动物细胞的融合与单克隆抗体.ppt

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第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,2002,年,月日，,两场筹备了,10,年的,“,太空婚礼,”,首次在神舟四号飞船上举行，植物细胞,“,新人,”,黄花烟草,和,革新一号烟草,叶肉细胞,原生质体,，动物细胞,“,新人,”,是小鼠,B,淋巴细胞,和,骨髓瘤细胞,，两批新人同时在,“,产房,”,电融合仪内孕育新生命。一段时间后，我国首批,”,太空娃娃,”,终于顺利诞生。对照实验结果表明，细胞融合率大大提高。,STS,“太空婚礼”,1,神舟放飞强国梦,2,“太空婚礼”科研项目一：,“太空婚礼”科研项目二：,挑战自我,植物体细胞杂交技术,动物细胞融合技术,3,温故而知新：,哪种植物细胞工程技术可以突破不同生物之间的生殖隔离，克服远缘杂交不亲和的障碍，培育出新的作物类型？,植物体细胞杂交技术,你能回忆出植物体细胞杂交的过程吗？,4,植物细胞,A,植物细胞,B,去掉细胞壁,去掉细胞壁,原生质体,A,原生质体,B,原生质体融合,杂合的原生质体,再生出细胞壁,杂种细胞,脱分化,再分化,愈伤组织,杂种植株,温故知新,:,植物体细胞杂交过程,5,植物细胞,A,植物细胞,B,去掉细胞壁,去掉细胞壁,原生质体,A,原生质体,B,原生质体融合,杂合的原生质体,再生出细胞壁,杂种细胞,细胞分裂,分化发育,愈伤组织,杂种植株,思考：,1,、动物细胞融合的概念是什么？,2,、动植物细胞在结构上有何区别？这对它们杂交或融合过程有什么影响？,3,、植物体细胞杂交诱导原生质体融合常用的方法有哪些？那动物细胞融合呢？,4,、动物细胞融合与植物原生质体融合的基本原理是否相同？是什么原理？,5,、动物细胞融合有什么意义？主要应用在哪些方面？,一、动物细胞融合,6,动物细胞,A,动物细胞,B,诱导、融合,杂合的细胞,有丝分裂,2,个完整的杂交细胞,AB,讨论：,6,、植物体细胞杂交可得到杂种植株，动物细胞融合后能象电影上一样形成杂种动物个体吗,?,为什么？,植物细胞,A,植物细胞,B,去掉细胞壁,去掉细胞壁,原生质体,A,原生质体,B,原生质体融合,杂合的原生质体,再生出细胞壁,杂种细胞,细胞分裂,分化发育,愈伤组织,杂种植株,7,1970,年，有两位科学家,做了一个著名的实验：,人,鼠细胞融合的实验，,以证明细胞膜上的蛋白,质分子是运动的。,人,鼠细胞是怎样实现融合的？动物细胞融合有什么实践意义呢？,8,一、,动物细胞融合,1.,细胞融合：,是指两个或两个以上的细胞融合为一个细胞的过程。,自然发生：,受精卵,人工诱导：,利用诱导剂诱导动物细胞融合,诱导因素：聚乙二醇、,灭活的病毒,或电激等。,9,鼠细胞,人细胞,人工诱导,动物,细胞融合,杂交细胞,10,仙台病毒,紫外线,灭活,丧失感染活性（不感染细胞）,保留融合活性（诱导细胞融合）,什么是,病毒的灭活？,灭活是指用物理或化学手段使病毒失去感染能力，但是并不破坏病毒的抗原结构。,灭活病毒诱导细胞融合的原理,病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能够与细胞膜上的糖蛋白发生作用，使细胞互相凝聚，细胞膜上的蛋白质分子和脂质分子重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合。