微生物培养专业知识讲座.pptx

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,#,微生物培养专业知识讲座,微生物培养专业知识讲座,第1页,1.,方法：,平板划线法,和,稀释涂布平板法,2.,原理：在培养基上将,细菌稀释,(,稀释涂布平板法,),或,分散,(,平板划线法,),成单个,细胞,，使其成长成单个菌落，这个菌落就是一个纯化细菌菌落。,【,稀释涂布平板法中培养皿中菌落数目就代表稀释对应倍数后菌 体个体数，所以稀释涂布平板法能够用来计数，但平板划线法不行,】,3.,注意事项：灼烧接种环后要冷却,;,接着上次划线末端划线,;,不要将最终一区划线与第一区相连,;,涂布平板时，涂布器应用,70%,酒精消毒。,4.,平板划线法中,每次灼烧接种环目标,：,第一次灼烧：防止接种环上可能存在微生物污染培养基,每次划线前灼烧：杀死上次划线结束后接种环上残留菌种，使每次划线,菌种均来自,上次划线末端,。,划线结束灼烧：,杀死接种环上残留菌种，防止细菌污染环境和感染操作者,。,微生物分离,微生物培养专业知识讲座,第2页,平板划线操作,【,问题,1】,在作第二次以及其后划线操作时，为何总是从上一次划线末端,开始划线？,答：划线后，线条末端细菌数目比线条起始处要少，每次从上一次划线末,端开始，能使细菌数目伴随划线次数增加而逐步降低，最终能得到由,单个细菌繁殖而来菌落。,【,问题,2】,平板冷凝后，为何要将平板倒置？,答：平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后培养基表面湿度也比较高，,将平板倒置，既能够使培养基表面水分更加好地挥发，又能够预防皿盖,上水珠落入培养基，造成污染。,微生物培养专业知识讲座,第3页,微生物与病毒关系,1、,关于病毒增殖叙述中，正确是（,）,A,病毒侵入宿主细胞后，合成一个蛋白质,B,病毒繁殖只在宿主活细胞中进行,C,病毒繁殖以核衣壳为单位,D,在普通培养基上能培养病毒,【,解析,】,解答此题需从以下几方面入手分析：首先，病毒是营寄生方式生活，必须生活在活细胞内，不能独立生活，所以在普通培养基上不能生活。第二，繁殖时，病毒核酸进入宿主细胞，利用宿生成份合成子代个体，除了核衣壳，还应包含该病毒其它结构。合成蛋白质不只是一个，应该是各种，包含各种结构蛋白质及物质合成时所需各种酶。,【,答案,】B,微生物培养专业知识讲座,第4页,培养基种类,2,、要从各种细菌中分离某种细菌，培养基要用（）,A,加入青霉素培养基,B,加入高浓度食盐培养基,C,固体培养基,D,液体培养基,【,解析,】,微生物分离需使用固体培养基，因为某种细菌种类不明，所以难以使用选择培养基，如加入青霉素培养基能够分离到酵母菌和霉菌，加入高浓度食盐培养基能够分离到金黄色葡萄球菌。,【,答案,】C,微生物培养专业知识讲座,第5页,原油,选择,强,干热灭菌法,高压蒸汽灭菌法,火焰,微生物培养专业知识讲座,第6页,专题,4,酶研究与应用,果胶酶在果汁生产中作用,探讨加酶洗衣粉洗涤效果,酵母细胞固定化,微生物培养专业知识讲座,第7页,一、果胶酶,半乳糖醛酸,1,作用：能够分解果胶成为可溶性,_,，,使浑浊果汁变得澄清。,2,组成,果胶,果胶分解酶,(1),并不特指某一个酶，而是分解,_,一类酶总称。,(2),包 括 多 聚 半 乳 糖 醛 酸 酶、,_,和,_,。