temperature on the physiological,biochemical andcold-resistant gene expression characteristics of a new wheat variety Luomai 163 at jointing stage,Lu-omai 163 and its female parent Luomai 6010 were used as materials.Low temperature stress was ap-plied in artificial climate chamber,and the effects of low temperature treatment on chlorophyll con-tent,superoxide dismutase(SOD)activity and proline content of leaves,and the expression patternsof cold-resistance related genes(SOD,WCS120,LEA and P5CS)were analyzed.The results showedthat under continuous low temperature treatment,chlorophyll content of the two varieties decreasedsignificantly;SOD activity and proline content increased first and then decreased.The expression pat-terns of cold-resistance related genes were analyzed,and compared with the control(low temperaturetreatment for O d);the expression levels of SOD and WCS120 in the two varieties were decreased sig-nificantly at different treatment time.The expression levels of LEA gene were decreased significantlyat different treatment time in Luomai 6010,but increased significantly in Luomai 163 after low tem-perature treatment for 1 d.The expression of P5CS gene was increased significantly in Luomai 163 af-收稿日期：2 0 2 2-0 8-11基金项目：国家现代农业产业技术体系专项（CARS-03）；河南省重大科技专项（2 0 130 0 110 8 0 0）；漯河市重大科技创新专项(20210112)第一作者E-mail:通讯作者：廖平安（E-mail:）文献标识码：ACAO Yanyan,GE Changbin,LIAO Pingan,CUI Jiangkuan?,HUANG Jie,GUO Chunqiang,WANG Jun,LU WenyingAgricultural University,Zhengzhou,Henan 450002,China)修回日期：2 0 2 2-11-2 4文章编号：10 0 9-10 41(2 0 2 3)10-12 98-0 6第10 期ter low temperature treatment for 3 d and in Luomai 6010 after low temperature treatment for 2 d and3 d.Combined with field observation,Luomai 163 and Luomai 6010 showed strong cold tolerance,which can be used as a good germplasm resource for cold resistance,so as to speed up the breeding ofcold resistant wheat varieties.Keywords:Wheat;Jointing stage;Cold resistance;Physiological characteristic;Cold-resistance relatedgenes曹燕燕等：低温胁迫下漯麦16 3的生理生化变化及抗寒基因表达分析：12 9 9 目前全球气候逐渐变暖，促使小麦幼穗分化进程加快，拔节期提前，进而导致春季低温（倒春寒)来临时小麦更易受到冻害。同时随着倒春寒天气发生频率和强度增加，也严重影响了小麦的产量和品质。因此，倒春寒已成为限制小麦高产的主要气象灾害之一。黄淮麦区作为中国小麦主产区之一，每年小麦播种面积和产量约占全国小麦播种总面积和产量的58%和6 7%1。目前倒春寒已成为该地区重要的农业气象灾害之一，主要发生在春季3月下旬至4月上中旬，此时小麦正处于拔节至开花期，幼穗分化正处于雌雄蕊分化期至四分体时期，处于低温敏感期 2 ，连续3d以上的低温就会对小麦造成巨大的伤害。