,11,因为灭活的病毒能使细胞膜上的蛋白质分子和脂质分子重新排布，细胞膜打开，细胞发生融合,12,灭活的病毒颗粒黏附于细胞表面,细胞膜被病毒颗粒穿通,细胞膜连接,细胞融合，形成杂交细胞,（细胞膜具有一定的流动性）,13,正在融合的,淋巴细胞与骨髓瘤细胞,正在融合的鸡血细胞,动物细胞融合的原理：,细胞膜的流动性,14,把两个不同的动物细胞放在一起，用灭活的病毒处理细胞，它们先发生质融合，再出现核融合，进而形成杂交细胞。,融合后的杂交细胞经过有丝分裂后仍能形成两个完整的杂交细胞,15,细胞膜的流动性,灭活病毒、,PEG,、电激等,融合后的细胞进行有丝分裂，形成完整的杂交细胞,诱导的手段？,融合后细胞的类型？,AB,杂种细胞遗传物质,有什么特点？,三种,AA,、,AB,、,BB,（,A,、,B,）,含两种生物的遗传物质,动物细胞融合过程,原理？,16,物理法的融合效率较高,且对细胞（原生质体）的伤害小,易操作、控制和观察。,太空中处于失重状态，不同种细胞,（原生质体）,更容易亲近；,为什么在太空中细胞（原生质体）融合率会大大上升？为什么选用物理法诱导？,17,2,、动物细胞融合的应用,1.突破有性杂交方法的局限,使远缘杂交成为可能。,2.成为研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和生物新品种培育等的重要手段。,鼠,鸡、鼠,兔、鼠,猴、人,鼠、人,兔、,人,鸡、人,蛙、酵母菌,鸡、人,胡萝卜等,3,、重要用途：,制备单克隆抗体,。,18,获得杂种植株,物理、化学方法,（同左）,灭活的病毒,物理（离心、振,荡、电激）,化学（聚乙二醇）,直接诱,导细胞融合,去壁,原生质体,融合,诱,导新壁,杂种植株,细胞膜的流动性,细胞膜的流动性,结果,诱导方法,步骤,融合的原理,动物细胞融合,植物体细胞杂交,比较项目,植物、动物细胞融合的比较,获得杂交细胞,小结,1,19,【,例,1】,能使动物细胞融合的特有的诱导因子是（）,A.,离心,B.,灭活的病毒,C.,电刺激,D.,振动,【,例,2】,融合后的杂交细胞的遗传物质有何特点（）,具有原来两个或多个细胞的遗传信息,B.,能无限增殖,C.,可形成新个体,D.,培养过程会贴壁,【,例,3】,动物细胞融合的作用中最重要的是（）,A.,克服远源杂交不亲和,B.,制备单克隆抗体,C.,培育新物种,D.,生产杂种细胞,B,B,初试牛刀,A,20,使用相应的抗体检测乙肝病毒,抗原,二、单克隆抗体的制备,医院一般怎样检测人体内是否存在乙肝病毒？,乙肝病毒模式图,凡能够引起机体产生特异性,免疫应答的物质叫做抗原,。,1,、,什么是抗原？,例如花粉、病菌、病毒等。有时自身的组织或细胞也会成为抗原，如癌细胞等。,21,抗原决定簇：,抗原表面具有的某些,特定的化学基团,，,能决定抗原特异性,，是免疫细胞识别抗原的重要依据。,各种抗原的决定簇数目不同，同一抗原的决定簇可能有多种。,22,2,、,什么是抗体？由何种细胞产生？主要分布在哪里,?,起何作用？,当机体受到抗原刺激剂后由效应,B,细胞（浆细胞）产生的，并且能与该抗原发生,特异性结合,的具有免疫功能的球蛋白,抗体。,抗体分布于血清中，也分布于组织液及外分泌液中。,23,抗体与相应抗原特异性结合,24,抗体由何种细胞产生？