选修一微生物的实验室培养专家讲座.pptx

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,专题2 微生物培养与应用,课题1 微生物试验室培养,选修一微生物的实验室培养专家讲座,第1页,培养基能够分为哪几类？,培养基普通都含有哪些营养物质，另外,还要满足哪些要求？,取得纯净培养物关键是什么？,什么是消毒、灭菌，惯用方法有哪些？,制备牛肉膏蛋白胨固体培养基方法步骤？,学习目标,怎样倒平板？,选修一微生物的实验室培养专家讲座,第2页,微生物类群,原生生物：,原核生物,:,真菌,:,病毒,:,如酵母菌,如草履虫、单细胞藻类等,无细胞结构,真核细胞,细菌、蓝藻,原核细胞,？,选修一微生物的实验室培养专家讲座,第3页,选修一微生物的实验室培养专家讲座,第4页,一、培养基,1.,概念：人们按照微生物对,_,不一样需求，配置出供其,_,营养基质。,营养物质,生长繁殖,2.,培养基类型和用途,按物理性质,固体培养基,:,加琼脂；用于分离、判定、计数,液体培养基：不加凝固剂；用于工业生产。,半固体培养基：加少许琼脂；可用于保藏菌种。,选修一微生物的实验室培养专家讲座,第5页,按化学成份,合成培养基：成份明确；分类判定。,天然培养基：成份不明确；用于工业生产。,按目标用途分,判别培养基：培养基中加入某种试剂或化学药品，区分出不一样类型微生物。,选择培养基：依据,某一个或一类微生物特殊营养要求或对一些物理、化学抗性,设计培养基。如用青霉素选出酵母菌等。,选修一微生物的实验室培养专家讲座,第6页,选择培养基,选择培养基,应用,加入青霉素,分离酵母菌、霉菌等真菌,加入高浓度食盐,分离金黄色葡萄球菌,不加氮源,分离固氮菌,不加含碳有机物无碳培养基,分离自养型微生物,加入青霉素等抗生素,分离导入了目标基因受体细胞,在微生物学中，将允许特定种类,微生物生长，同时抑制或阻止其它种类微生物生长培养基。,选修一微生物的实验室培养专家讲座,第7页,判别培养基,依据微生物代谢特点在培养基加入某种指示剂或化学药品配制而成，用以,判别,不一样微生物,只起判别作用，并不能抑制其它微生物,选修一微生物的实验室培养专家讲座,第8页,固体培养基,液体培养基,选修一微生物的实验室培养专家讲座,第9页,培养基普通都含有哪些营养物质，另外,还要满足哪些要求？,选修一微生物的实验室培养专家讲座,第10页,不论哪种培养基，普通都含有,水,、,碳源,、和,氮源,、,无机盐,等营养物质,另外还需要满足微生物生长对,pH,、,特殊营养物质,比如:生长因子(,即细菌生长必需，而本身不能合成化合物,如维生素、一些氨基酸、嘌呤、嘧啶,),以及,氧气,、,二氧化碳,、,渗透压,等要求。,选修一微生物的实验室培养专家讲座,第11页,一,.,培养基：,微生物生存环境和营养物质,1.,基本成份：,碳源、氮源、水、无机盐,碳源,无机碳源：,有机碳源：,CO,2,、,CO,3,2,-,、,HCO,3,-,牛肉膏、蛋白胨等,自养微生物,异养微生物,氮源,无机氮源：,有机氮源：,NH,4,、,NO,3,-,牛肉膏、蛋白胨、酵母膏、尿素等,注：对于异养微生物，含,C,、,N,化合物既为碳源，也是氮源。,选修一微生物的实验室培养专家讲座,第12页,牛肉膏蛋白胨培养基 是一个应用最广泛和最普通细菌基础培养基,。,1000ml,牛肉膏蛋白胨培养基配方,H,2,O,定容至,1000ml,Nacl 5g,蛋白胨,10g,牛肉膏,5g,琼脂,20.0g,选修一微生物的实验室培养专家讲座,第13页,培养基配制标准,目标明确：,营养全方面、浓度适宜、百分比恰当,适宜,pH,值：,有机碳源,异养型：,依据微生物,种类、培养目标,选择原料,自养型：,不加碳源,加入缓冲剂,（,CO,2,碳源）,生产,科研,选修一微生物的实验室培养专家讲座,第14页,2.,无菌范围：,试验操作空间消毒,操作者手、衣着消毒,试验用具灭菌,试验操作过程,二,.,无菌技术：,预防外来杂菌污染,1.,消毒与灭菌：,酒精灯旁操作,超净工作台,选修一微生物的实验室培养专家讲座,第15页,二、无菌操作技术,1.,取得纯净培养物关键？