2 0 0 4一2 0 0 5年黄淮麦区发生了大规模的倒春寒，其中仅河南省的受灾面积就超过1.3310 hm，绝收面积高达2.6 7 105hm左右 3；2 0 0 9年再次遭遇倒春寒，使该地区小麦大面积减产，损失严重 4；2 0 12 一2 0 13年，黄淮麦区遭受6 0 年一遇的特重倒春寒，仅3月下旬到4月下旬就发生了10 次，受灾面积达总播种面积的41.8%17。倒春寒的频繁发生、不规律性和不可控性，加上灾前预防不及时，灾后补救措施难实施，都会对小麦产量造成巨大的损失 5，因此倒春寒已成为黄淮麦区小麦生产中急需解决的关键问题。开展倒春寒对小麦品种生长发育及其产量形成的影响研究，为提高小麦抗寒性提供理论和技术支撑，并对保障黄淮麦区小麦的高产、稳产具有重要的理论和实践意义。小麦抗寒性是由多个因素共同作用的的结果,是一个复杂的生物性状6 。研究表明，小麦的抗寒性与叶绿素含量、抗氧化酶活性、丙二醛含量、可溶性蛋白含量 1,7-1等密切相关。小麦在受到低温胁迫时，体内会发生一系列适应低温的生理生化变化，这也是植物抗寒能力最基本的反映，同时低温会诱导小麦体内抗寒相关基因的表达。小麦抗寒性是由多个微效基因控制，目前，在小麦苗期低温驯化过程中已分离鉴定出超过450 个抗寒基因,但春季低温下的表达情况研究较少 12 。为深入研究小麦响应倒春寒的生理生化及抗寒基因的表达情况，本研究选取在田间春季拔节期抗寒性表现较好的小麦品种漯麦16 3及其母本漯麦6 0 10 为研究对象，于拔节期在人工智能低温室进行低温胁迫，分析低温胁迫对小麦体内叶绿素、脯氨酸含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性以及抗寒相关基因（SOD、W C S12 0、LEA 和P5CS）表达量的影响，以期为小麦品种抗寒性评价方法的建立以及抗寒性遗传改良提供理论依据。1材料与方法1.1试验材料供试小麦材料为国审品种漯麦16 3及其母本漯麦6 0 10,均为弱春性品种，由漯河市农业科学院提供。1.2试验方法试验于2 0 2 0 一2 0 2 1年在漯河市农业科学院试验基地采用盆栽法进行。用内径30 cm、高6 0cm的无底花盆，花盆底部用网袋扎紧，表面与地表持平。花盆内根据大田0 2 0 cm、2 0 40 c m、406 0 c m 土层分层填土压实，浇透水沉实土壤后于10 月18 日播种，每个品种种植12 盆，其中9盆用于低温胁迫处理，用于取样；其余3盆进行常温处理，作为对照，共计2 4盆。于3叶期进行定苗，每盆留苗10 株。根据土壤情决定浇水量，每盆浇水量一致。1.2.1低温胁迫处理于拔节期，将18 盆小麦（每个品种9盆)移人人工智能低温室进行低温（一5）胁迫处理，分别于低温处理1d、2 d 和3d时取主茎最上部展开叶，用于生理生化指标测定和抗寒基因表达分析。每个品种取3盆，3次重复，以常温处理为对照。1.2.2生理生化指标的测定叶绿素、脯氨酸含量以及SOD活性的测定均利用酶联免疫分析(ELISA)试剂盒说明书进行。13001.2.3抗寒基因的表达模式分析用RNA提取试剂盒提取小麦叶片总RNA，用 Prime Script RT reagent Kit with gDNA E-raser(TaKaRa,大连)将总RNA反转录为cDNA第一链。用PrimerPremier5.0设计引物，由上海派森诺基因科技有限公司合成（表1）。以小麦Actin为内参基因，以cDNA为模板，在CFX96Real Time PCR Detection System(Bio-Rad,美国）上进行qRT-PCR，分析抗寒相关基因（SOD、基因名称Gene nameSODWCS120LEAP5CSActin1.3数据处理利用WPSOffice进行数据统计和作图，用DPS15.10的Duncans新复极差法进行差异显著性分析。2结果与分析2.1低温胁迫对小麦叶片叶绿素含量的影响从表2 可以看出，随着低温处理时间的延长，漯麦16 3和漯麦6 0 10 的叶绿素含量总体上均呈下降趋势。低温处理12 d后两个品种的叶绿素含量与对照均无显著差异，处理3d后与对照均差异显著。低温处理0 3d后漯麦16 3的叶绿素含量均明显高于漯麦6 0 10。说明低温胁迫严重阻碍了叶绿素的合成，但在两个品种中的表现略有不同。2.2低温胁迫对小麦叶片SOD活性的影响从表2 可以看出，随着低温处理时间的延长，漯麦16 3和漯麦6 0 10 的SOD活性均呈先升后降的变化趋势。处理2 d后两个品种的SOD活性达到最高，均显著高于对照，但与处理1d后的SOD活性无显著差异；处理3d后两品种的SOD活性最低，与对照均无显著差异。对照和低温处理3 d后漯麦16 3 的SOD活性均明显高于漯麦6010；而低温处理12 d后漯麦16 3的SOD活性均明显低于漯麦6 0 10。说明在低温处理初期，麦类作物学报WCS120、LEA 和P5CS）的表达模式。PCR反应体系为2 0 L，包括2 SYBRreal-time PCRpremixture10L，上、下游引物(10 molL-1)各 0.4L,模板cDNA1L,RNase free dd H,O补足至2 0 L。PC R反应程序：95预变性5min,95变性15s，6 0 退火30 s，40 个循环；熔解曲线：9 5变性5s，6 0 退火30 s，9 5变性15S。每个样品3个生物学重复。