主要分布在哪里,?,25,3,、抗体的传统生产方法,：,从,血清,中分离抗体,多种浆细胞,动物体内,多种抗体,抗原,26,27,血清抗体（也称多克隆抗体）,由,血清,中提取的抗体是由不同淋巴细胞产生的多种抗体的混合物，可达百万种以上，称为,多克隆抗体。,特点：,产量低、纯度低、特异性差、反应不够灵敏。,抗原不纯,抗体不纯,抗原 动物体内,刺激,效应,B,抗体,28,每一个,B,淋巴细胞只分泌一种,化学性质单一，特异性强的抗体,。,如果利用单个,B,淋巴细胞进行无性繁殖（克隆），形成细胞群，这样的细胞群就有可能产生出,化学性质单一,、,特异性强,的抗体,单克隆抗体,。,问题：,怎样获得化学性质单一、特异性强的抗体呢？,29,在体外培养的条件下，一个,B,淋巴细胞能无限增殖形成细胞群吗？,什么样的细胞能够在体外无限增殖呢？,肿瘤细胞！,30,抗体,抗原,应答,抗体的不纯性,动物细胞受到抗原刺激,引起免疫反应产生的球蛋白,.,不是自己的而又能引起免疫应答反应的物质就是抗原,.,一种抗原有多种不同的决定簇,刺激的是多种,B,细胞,作用于不同的,B,细胞后,会产生多种抗体,这是多克隆的,故不纯,!,4.,制备单克隆抗体的思路,抗原,B,细胞,浆细胞,抗体,刺激,31,怎么才能得到纯的抗体,?,光纯还不行,还要大量,.,怎么办,?,但，有,问题,:,找，什么细胞能无限繁殖呢,?,思路就出来了,:,要想获单一的纯抗体,就必须从一个,B,细胞出发,.,让,B,细胞大量繁殖,(,克隆,),就可以产生大量抗体了,.,B,细胞是不能无限繁殖的,.,怎么办,?,癌,!,只有癌细胞,.,但它不能产生抗体,.,癌细胞能无限繁殖,但不能产生抗体,.B,细胞能产生抗体,但不能大量繁殖,.,融合呀,!,只要将两个细胞融合即可互补,.,32,5.,技术思路的重点,杂交瘤细胞,HAT,筛选,McAb,大量培养,PEG,诱导细胞融合,免 疫,B,脾,矿物油,骨髓瘤,瘤,问题,:,在培养体系中,有,5,种细胞,.B,细胞、瘤细胞,和杂交细胞。,我们还是拿不到,McAb,怎么办,?,筛选！筛出杂交瘤细胞。怎么筛,?,又是一个思路问题。,关键一步,33,34,如何诱导融合？,加入聚乙二醇（,PEG,）,如何得到,B,淋巴细胞？,6.,制备,单克隆抗体的,过程,35,细胞两两融合后，有哪些类型？,B-B,B-,瘤,(,杂交瘤细胞,),瘤,-,瘤,如何筛选出杂交瘤细胞？,单克隆抗体制备过程中，总共有两次筛选，第一次筛选出杂交瘤细胞，第二次筛选出能产生特异性抗体的杂交瘤细胞，两次筛选的原理和方法是不相同的。,首先用选择培养基筛选出杂交瘤细胞,36,细胞合成,DNA,有,D,和,S,两条途径，其中,D,途径能被氨基嘌呤阻断。,人淋巴细胞中有这两种,DNA,的合成途径，但一般不分裂增殖。,鼠骨髓瘤细胞中只有,D,途径，没有,S,途径，可是能不断分裂增殖。,你想到筛选杂交瘤细胞的方案了么？,小资料：,37,在培养液中加入氨基蝶呤，收集增殖细胞！,加入氨基嘌呤后，使,D,合成途径阻断，仅有,D,合成途径的骨髓瘤细胞及其彼此融合的细胞就不能增殖，,但人淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合后的杂种细胞因为可以利用淋巴细胞中的,S,途径合成,DNA,而增殖。,38,例：已知细胞增殖时合成,DNA,有,D,和,S,两条途径，其中,D,途径能被氨基喋呤阻断。