,预防外来杂菌入侵,2、无菌技术除了用来预防试验室培养物被其它外来微生物污染外，还有什么目标？,防止操作者本身被微生物感染,选修一微生物的实验室培养专家讲座,第16页,消毒与灭菌,消毒：,使用较,温和,物理或化学方法仅杀死物,体,表面或内部一部分,对人体有害微生物（不,包含芽孢和孢子）。,灭菌：,使用,强烈,理化原因杀死物体内,全部,微生物，包含芽孢和孢子。,灭菌与消毒技术是微生物相关工作中最普通也是最主要技术。,选修一微生物的实验室培养专家讲座,第17页,芽孢,有些细菌在一定条件下，,细胞里面,形成一个椭圆形,休眠体,，叫做,芽孢,。芽孢壁很厚，对恶劣环境有很强,抵抗力,。,每一细胞仅形成一个芽孢，所以其没有繁殖功效。,细菌、原生动物、真菌和植物等产生一个有繁殖或休眠作用,生殖细胞,。能直接发育成新个体。,孢子,特殊休眠结构,选修一微生物的实验室培养专家讲座,第18页,消毒方法：,1、,煮沸消毒法,:,100煮沸5-6min,2、,巴氏消毒法,：,70-75 下煮30min或 80 下煮15min,3、,化学药剂消毒法,:,用75%酒精进行皮肤消毒;氯气消毒水源,4、,紫外线,适用对象：,操作空间、液体、双手等,选修一微生物的实验室培养专家讲座,第19页,灭菌方法：,1、灼烧灭菌,2、干热灭菌：160-170,下加热1-2h。,3、高压蒸汽灭菌：100kPa、,121 下维持15-30min.,选修一微生物的实验室培养专家讲座,第20页,请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。假如需要，请选择适当方法。,（,1,）培养细菌用培养基与培养皿,（,2,）玻棒、试管、烧瓶和吸管,（,3,）试验操作者双手,思考,消毒,灭菌,灭菌,选修一微生物的实验室培养专家讲座,第21页,练习：思索并讨论下面仪器分别用什么样消毒和灭菌方法？,培养基,培养皿,空 气,接种环,双 手,牛 奶,巴氏消毒,化学消毒,紫外线消毒,高压蒸气灭菌,灼烧灭菌,干热灭菌,选修一微生物的实验室培养专家讲座,第22页,单个,或少数菌体,2.,特征：,大小、形状、光泽度、,颜色、透明度等。,3.,功效：,1.,定义：,三、菌落,判定菌种,主要依据,固体,培养基上,大量繁殖,子细胞群体,选修一微生物的实验室培养专家讲座,第23页,1000ml,牛肉膏蛋白胨培养基配方,H,2,O,定容至,1000ml,Nacl 5g,蛋白胨,10g,牛肉膏,5g,琼脂,20.0g,四,.,大肠杆菌纯化培养,制备牛肉膏蛋白胨固体培养基,1.,计算：,培养基用量,依配方计算各成份用量,2.,称量：,3.,溶化：,牛肉膏黏稠，用称量纸称取,牛肉膏、蛋白胨易吸潮，要快、加盖,牛肉膏、称量纸、少许水加热溶解,取纸,蛋白胨、,NaCl,琼脂,补水定容,4.,调,pH,、分装、封口：,5.,灭菌：,6.,倒平板：,培养基、培养皿,选修一微生物的实验室培养专家讲座,第24页,倒平板,约,50,预防皿盖上水珠落入培养基，造成污染,灼烧灭菌，,预防瓶口微生物污染培养基,选修一微生物的实验室培养专家讲座,第25页,1.,培养基灭菌后，需要冷却到,50,左右时，才能用来倒平板。你用什么方法来预计培养基温度？,问题讨论,答：,用手触摸，刚不烫手。,2.,为何需要使锥形瓶瓶口经过火焰？,答：灼烧灭菌，预防瓶口微生物污染培养基。,选修一微生物的实验室培养专家讲座,第26页,3.,平板冷凝后，为何要将平板倒置？,4.,在倒平板过程中，假如不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为何？,答：皿盖凝结水珠，预防水珠落入培养基，造成污染；平板倒置，预防培养基表面水分挥发。,答：最好不用，空气中微生物可能在皿盖与皿底之间培养基上滋生。