采用2-AAC法计算目标基因的相对表达量。表1qRT-PCR分析所用的引物Table 1Primers used for qRT-PCR上游引物（5-3)Forward primer(5-3)GGAGAGCGTTTGTTGTTCATTCTCTGGTGGTGCTCGTCGAGGCAAAAGACCAGACACCGAAGGTAGATTCATTTCATCAGCCGTTCTGTCCTTGTATG第43卷下游引物(5-3)Reverse primer(5-3)TCTTCCACCAGCATTTCCGCTGGGTCTTGATGCTGTCGAGGCAAAAGACCAGACAGCAGCACTGTCAACTTGTTCGGTTGTTGTGAGGGAGT漯麦6 0 10 和漯麦16 3通过提高叶片中的SOD活性，清除活性氧自由基，维持细胞膜系统的稳定性；随着低温处理时间的延长，SOD活性下降，植株表现出对低温逆境的适应性，但在两个品种中的表现略有不同。2.3低温胁迫对小麦叶片脯氨酸含量的影响从表2 可以看出，随着低温处理时间的延长，漯麦16 3和漯麦6 0 10 的脯氨酸含量均呈先升后降的变化趋势。低温处理后两个品种的脯氨酸含量均显著高于对照，说明两个品种均可通过提高脯氨酸含量来适应低温逆境。处理1d后两个品种的脯氨酸含量达到最高，且均显著高于对照及其他低温处理；低温处理2 d后与低温处理3d后漯麦16 3的脯氨酸含量差异显著，而漯麦6 0 10 的脯氨酸含量在两个时间点无显著差异。两个品种间的脯氨酸含量在低温处理1d后无明显差异，而在对照中漯麦16 3的脯氨酸含量明显高于漯麦6010,在低温处理2 3d后漯麦16 3的脯氨酸含量明显低于漯麦6 0 10。2.4低温胁迫对小麦叶片抗寒相关基因表达量的影响从表3可以看出，随着低温胁迫处理时间的延长，漯麦16 3和漯麦6 0 10 叶片中SOD基因的表达量均表现为“降一升一降”的变化趋势。低温处理13d后，两个品种叶片中SOD基因的表达第10 期表2 低温胁迫下两个品种叶片的叶绿素含量、SOD活性和脯氨酸含量的变化Table 2 Changes of chlorophyll content,SOD activity andproline content in leaves ofthe two varieties underlow temperature stress指标处理天数IndexTreatment days/d Luomai 163Luomai 6010叶绿素含量0(CK)Chlorophyllcontent/(mg g-1)SOD活性SOD activity/(g-1)脯氨酸含量Proline content/(g g-1)同列相同指标数据后不同小写字母表示同一品种在不同处理间差异显著（P0.05)。Different lowercase letters following data within same col-umn and index indicate significant differences among differenttreatments of the same variety(P0.05).量均显著低于对照。除对照外，低温处理下漯麦163叶片中SOD基因的表达量均低于漯麦6 0 10。随着低温处理时间的延长，漯麦16 3和漯麦6010叶片中WCS120基因的表达量均表现为先降后升的变化趋势。低温处理13d后，两个品种叶片中WCS120基因的表达量均显著低于对照。除低温处理1d后外的其他时间点，漯麦16 3叶片中WCS120基因的表达量均低于漯麦6 0 10。随着低温处理时间的延长，漯麦16 3叶片中LEA基因的表达量表现为“升一降一升”的变化趋势，于处理1d后达到最大值，显著高于其他低温处理和对照；而漯麦6 0 10 表现为“降一升一降”的变化趋势，对照为最大值，显著高于其他低温处理。对照和低温处理2 d后漯麦16 3叶片中LEA基因的表达量均低于漯麦6 0 10，低温处理1d和3 d后则相反。随着低温处理时间的延长，漯麦16 3和漯麦6010叶片中P5CS基因的表达量均表现为先降后升的变化趋势。对于漯麦16 3，低温处理12 d后P5CS基因的表达量显著低于对照，低温处理3d后则显著高于对照；对于漯麦6 0 10，低温处理1d后P5CS基因的表达量显著低于对照，低温处理曹燕燕等：低温胁迫下漯麦16 3的生理生化变化及抗寒基因表达分析中P5CS基因的表达量一致。漯麦16 3漯麦6 0 105.81a5.61a15.52ab25.73a35.13b0(CK)829.10b1964.74a21026.99a1041.04a3778.24b0(CK)100.11d1165.25a2134.66b3115.45c:130123 d 后则显著高于对照,并于低温处理3 d后达到最大值。对照和低温处理3d后漯麦16 3叶片中P5CS基因的表达量均高于漯麦6 0 10，低温处理2 d后则相反，低温处理1d后两个品种叶片表3低温胁迫下小麦叶片抗逆相关基因的相对表达量Table 2 Relative expression levels of cold tolerance related5.25abgenes in wheat leaves under low temperature treatments5.25ab4.47b734.98b1 001.78a733.03b85.61c166.69a140.52b135.89b基因GeneTreatment days/d Luomai 163SOD0(CK)123WCS1200(CK)123LEA0(CK)123P5CS0(CK)123同列相同基因数据后不同小写字母表示同一品种在不同处理间差异显著（P0.05）。