,人淋巴细胞中有这两种,DNA,的合成途径，但一般不分裂增殖。,鼠骨髓瘤细胞中尽管没有,S,途径，但能不断分裂增殖，,将两种细胞在培养液中混合，加聚乙二醇促融，在培养液中有 种细胞。,加入氨基喋呤后，使,D,合成途径阻断，仅有,D,合成途径的 及其彼此融合的细胞不能增殖。,人淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合后的杂交细胞中可利用淋巴细胞中的,S,途径合成,DNA,而增殖。从培养液中分离出杂交细胞。,如何筛选出培养液中的杂交瘤细胞？,5,骨髓瘤细胞,39,40,通常,采用有限稀释克隆细胞的方法,，将杂交瘤细胞多倍稀释，接种在多孔细胞培养板上培养，使每孔细胞不超过一个，,再由这些单细胞克隆生长，,然后检测各孔上清液中细胞分泌的抗体，那些上清液可与特定抗原结合的培养孔为阳性孔。,最终选出分泌预定特异抗体的杂交细胞株进行扩大培养。,再筛选出,能分泌所需抗体的杂交瘤细胞,41,阳性孔,方法,抗原,-,抗体杂交法,在单克隆抗体制备过程中，两次筛选的原理和方法是不相同的。,42,如何得到大量的单克隆抗体？,体内培养,体外培养,单克隆抗体,化学性质单一、特异性强,43,注射抗原,效应,B,细胞,骨髓瘤细胞,融合,多种杂交细胞,选择性培养基,筛选,1,抗原-抗体杂交法,克隆化,单克隆抗体,筛选,2,4.,第一次筛选出的杂交瘤细胞为何需进行克隆化培养和专一抗体检测？,44,45,单克隆抗体,筛,选,杂交细胞,杂交瘤细胞,体外或体内,细胞培养,筛选,骨髓瘤,细胞,诱导细胞融合,特异性杂交瘤细胞,杂交瘤细胞系,提取,经过免疫的,B,淋巴细胞,动物细胞融合技术,动物细胞培养技术,单克隆抗体的制备过程：,特点：既能产生专一抗体又能大量繁殖,特点：特异性强灵敏度高可大量制备,注射抗原,免疫,46,7,、单抗隆抗体的应用,作为诊断试剂,定位诊断肿瘤、心血管畸形等疾病,用于体外诊断人类和动植物疾病及病原鉴定，,纯度高、特异性强,，具有,准确、高效、简易、快速,的优点。,用于治疗疾病和运载药物,利用同位素标记单抗，在特定组织成像,制成,生物导弹,，将药物定向带到癌细胞所在的位置，在原位杀死癌细胞，疗效高、副作用小。,单克隆抗体的优点：,特异性强，灵敏度高，并可以大量制备。,47,48,49,用于治疗疾病和运载药物,特异性强、灵敏度高,生物导弹,单克隆抗体抗癌药物,疗效高、毒副作用小,结合同位素的单抗,-,生物导弹,50,结合同位素的单抗,-,生物导弹,单抗,放射性同位素,51,项目,动物细胞融合,植物体细胞杂交,原理,细胞膜的流动性,细胞膜的流动性和植物细胞的全能性,融合前提,分散成单个细胞,去除细胞壁,诱导方法,聚乙二醇、离心、振动、电激、,灭活病毒,聚乙二醇、离心、振动、电激、,结果,获得杂种细胞或细胞产物,获得杂种植株,用途,制备单克隆抗体,培育作物新品种,意义,使远缘杂交成为可能,克服远缘杂交障碍,52,对比,比较项目,植物体细胞杂交,单克隆抗体的制备,原理,融合前处理,促融方法,用途,过,程,第一步,第二步,第三步,第四步,细胞膜的流动性、细胞的全能性,细胞膜的流动性、细胞,增殖,酶解法去壁,小鼠要免疫处理,物理法化学法,物理、化学、生物法,原生质体的制备,融合亲本细胞的准备,原生质体的融合,与筛选,动物细胞融合与,两次筛选,杂种细胞的形成与培养,对产生特定抗体的杂交瘤细胞培养,杂种植株的鉴定,单克