,果胶酯酶,微生物培养专业知识讲座,第8页,3,起源,霉菌,酵母菌,细菌,植物、,_,、,_,和,_,均能产生果胶酶。,4,应用,细胞壁,胞间层,果胶酶能够分解果胶，瓦解植物,_,及,_,，,使榨取果汁变得更轻易,_,和,_,。,过滤,澄清,微生物培养专业知识讲座,第9页,二、加酶洗衣粉,蛋白酶,脂肪酶,淀粉酶,1,常 用 种 类：,_,、,_,、,_,和,_,，其中应用最广泛、效果最显著是碱性,_,蛋白酶,脂肪酶,和碱性,_,。,2,去污机制,蛋白质,(1),碱性蛋白酶能将血渍、奶渍等含有大分子,_,水解成可溶性,_,或小分子肽，使污物从衣物上脱落。,纤维素酶,氨基酸,微生物培养专业知识讲座,第10页,(2),脂肪酶、淀粉酶和纤维素酶也能将大分子,_,、,21,_,和,22,_,水解为小分子物质。,淀粉,纤维素,3.,酶制剂特点：能够耐酸、耐碱、忍受,23,_,和较高,24,_,，而且经过特殊化学物质将酶层层包裹，与,洗衣粉其它成份隔离。,表面活性剂,温度,脂肪,微生物培养专业知识讲座,第11页,探究果胶酶用量,1,试验原理,果胶在果胶酶催化下形成,半乳糖醛酸,。,(,可用于植物体细,胞杂交，也可使榨取果汁更轻易且使果汁澄清,),微生物培养专业知识讲座,第12页,2,试验流程,(1),准确称取纯果胶酶,1mg,、,2mg,、,3mg,、,4mg,、,5mg,、,6mg,、,7mg,、,8mg,、,9mg,，配制成,相等体积,酶水溶液，取等量放入,9,支试管中，依次编号为,1,9,号,【,也可只配制一个浓度酶液，只是使用体积,(,量,),不一样,】,。制取苹果泥并称,45g,苹果泥，分装入,9,支试管中，每支试管中装,5g,，依次编号为,1,9,号。,(2),将上述试管放入,37,恒温水浴中平衡内外温度。,(3),一段时间后将不一样浓度果胶酶分别快速与各试管苹果泥混合，然后再放入恒温水浴中，约,20min,。,微生物培养专业知识讲座,第13页,(4),过滤后测量统计果汁体积。,(5),试验结果分析说明,试验中所用果胶酶尽可能使用其纯酶制剂或不含抑制物,粗酶制剂，以免影响对酶用量估算。,假如伴随酶浓度增加，过滤到果汁体积也增加，,说明酶用量不足；当酶浓度增加到某个值后，再增加酶,用量，过滤到果汁体积不再改变，说明酶用量已经足够，,这个值就是酶最适用量。,微生物培养专业知识讲座,第14页,【,突破题,1】,在用果胶酶处理果泥时，为了使果胶酶能够充分地,催化反应，应采取办法是,(,),A,加大苹果泥用量,B.,加大果胶酶用量,C,深入提升温度,D,用玻璃棒不时地搅拌反应混合物,【,解题指导,】,搅拌能够使酶与底物充分接触而提升反应效,率，使反应更充分。,【,答案,】D,微生物培养专业知识讲座,第15页,酶活力测定及不一样加酶洗衣粉洗涤效果试验,1,酶简单制作方法,(1),对于细胞内酶：用捣碎机、研磨器等机械将生物组织,细胞破碎，使酶从活细胞中释放出来，进入细胞外溶液中，,经过滤、离心制备成粗酶液。,(2),对于分泌到细胞外酶：直接从分泌物或细胞外组织,间隙中提取，提取过程中注意温度、,pH,等各种环境原因对酶活,性影响。,微生物培养专业知识讲座,第16页,2,酶活力测定普通原理和方法,酶活力通常以单位时间内底物消耗量或者在单位时间,内产物生成量来表示。比如，经过测定单位时间内麦芽糖,生成量来检测淀粉酶活力。另外，还能够经过测定单位时间,内淀粉消耗量来检测淀粉酶活力。