Different lowercase letters following data within same col-umn and gene indicate significant differences among differenttreatments of the same variety(P0.05).3讨论与结论叶绿素在光合作用中具有重要作用。王瑞霞等 9研究发现，在拔节期对小麦进行低温处理，小麦叶片的叶绿素含量显著下降，但下降的幅度因品种而异。细胞膜的流动性和稳定性是细胞乃至整个植物赖以生存的基础，渗透调节物质在低温胁迫下可有效维持细胞结构和功能，对光合作用等生理过程具有积极的作用。张磊等 13 研究发现，拔节期低温胁迫下，抗寒性较好的小麦会产生更多的脯氨酸；余海波 门研究发现，一定程度的低温肋迫能够诱导小麦叶片中游离脯氨酸含量的增加，使小麦在短时间内表现出对低温环境的适应性，但当温度继续降低时，脯氨酸含量会下降。低温胁迫下，植物体内的SOD会清除过多的活性氧处理天数漯麦16 31.01a0.16b0.20b0.15b1.00a0.89b0.25d0.59c1.01b3.27a0.26d0.62c1.00b0.15c0.14c3.23a漯麦6 0 10Luomai 60100.71a0.28b0.37b0.16b3.68a0.43c0.33c2.06b3.85a0.16d0.87b0.58c0.93c0.15d1.59b2.00a1302自由基,维持细胞膜系统的稳定性，提高植株的抗寒性。张军等 14 研究发现，拔节期持续低温胁迫下，小麦叶片中的SOD活性均有不同程度的增高；薛亚光等 15 则研究发现，稻秸全量还田方式下小麦叶片中的SOD活性随着低温胁迫的加重呈下降趋势，植株表现出对低温逆境的适应性。本研究发现，拔节期低温胁迫阻碍了漯麦163和漯麦6 0 10 的叶绿素合成，进一步降低了小麦叶片的光合能力，低温胁迫时间越长，对小麦叶片的光合作用影响越显著；低温胁迫下，两个品种的SOD活性和脯氨酸含量均显著上升，有利于减轻小麦膜脂过氧化伤害,维持细胞结构和功能,增强两个品种的抗寒性，随着低温胁迫时间的延长，两个品种的SOD活性和脯氨酸含量呈下降趋势，表现出对低温逆境的适应性。结合两个品种在田间的抗寒性表现，与生理指标检测结果相符，说明低温胁迫下漯麦16 3和漯麦6 0 10 均具有较强的自我保护机制，抗寒性较好。植物抗寒性是由多基因控制的数量性状，抗寒相关基因只有在特定条件下才能表达。根据抗寒基因产物的功能可分为功能基因和调控基因两大类 16 。功能基因直接参与抵抗胁迫反应，主要有渗透调节分子基因P5CS、胚胎发育晚期丰富蛋白基因LEA、抗氧化酶基因SOD以及抗性蛋白基因WCS120等；调控基因主要是通过调控抗寒基因的表达来提高抗寒性，主要包含各种蛋白激酶基因、转录因子基因等。WCS120为冷诱导基因，只受低温胁迫的特异诱导，过表达WCS120可减轻冻害带来的机械损伤，维持代谢物质的运转，从而提高植物的抗寒性 17 。SOD作为功能基因，在消除活性氧的过程中具有重要作用,SOD活性的增加有利于减轻小麦在低温胁迫下造成的膜脂过氧化伤害。P5CS是脯氨酸合成途径中一个关键基因，催化脯氨酸生物合成的最初前两步，其表达与脯氨酸含量密切相关 18 1；LEA受逆境胁迫诱导，是一种逆境胁迫响应基因，在植物抵抗逆境中发挥着重要作用 19。本研究发现，低温胁迫下，与对照相比，漯麦163和漯麦6 0 10 两个品种叶片中SOD基因的表达量均显著下调，与 SOD活性表现不一致,原因可能与SOD同工酶有关;在低温处理2 d和3d后，漯麦16 3和漯麦6 0 10 两个品种叶片中SOD基因的表达量与SOD活性测定结果一致。在低温处理3d后，两个品种叶片中P5CS基因的表达麦类作物学报量显著高于对照，与其脯氨酸含量表现相一致。持续低温处理下，两个品种叶片中WCS120基因的表达量表现出先降后升的变化趋势，且显著高于对照。漯麦16 3叶片中LEA基因的表达量在低温处理1d后显著上调表达，而低温处理后漯麦6 0 10 叶片中LEA基因的表达量呈显著下调表达，推测不同品种对低温的响应机制不同。综上所述，两个品种的抗寒性差异主要集中在相关基因的表达，漯麦16 3主要通过调控LEA和P5CS基因的表达来提高对低温胁迫的抵抗能力；而漯麦6 0 10 则是通过调控P5CS和WCS120基因的表达抵御低温逆境。小麦的抗寒性机理复杂，不同基因型小麦品种因发育特点不同，在遭受倒春寒时其受害程度也不同，选育耐寒品种是提高小麦抗倒春寒能力的根本途径。本研究从生理生化和抗寒基因表达两方面对漯麦16 3和漯麦6 0 10 的抗寒性进行了分析，并结合大田观察，发现漯麦16 3和漯麦6010均具有较强的耐倒春寒能力，可作为抗寒性亲本种质资源，加快耐倒春寒小麦品种的选育。参考文献：1杨艳红.黄准麦区主推小麦品种遗传多样性研究及粗山羊草在小麦改良中的应用 D.