,选修一微生物的实验室培养专家讲座,第27页,二,.,大肠杆菌纯化培养：,制备牛肉膏蛋白胨固体培养基,纯化大肠杆菌：,平板划线法：,菌种,划,3,个平板,1,个不划线,1.,接种：,接种环,预防划破培养基,（重复试验）,（空白对照）,选修一微生物的实验室培养专家讲座,第28页,问题2：每次划线前灼烧接种环目标：,问题3：划线结束后灼烧接种环目标：,防止接种环上可能存在微生物污染培养基,杀死上次划线结束后残留菌种,及时杀死接种环上残留菌种，防止污染环境和操作者。,问题1：第一步灼烧接种环目标：,问题讨论,选修一微生物的实验室培养专家讲座,第29页,2.,在灼烧接种环之后，为何要等其冷却后再进行划线？,答：以免接种环温度太高，杀死菌种。,3.,在作第二次以及其后划线操作时，为何总是从上一次划线末端开始划线？,答：线条末端细菌数目比线条起始处要少，每次从上一次划线末端开始，能使细菌数目伴随划线次数增加而逐步降低，最终能得到由单个细菌繁殖而来菌落。,选修一微生物的实验室培养专家讲座,第30页,4.为何不能划破培养基？,一旦划破，会造成划线不均匀，难以到达分离单菌落目标；,二是存留在划破处单个细胞无法形成规矩菌落，菌落会沿着划破处生长，会形成一个条状菌落。,选修一微生物的实验室培养专家讲座,第31页,6,支试管，分别加入,9ml,无菌水,1ml,10,1,1ml,10,2,1ml,10,3,1ml,10,4,1ml,10,5,1ml,10,6,稀释涂布平板法：,a.,梯度稀释菌液：,菌液,选修一微生物的实验室培养专家讲座,第32页,稀释涂布平板法：,a.,梯度稀释菌液：,b.,涂布平板：,不超出,0.1ml,各梯度分别涂布,3,个平板,1,个不涂布作空白对照,滴,灼,试,涂,稀释,10,3,倍,稀释,10,4,倍,稀释,10,5,倍,选修一微生物的实验室培养专家讲座,第33页,平板划线法：,二,.,大肠杆菌纯化培养：,制备牛肉膏蛋白胨固体培养基,纯化大肠杆菌：,1.,接种：,稀释涂布平板法：,2.,培养：,将,接种后,培养基和一个,未接种,培养基,放入,37,恒温箱中培养,12h,24h,后，,观察并统计,选修一微生物的实验室培养专家讲座,第34页,微生物培养与观察,选修一微生物的实验室培养专家讲座,第35页,大肠杆菌在伊红美蓝琼脂(EMB)上经典特征,在普通琼脂培养基上,：,圆形,，,边缘整齐，表面光滑，半透明,。,经典大肠杆菌在伊红美蓝琼脂平板上特征为:深紫黑色、光滑、湿润、带有金属光泽圆形菌落。,选修一微生物的实验室培养专家讲座,第36页,1.,未接种培养基表面是否有菌落生长？假如有菌落生长，说明了什么？,2.,在接种大肠杆菌培养基上，能否观察到独立菌落？它们大小、形状、颜色相同吗？,五、结果分析与评价,若有，说明培养基灭菌不彻底,相同菌落，接种符合要求,选修一微生物的实验室培养专家讲座,第37页,3.,培养,12h,和,24h,后，观察到试验结果相同吗？假如不一样，请分析产生差异原因？,4.,假如在培养基上观察到不一样形态菌落，请分析其可能原因。,大小会有显著不一样,无菌操作未到达要求：培养基灭菌不彻底；可能是接种时或培养时污染,选修一微生物的实验室培养专家讲座,第38页,六,.,菌种保藏,1.,暂时保藏：,试管固体斜面培养基上,4,2.,长久保留：,菌种易被污染、变异,甘油管藏,1ml,甘油,1ml,菌液,20,斜面保藏,甘油冷冻管藏法,选修一微生物的实验室培养专家讲座,第39页,知识小结,:,选修一微生物的实验室培养专家讲座,第40页,【巩固】,下,列相关平板划线操作叙述不正确是(,),A第一步灼烧接种环是为了防止接种环上可能存在微生物污染培养物,B每次划线前，灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留菌种,C在第二区域内划线时，接种环上菌种直接起源于菌液,D划线结束后，灼烧接种环，能及时杀死接种环上残留菌种，防止细菌污染环境和感染操作者,C,选修一微生物的实验室培养专家讲座,第41页,