,微生物培养专业知识讲座,第17页,种类,洗涤原理,洗涤实例,蛋白酶,可将蛋白质水解为易溶解或分散,于洗涤液中小分子肽或氨基酸,血渍、奶渍及各种,食品类蛋白质,污垢,脂肪酶,把脂肪水解为较易溶解甘油和,游离脂肪酸,食品油渍、人体,皮脂、口红,淀粉酶,能使淀粉快速分解为可溶性麦,芽糖、葡萄糖等,来自面条、巧克力,等污垢,纤维素酶,使纤维结构变得蓬松，从而使,渗透到纤维深处尘土和污垢能,够与洗衣粉充分接触，抵达愈加好,去污效果,3,常见酶制剂种类及洗涤原理,微生物培养专业知识讲座,第18页,4.,探究加酶洗衣粉洗涤效果,(1),试验原理,加酶洗衣粉中含有酶制剂,(,蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶、纤,维素酶,),。,污渍中蛋白质、脂肪、淀粉、纤维素在酶制剂分解,下形成小分子物质。,温度、,pH,、表面活性剂会影响酶活性。,微生物培养专业知识讲座,第19页,(2),试验变量控制,比较普通洗衣粉与加酶洗衣粉洗涤效果：自变量为洗,衣粉种类，其余变量为无关变量，应严格控制，以免造成干,扰。,探究加酶洗衣粉最适温度：水温为自变量，水温梯度,应较小。,不一样种类加酶洗衣粉洗涤效果：洗衣粉种类为自变量。,微生物培养专业知识讲座,第20页,【,突破题,2】,以下验证某种加酶洗衣粉需要最适温度，试验正,确是,(,),A,取一系列不一样温度，其它条件相同水，加入相同污,物及等量加酶洗衣粉，看哪一个温度中效果最好,B,在不一样温度水中，加入不等量洗衣粉，看哪种效果,好,C,将加酶洗衣粉加入,30,水中不如加到,45,水中洗涤,效果好，说明,45,为最适温度,D,将加酶洗衣粉与普通洗衣粉分别加入,37,水中洗涤同,样污物，发觉加酶洗衣粉效果好，说明加酶洗衣粉最适温,度为,37,微生物培养专业知识讲座,第21页,【,解题指导,】,验证某种加酶洗衣粉最适温度试验，,变量只能是温度，其余情况应遵照单一变量标准。,【,答案,】A,微生物培养专业知识讲座,第22页,组成,本质,作用,果胶酶,多聚半乳糖醛酸,酶、果胶分解酶、,果胶酯酶,蛋白质,催化水解果胶成为可,溶性半乳糖醛酸,纤维素,酶,C,1,酶、,C,X,酶、,葡萄糖苷酶,蛋白质,果胶酶与纤维素酶比较,微生物培养专业知识讲座,第23页,【,演绎题,】,关于果胶酶叙述中错误是,(,),A,组成植物细胞壁主要成份是果胶和纤维素，果胶主要,分布在细胞初生壁和胞间层,B,果胶有各种，果胶酶也有各种，如多聚半乳糖醛酸酶、,果胶分解酶等,C,果胶酶在食品工业中有广泛用途，在其它方面则无用,处，表达了酶专一性,D,果胶酶、纤维素酶配合使用，可分解植物细胞壁中果,胶和纤维素，促使淀粉、脂质、维生素和蛋白质释放，以提,高饲料营养价值,微生物培养专业知识讲座,第24页,【,解题指导,】,果胶酶作用是分解细胞壁中果胶，有多,聚半乳糖醛酸酶,、,果胶分解酶,和,果胶酯酶,等；在食品工业如制,作果汁、提升葡萄酒质量等方面作用很大，也常与纤维素酶等,共同使用，提升饲料营养和降低饲料黏度，促进饲料在动物消,化道内消化等作用。,【,答案,】C,微生物培养专业知识讲座,第25页,1.