泰安：山东农业大学，2 0 18：1.YANG Y H.Analysis of genetic diversity among main wheatcultivars in Huanghuai region and application of Aegilopstauschii in wheat improvement D.Taian:Shangdong Agri-cultural University,2018:1.2刘方方，万秀英，曹文昕，等。小麦倒春寒抗性鉴定研究进展J.植物遗传资源学报，2 0 2 1,2 2（5）：1193.LIU F F,WAN X Y,CAO W X,et al.Advances on identifica-tion of wheat cold tolerance in spring JJ.Journal of PlantGenetic Resources,2021,22(5):1193.3王永华，李金才，魏凤珍，等.小麦冻害类型、诊断特征及其预防对策与补救措施 J.中国农学通报，2 0 0 6，2 2（4)：345.WANG Y H,LI J C,WEI F Z,et al.Types of freeze injuryand diagnostic characteristics of winter wheat and preventionmeasure and salvage measure JJ.Chinese Agricultural Sci-enceBulletin,2006,22(4):345.4 张淑娟，宋国琦，高洁，等.小麦春季抗寒性研究进展 J.山东农业科学，2 0 17，49（6）：157.ZHANG S J,SONG G Q,GAO J,et al.Research advance oncold resistance of wheat(Triticum aestiuum L.)in springJ.Shangdong Agricultural Sciences,2017,49(6):157.5陈翔，林涛，林非非，等.黄淮麦区小麦倒春寒危害机理及防控措施研究进展.麦类作物学报，2 0 2 0，40（2）：2 43.CHEN X,LIN T,LIN F F,et al.Research progress on dam-age mechanism and prevention and control measures of latespring coldness of wheat in Huanghuai region JJ.Journal of第43卷第10 期Triticeae Crops,2020,40(2):243.6陈思琪，孙敬爽，麻文俊，等.植物低温胁迫调控机制研究进展J.中国农学通报，2 0 2 2,38（17）：51.CHEN S Q,SUN J S,MA W J,et al.Research progress onregulation mechanism of low temperature stress on plantsJJ.Chinese Agricultural Science Bulletin,2022,38(17):51.7张志伟，王法宏，李升东，等.不同类型小麦品种孕穗期低温生理反应及其抗寒性分析J.麦类作物学报，2 0 12，32（5）：90 0.ZHANG Z W,WANG F H,LI D S,et al.Analysis on thephysiological reaction to low temperation at booting stage andtheir cold resistance of different types of wheat varieties J.Journal ofTriticeae Crops,2012,32(5):900.8陈思思，李春燕，杨景，等.拔节期低温冻害对扬麦16 光合特性及产量形成的影响 J.扬州大学学报（农业与生命科学版）,2 0 14,35(3)：59.CHEN S S,LI C Y,YANG J,et al.Effect of low temperatureat jointing stage on photosynthetic characteristics and yield inwheat cultivar Yangmai 16 JJ.Journal of Yangzhou Univer-sity(Agricultural and Life Science Edition),2014,35(3):59.9王瑞霞，闫长生，张秀英，等.春季低温对小麦产量和光合特性的影响.作物学报，2 0 18，44（2）：2 8 8.WANG R X,YAN C S,ZHANG X Y,et al.Effect of lowtemperature in spring on yield and photosynthetic characteris-tics of wheat J.Acta Agronomica Sinica,2018,44(2):288.10姜丽娜，张黛静，宋飞，等.不同品种小麦叶片对拔节期低温的生理响应及抗寒性评价 J.生态学报，2 0 14，34（15）：4251.JIANG L N,ZHANG D J,SONG F,et al.Evaluation of coldresistance of different wheat varieties based on physiologicalresponses of leaves to low temperature at the jointing stageJJ.ActaEcologicaSinica,2014,34(15):4251.11张乐乐，陈翔，柯媛媛，等.