隆抗体的分离提纯,单抗有助于疾病的诊断、治疗,获得具优良性状的杂种植株,53,动物细胞工程小结,动物细胞培养：,原理、营养、条件、过程、细胞生长特点、结果、应用,动物细胞融合：,原理、诱导方法、过程、应用,单克隆抗体的制备：,原理、过程、特点、应用,核移植与克隆动物：,供体、受体、核移植方法、克隆动物的方法、克隆动物的遗传特性、应用,动、植物细胞工程的比较：,植物组培技术与动物细胞培养技术、植物体细胞杂交技术与动物细胞融合技术,54,图中,B,为,_,过程，,常用,_,作为诱导剂,，该细胞继承,_,的遗传特性，既能,_,又能,_,。,B,体外培养,骨髓瘤细胞,杂交瘤细胞,足够数量的细胞群,注射到,小鼠腹腔,A,C,1.,下图为某同学根据杂交瘤技术的方法，设计的生产破伤风杆菌的抗体实验方案,该实验方案的,目是,；,A,是从小鼠的脾脏中取得,_,该细胞能够产生,；,制备单克隆抗体,B,细胞,专一抗体,细胞融合,灭活病毒,双亲细胞,分泌专一抗体,无限增殖,55,单克隆抗体的制备,1,、怎样获得能分泌专一抗体的,B,淋巴细胞？,2,、从何处获得较多的,B,淋巴细胞？,3,、用什么方法可以使,B,淋巴细胞与骨髓瘤细胞融合？,4,、怎样筛选出杂交瘤细胞？,5,、筛选出的杂交瘤细胞产生的抗体都一样吗？,6,、怎样获得只产生特异性抗体的杂交瘤细胞？,7,、怎样获得大量的单一抗体？,反复注射特定的抗原，免疫小鼠。,小鼠的脾脏,PEG,、灭活的病毒等,利用,HAT,选择培养基培养，筛选,否,用多孔细胞培养板培养，稀释度要,保证每个孔内不多于一个细胞。,抗原抗体杂交法检测,呈阳性反应,体内或体外大量培养特异的杂交瘤细胞，从中提取单一抗体。,56,单克隆抗体,筛,选,杂交细胞,杂交瘤细胞,体外或体内,细胞培养,筛选,骨髓瘤,细胞,诱导细胞融合,特异性杂交瘤细胞,杂交瘤细胞系,提取,经过免疫的,B,淋巴细胞,动物细胞融合技术,动物细胞培养技术,单克隆抗体的制备过程：,特点：既能产生专一抗体又能大量繁殖,特点：特异性强灵敏度高可大量制备,注射抗原,免疫,57,单克隆抗体,B,淋巴细胞,骨髓瘤细胞,诱导融合,选择,培养,杂交瘤,细胞,克隆化,培养,抗体,检测,产生所需抗体的杂交瘤细胞,体外培养,小鼠腹腔内增殖,单克隆抗体,多种杂,交细胞,1,、该过程中用到了两种技术,小结,2,单克隆抗体的制备过程：,动物细胞培养技术,动物细胞融合技术,2,、单克隆抗体的制备过程的三个“一”：,一种,诱导细胞融合的新方法，产生了,一种,新细胞，得到了,一种,优势,抗体。,灭活病毒诱导融合,杂交瘤细胞,单克隆抗体,优势：特异性强、灵敏度高，,可大量制备,58,两个过程,动物细胞培养过程,单克隆抗体制备过程,三个“一”,一个诱导细胞融合的新方法,灭活病毒,一个新细胞杂交瘤细胞,一个优势单克隆抗体特异性 强、灵敏度高的优势,本节小结,重点,59,1975,年,Kohler,和,Milstein,的单克隆抗体技术在生产和使用抗体方面开创了新纪元，图,10,示单克隆抗体制备流程阶段示意图。请据图回答下列问题：图,10,（,1,）该技术是在动物细胞培养技术和,技术的基础上发展起来的。,（,2,）图,10,中细胞,A,体外培养不具有,分裂能力，但能分泌,，,细胞,B,体外培养能够,。,（,3,）动物细胞融合常用的方,法是,。