(,届惠州调研,),以下关于生物工程中酶作用叙述不,正确是,(,),A,纤维素酶可用于体细胞杂交,B,胰蛋白酶可用于动物细胞培养,C,限制性核酸内切酶只用于提取目标基因,D,DNA,连接酶可用于,DNA,拼接,【,答案,】C,微生物培养专业知识讲座,第26页,2,(,届广州调研,),关于生物大分子结构或功效说法，,正确是,(,),A,DNA,分子特异性主要取决于碱基特定排列次序,B,纤维素酶能除去细胞壁，果胶酶可分解细胞膜,C,一个,tRNA,只能识别一个密码子，但能携带各种氨基酸,D,肽链盘曲和折叠被解开，蛋白质特定功效不会发,生改变,【,答案,】A,微生物培养专业知识讲座,第27页,3,(,年广东文基,),嫩肉粉是以蛋白酶为主要成份食品,),添加剂，就酶作用特点而言，以下使用方法中最正确是,(,A,炒肉过程中加入,B,肉炒熟后起锅前加入,C,先用沸水溶解后与肉片混匀，炒熟,D,室温下与肉片混匀，放置一段时间，炒熟,微生物培养专业知识讲座,第28页,【,解析,】,本题考查酶使用方法，酶活性轻易受到温度，,酸碱度影响而失活，所以要保持酶活性，才能使之发挥作用。,ABC,在反应之前都经高温处理了，所以酶失去活性，只有,D,，先,让酶反应，后炒熟，不影响酶作用发挥。,【,答案,】D,微生物培养专业知识讲座,第29页,直接使用酶、固定化酶和固定化细胞催化优缺点以下表所表示：,类型,优点,不足,直接使用酶,催化效率高，低耗能、低污染等。,对环境条件非常敏感，轻易失活；溶液中酶极难回收，不能被再次利用，提升了生产成本；反应后酶会混在产物中，可能影响产品质量。,固定化酶,酶既能与反应物接触，又能与产物分离，同时，固定在载体上酶还能够被重复利用。,一个酶只能催化一个化学反应，而在生产实践中，很多产物形成都经过一系列酶促反应才能得到。,固定化细胞,成本低，操作更轻易。,固定后酶或细胞与反应物不轻易靠近，可能造成反应效果下降等。,微生物培养专业知识讲座,第30页,1.,灼烧灭菌：,接种用具和接种过程中试管口或瓶口放在酒精灯火焰充分燃烧层中进行灼烧灭菌（如教材,16,页图,2-2,所表示）。,常见消毒与灭菌方法,2.,干热灭菌：,将玻璃器皿、金属用具等能耐高温并需要保持干燥物品放到干热灭菌箱内，在,160,170,O,C,中加热,1,2h,即可。,3.,高压蒸汽灭菌：,将需灭菌物品放到盛有水高压灭菌锅内（见教材,16,页图,2-4,）煮沸，待冷空气排尽后，密闭继续加热至锅内压力到,100kPa,，温度到,121,O,C,后，维持,15,30min,即可。,微生物培养专业知识讲座,第31页,纤维素分解菌筛选,刚果红染色法,原理：,刚果红是一个染料，它能够与像纤维素这么多糖物质形成红色,复合物，但并不和水解后纤维二糖和葡萄糖发生这种反应。当咱们,在含有纤维素培养基中加入刚果红时，刚果红能与培养基中纤维,素形成红色复合物。当纤维素被纤维素酶分解后，,刚果红纤维素,复合物就,无法形成,，培养基中会出现以纤维素分解菌为中心,透明圈,。,这么，咱们就能够经过是否产生透明圈来筛选纤维素分解菌。,微生物培养专业知识讲座,第32页,纯化大肠杆菌,原理：在培养基上将细菌稀释或分散成单个细胞，使其长成单个菌落，,这个菌落就是一个纯化细菌菌落。方法：平板划线法、稀释涂布平板法。,显微镜直接计数法,原理：利用特定细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下计算一定容积,样品中微生物数量。方法：用计数板计数。缺点：不能区分死菌与活菌,统计菌落数目标方法,统计菌落数目时，常见来统计样品中活菌数目标方法是 稀释涂布平板法。