冬小麦抗倒春寒性能鉴定方法和指标的比较 J.中国农业气象，2 0 2 1，42（2）：146.ZHANG L L,CHEN X,KE Y Y,et al.An inclusive compar-ison of identification methods and indices of winter wheattolerance against late spring coldness LJJ.Chinese Journalof Agrometeorology,2021,42(2):146.12JMONROY A F,DRYANOVA A,MALETTE B,et al.Reg-ulatory gene candidates and gene expression analysis of coldacclumation in winter and spring wheat JJ.Plant MolecularBiology,2007,64(4):409.曹燕燕等：低温胁迫下漯麦16 3的生理生化变化及抗寒基因表达分析ricultural Sciences,2017,46(11):13.14张军，鲁敏，孙树贵，等.拔节期低温胁迫对小麦生理生化特性和产量的影响 J.西北农业学报，2 0 14，2 3（2）：7 3.ZHANG J,LU M,SUN S G,et al.Changs of physiologicaland biochemical parameters and grain yield at jointing stageof wheat under low temperature stress J.Acta Agricultu-rae Boreali-Occidentalis Sinica,2014,23(2):73.15薛亚光，石吕，魏亚凤，等.秸秆全量还田方式下小麦苗期低温的生理响应及其抗寒性分析 J.南方农业学报，2 0 18，49(9):1722.XUE Y G,SHI L,WEI Y F,et al.Physiological responses ofwheat under different all rice straw returning patterns to lowtemperature at seeding stage and cold resistance analysisJ.Journal of Southern Agriculture,2018,49(9):1722.16邓江明，简令成.植物抗冻机理研究新进展：抗冻基因表达及其调控 J.植物学通报，2 0 0 1，18（5）：52 1.DENG J M,JIAN L C.Advances of studies on plant freezing-tolerance mechanism:Freezing tolerance gene expression andits function J.Chinese Bulletin of Botany,2001,18(5):521.17JHOUDE M,DANIEL C,LACHAPELLA M.Immunolocal-ization of freezing tolerance associated proteins in the cyto-plasm and nuclepolasm of wheat crown tissue JJ.The PlantJournal,1995,8(4):583.18姚永伟，韩巧霞，张奥深，等.不同冬小麦品种拔节期抗冻性差异及相关基因表达分析 J.麦类作物学报，2 0 2 0，40（12）：1455.YAO Y W,HAN Q X,ZHANG A S,et al.Difference analy-sis of frost resistance of different winter wheat varieties atjointing stage J.Journal of Triticeae Crops,2020,40(12):1455.19王莲哲，王渊，柳超奇，等.小麦TalEA3-1基因的克隆、表达与渗透胁迫功能分析 J.分子植物育种，2 0 19，17（14）：4524.WANG L Z,WANG Y,LIU C Q,et al.Cloning,expressionand osmotic-stress function analysis of TaLEA3-1 gene inwheat JJ.Molecular Plant Breeding,2019,17(14):4524.:130313张磊，李国领，张建周，等.拔节期低温胁迫对小麦生理特性和产量的影响 J.河南农业科学，2 0 17，46（11）：13.ZHANG L,LI G L,ZHANG J Z,et al.Effects of low tem-perature stress on physiological characters ans yield of twowheat varieties at jointing stage J.Journal of Henan Ag-