,图,10,（,1,）动物细胞融合（,2,）分泌特异性抗体、无限增殖（,3,）,PEG,（灭活的病毒、电刺激）,60,（,4,）细胞融合是随机的过程，在,HAT,培养基中培养，要筛选出,细胞。在细胞培养过程中，为了促进细胞摄取葡萄糖，常向培养液中加入,（激素）。,（,5,）培养,2,周后，即测定培养细胞,的特征，筛选出,细,胞置于不同孔内（如图所示）培养。,此操作前要将培养细胞稀释到,7,10,个细胞,/ml,，每孔滴入,0.1ml,细胞稀释液，其目的是,。,（,6,）要获得大量的单克隆抗体，,可对获得的杂交瘤细胞进行,培养。,（,4,）杂交瘤、胰岛素（,5,）特异性分泌抗,X,蛋白抗体的、保证每个孔内不多于一个细胞，达到单克隆培养的目的（单一细胞培养以保证抗体的纯度）、（,6,）体外或体内,61,单克隆抗体制备过程,62,8.,已知细胞合成,DNA,有,D,和,S,两条途径，其中,D,途径能被氨基嘌呤阻断。,人淋巴细胞中有这两种,DNA,的合成途径，但一般,DNA,不分裂增殖。鼠骨髓瘤细胞中尽管没有,S,途径，但能不断分裂增殖，将这两种细胞在试管中混合，加聚乙二醇促融，获得杂种细胞。请回答：,试管中除融合的杂种细胞外，还有,种融合细胞,2,63,设计一方法（不考虑机械方法），从培养液中分离出杂种细胞，并说原理。,培养液中加入氨基嘌呤，收集增殖的细胞。,加入氨基嘌呤后，使,D,合成途径阻断，仅有,D,合成途径的骨髓瘤细胞及其彼此融合的细胞就不能增殖，但人淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合后的杂种细胞因为可以利用淋巴细胞中的,S,途径合成,DNA,而增殖。,64,（,1,）融合后的杂种细胞容易成活吗？,（,2,）制备单克隆抗体的过程应用了哪些细胞工程技术手段？,（,3,）,在整个制备的过程中要经过几次筛选？,思考,：,细胞的同源性越近，融合形成的杂种细胞越易成活,细胞融合技术、细胞培养技术,.,筛选得到杂交瘤细胞，,.,筛选先在多孔培养板上，在每孔只有,一个杂交,瘤细胞,下培养筛选出特异抗体的细胞群,65,怎样筛选出,B,淋巴细胞和骨髓瘤细胞间融合所形成的能产生特定抗体的杂交瘤细胞？,用抗体检测和克隆化培养得到能分泌所需抗体的杂种细胞,专一抗体检测,。,18.,如何利用杂交瘤细胞来大量生产单克隆抗体？,将杂交瘤细胞在,体外大规模培养,，从细胞培养液中就能提取大量的单克隆抗体；,把杂交瘤细胞注射到,小鼠腹腔内增殖,，再从小鼠腹腔中提取单克隆抗体。,66,如何进行杂交瘤细胞的抗体检测及克隆化培养？,融合后的细胞经选择性培养基培养后，能存活的细胞就是杂交瘤细胞。但这些杂交瘤细胞并非都是能分泌所需抗体的细胞，通常用,“,有限稀释法,”,来选择。,将杂交瘤细胞稀释，用多孔细胞培养板培养，使每孔细胞不超过一个，通过培养让其增殖。然后检测各孔上清液中细胞分泌的抗体（常用酶联免疫吸附试验法），那些上清液可与特定抗原结合的培养孔为阳性孔。,阳性孔中的细胞还不能保证是来自单个细胞，挑选阳性孔的细胞继续进行有限稀释，一般需进行,3,4,次，直至确信每个孔中增殖的细胞为单克隆细胞。该过程即为杂交瘤细胞的克隆化培养。,67,第二次筛选的原理和方法：,在实际免疫过程中，由于采用连续注射抗原的方法，且一种抗原决定簇刺激机体形成相对应的一种效应,B,淋巴细胞，因此，从小鼠脾脏中取出的效应,B,淋巴细胞的特异性是不同的，经,HAT,培养液筛选的杂交瘤细胞特异性也存在差异，所以必须从杂交瘤细胞群中筛选出能产生针对某一预定抗原快定簇的特异性杂交瘤细胞。