除此之外，,显微镜直接计数 也是测定微生物数量常见方法,微生物培养专业知识讲座,第33页,【,练习,1】,以下关于生物学研究方法及技术叙述，错误是（）,A,用稀释涂布平板法可经过统计菌落数来推测样品中活菌数,B,进行胚胎分割移植时应选取发育及形态正常桑椹胚或囊胚,C,利用试管婴儿技术培育新个体过程属于无性繁殖,D,利用,PCR,技术进行,DNA,扩增时不需要加入解旋酶,【,练习,2】,分离土壤中纤维素分解菌用到方法,（）,稀释倒平板法 涂布平板法,单细胞挑取法 选择培养分离,A,B,D,【,解析,】,分离土壤中纤维素分解菌，先进行选择培养，增大纤维素分解菌浓度，梯度稀释，涂布平板、培养，单细胞挑取以取得纯培养。稀释倒平板法是先进行梯度稀释，然后分别取不一样稀释液少许，与已溶化并冷却至,50,左右琼脂培养基混合、摇匀后，倾人灭菌培养皿中，制成可能含菌琼脂平板，保温一定时间即可出现菌落。涂布平板法是先将溶化培养基倒人无菌培养皿，制成无菌平板，冷却凝固后，将一定量某一稀释度样品液涂布在整个子板表面，经培养后形成单个菌落。答案：,B,。,微生物培养专业知识讲座,第34页,【,练习,3】,在微生物群体生长规律测定中，种内斗争最显著最激烈时期是,A,调整期,B,对数期,C,稳定时,D,衰亡期,【,解析,】,种内斗争是一个生态原因。种内斗争反应了种内生物对生存空间和生活资源争夺。在生,活空间充裕，营养充分时候，种内斗争程度是比较低。伴随微生物个体数目标增加，,每个个体生存空间越来越少，营养物质也越来越少，每个个体对生存空间和资源争夺,也越来越激烈，种内斗争就越来越激烈。由此可知，在稳定时种内斗争最激烈。在衰亡,期，微生物数目已经开始降低，,PH,已经极度不适于微生物生存，次级代谢产物积累到,很高程度，这时微生物生存斗争主要是与无机环境斗争。答案：,C,【,练习,4】,要从各种细菌中分离某种细菌，培养基要用,(,),A,固体培养基,B,液体培养基,C,加入青霉素培养基,D,加入高浓度食盐培养基,【,解析,】,固体培养基主要用于微生物分离、判定等，液体培养基用于工业生产，加入青霉素选,择培养基能抑制细菌、放线菌生长，从而分离酵母菌和霉菌；加入高浓度食盐可抑制,各种细菌生长，从而分离金黄色葡萄球菌。本题没说明分离哪种细菌，故应用固体培养,基，如在固体培养基上以划线方法接种，然后再分离出菌落。答案：,A,微生物培养专业知识讲座,第35页,【,练习,5】,在微生物学中，将允许特定种类微生物生长，同时抑制或阻止其,他种类微生物生长培养基称做,(,),A,判别培养基,B,加富培养基,C,选择培养基,D,基础培养基,【,解析,】,基础培养基是含有普通微生物生长繁殖所需基础营养物质培养基，比如牛肉膏蛋白,胨培养基；加富培养基普通用来培养营养要求比较苛刻异养型微生物；判别培养基是,在培养基中加入某种特殊化学物质，微生物代谢产物与特殊化学物质发生特定化学反,应，产生显著特征改变；选择培养基是在培养基中加入特殊营养物质或化学物质，抑制,不需要微生物生长，促进所需微生物生长。答案：,C,微生物培养专业知识讲座,第36页,C1,酶,是对纤维素最初起作用酶，破坏纤维素链结晶结构。,Cx,酶,是作用于经,C1,酶活化纤维素、分解,-1,，,4-,糖苷键纤维素酶。,葡糖苷酶能够将纤维二糖、纤维三糖及其它低分子纤维糊精分,解为葡萄糖。,纤维素酶反应,和普通酶反应不一样，其最主要区分在于纤维素酶是多,组分酶系，且底物结构极其复杂。,微生物培养专业知识讲座,第37页,