,通常采用有限稀释克隆细胞的方法，将杂交瘤细胞多倍稀释，接种在多孔的细胞培养板上，使每一孔含一个或几个杂交瘤细胞（理论上,30%,的孔中细胞数为,0,时，才能保证有些孔中是单个细胞），再由这些单细胞克隆生长，最终选出分泌预定特异抗体的杂交细胞株进行扩大培养。,68,思考与探究,1.植物体细胞杂交技术与动物细胞融合技术有什么不同？,植物体细胞杂交技术与动物细胞融合技术基本相同，,不同的是植物体细胞融合前需去掉细胞壁，,然后再融合；动物细胞融合是两个体细胞直接融合。,诱导融合方法不同：动物细胞诱导融合所用的方法比植物体细胞杂交多一类灭活的病毒诱导；结果不同：植物体细胞杂交培养成了杂种植株，而动物细胞融合只培养出了杂交细胞。,69,2.制备单克隆抗体时，为什么要选用B淋巴细胞和骨髓瘤细胞融合形成杂交瘤细胞？,哺乳动物感染抗原后，其体内会形成相应的,B淋巴细胞，B淋巴细胞能分泌相应的抗体凝聚或杀死这些抗原。动物在免疫反应的过程中，每一种B淋巴细胞能分泌一种特异性抗体，要想获得大量的特异性抗体，必须使能分泌该单一抗体的B淋巴细胞大量增殖。,B淋巴细胞具有产生单一抗体的能力，但不能在体外增殖；骨髓瘤细胞是一种癌细胞，它能在体外培养条件下无限增殖，但不能产生抗体。,因此，把一种,B淋巴细胞与骨髓瘤细胞进行细胞融合，产生,杂交瘤细胞，它会兼有两个亲本细胞的特性,在体外培养条件下能不断增殖，同时能产生出某种特异性的抗体。,70,知识拓展,3,.,为什么不只用两个而要用多个细胞进行动物细胞间的融合？,就目前常用的细胞融合方法来看，不管是用物理的、化学的方法，还是生物的方法，其融合率都不可能是,100%。仅用两个细胞融合，其效率太低，不一定能得到融合细胞。更重要的是，即使两个细胞已发生融合，但并不一定是研究者期望得到的细胞类型。目前动物细胞融合技术最有价值的应用就是单克隆抗体的制备。我们以制备单克隆抗体为例来说明这一问题。我们知道，体内产生的特异性抗体种类可多达百万种以上，但是每一个B淋巴细胞只分泌一种特异性抗体，如果仅取一个脾细胞（含B淋巴细胞）和一个瘤细胞杂交，我们不能确定该脾细胞分泌的抗体是否正是我们所需要的；若用大量的脾细胞和瘤细胞进行融合，就可以从融合细胞中筛选出能分泌所需抗体的杂交瘤细胞。,71,知识拓展,4,.,如何进行杂交瘤细胞的抗体检测及克隆化培养？,融合后的细胞经选择性培养基培养后，能存活的细胞就是杂交瘤细胞。但这些杂交瘤细胞并非都是能分泌所需抗体的细胞，通常用,“,有限稀释法,”,来选择。将杂交瘤细胞稀释，用多孔细胞培养板培养，使每孔细胞不超过一个，通过培养让其增殖。然后检测各孔上清液中细胞分泌的抗体（常用酶联免疫吸附试验法），那些上清液可与特定抗原结合的培养孔为阳性孔。阳性孔中的细胞还不能保证是来自单个细胞，挑选阳性孔的细胞继续进行有限稀释，一般需进行,34次，直至确信每个孔中增殖的细胞为单克隆细胞。该过程即为杂交瘤细胞的克隆化培养。,72,知识拓展,6,.,单倍体的诱导方法及应用价值,单倍体（,haploid）是指具有配子染色体数目的个体。单倍体可以自发产生，也可以诱发产生。动物中（除蜜蜂、白蚁等外）的单倍体，由于生理上不正常，在胚胎发育时期就会死亡。植物上自发产生单倍体的植物很多，如番茄、棉花、咖啡、甜菜、大麦、小麦、油菜等，共有约10个科26个属36个种的植物可以自发产生单