临床尿液、粪便检验及微生物标本处理.ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,临床尿液、粪便检验及微生物标本处理,泰州市人民医院,韩俊岭,尿液常规检验,一、标本的采集,尿常规标本可采集晨尿、二次晨尿、随机尿；,容器、尿量，病人留尿前的准备；,采集后,2,小时内完成常规检验。,二、尿液的干化学检测,（二）、尿液分析仪试剂带,多联试带是将多种检测项目的试剂块，按一定间隔、顺序固定在同一条带上的试带。使用多联试带，进入一次尿液可同时测定多个项目。,采用多层膜结构：,第一层：尼龙膜保护作用，防止大分子物质对反应的污染；,尿液常规检验,4,支持层,吸水层,碘酸盐层,过滤层,透明膜,试剂层,试带的多层膜结构,2,、尿液的干化学检测,反应层,尿液常规检验,5,尿试带的多层膜结构,过滤层：,尼龙膜，起保护作用，防止大分子物质对反应的影响,反应,层：,绒制品，包括过碘酸盐区（有的无此区）和,试剂 区,，过碘酸盐区可破坏,VitC,的干扰；试剂区,含有试剂,成分主要与所测物质发生反应，产生颜色,反应。,吸水层：,可使尿液均匀快速深入，并能抑制尿液流到,相 邻,反应区,。,支持,层：,不被尿液浸润的塑料片做支持层。,空白块：,用于消除尿自身颜色在试剂块上产生颜色的干扰。,尿液常规检验,1,检测项目,尿液的酸碱度（,pH,）、比密（,SG,）、蛋白质（,PRO,）、葡萄糖（,GLU,）、酮体（,KET,）、胆红素（,BIL,）、尿胆原（,URO,）、亚硝酸盐（,NIT,）、白细胞（,LEU,）、隐血（,BLD,）、维生素,C,（,Vit C,），一个或多个检测内容可组成不同的组合。,2,试带反应原理,酸碱度（,pH,）：采用,pH,指示剂法。用甲基红（,pH4.6,6.2,）和溴麝香草酚蓝（,pH6.0,7.8,）两种指示剂适量组合成为复合,pH,试剂模块，其呈色范围为,pH4.5,9.0,，颜色发生橙红、黄绿及蓝色变化。,尿液常规检验,比密（,SG,）：采用离子交换,pH,指示剂法。尿液中电解质释放出的阳离子与试带中的离子交换体中的,H,交换，释放出的,H,与酸碱指示剂反应，根据指示剂显示的颜色（蓝、绿、黄）可换算尿液中的电解质浓度，以电解质浓度来代表密度，从而得出比密值。,尿蛋白（,PRO,）：采用,pH,指示剂蛋白误差法。试剂模块中主要含有酸碱指示剂溴酚蓝、枸橼酸缓冲系统和表面活性剂。在,Ph3.2,时，溴酚蓝电离、带负电荷并释放,H,带负电荷的溴酚蓝与此时带正电荷的蛋白质（白蛋白）生成复合物，导致溴酚蓝进一步电离产生更多的,H,，当超过缓冲范围时，指示剂发生颜色改变（黄、绿、蓝），变色程度与蛋白质含量成正比。,尿液常规检验,尿葡萄糖（,GLU,）：采用葡萄糖氧化酶法。尿液中葡萄糖在试带中葡萄糖氧化酶的催化下，生成葡萄糖酸内酯和过氧化氢。在有过氧化物酶的情况下，以过氧化氢为电子受体使色素原（邻甲联苯胺、碘化钾等）氧化而呈色。色素原不同，呈色可为蓝色、红褐色或红色。,尿酮体（,KET,）：采用亚硝基铁氰化钠法。检测尿酮体的模块中主要含有亚硝基铁氰化钠，可与尿液中的乙酰乙酸、丙酮产生紫色反应。其对乙酰乙酸的敏感性为,50,100mg/L,，对丙酮为,400,700mg/L,，,不与,-,羟丁酸起反应。,尿液常规检验,尿亚硝酸盐（,NIT,）：采用偶氮法。尿液中含有来自食物或蛋白质代谢产生的硝酸盐，如尿液中含有大肠埃希菌等具硝酸盐还原酶的细菌时，可将硝酸盐还原为亚硝酸盐，亚硝酸盐与芳香胺的重氮反应形成重氮盐，随后发生偶联反应，形成红色重氮色素。,尿白细胞（,LEU,）：采用中性粒细胞酯酶法。中性粒细胞的酯酶能水解吲哚酚酯生成吲哚酚和有机酸，吲哚酚可进一步氧化形成靛蓝，或吲哚酚和重氮盐反应生成紫色重氮色素。,尿液常规检验,尿胆原（,URO,）：采用醛化反应法：在强酸条件下尿胆原和对,-,二甲氨基苯甲醛发生醛化反应，生成樱红色缩合物。偶氮法：在强酸条件下尿胆原和对,-,四氧基苯重氮四氟化硼发生重氮盐偶联反应，生成胭脂红色化合物。,尿胆红素（,BIL,）：采用偶氮法。在强酸性介质中，胆红素与试带上的二氯苯胺重氮盐起偶联作用，生成红色偶氮化合物。,尿液常规检验,尿隐血（,BLD,）：采用过氧化物酶法。血红蛋白中亚铁血红素具有弱的过氧化物酶样作用，以催化,H,2,O,2,作为电子受体使色原（常用的有邻联甲苯胺、氨基比林、联苯胺等）氧化呈蓝绿色，其颜色的深浅与血红蛋白成正比。,尿维生素,C,（,VitC,）：采用还原法。试剂模块中含有,2,，,6-,二氯酚靛酚钠、中性红、亚甲基绿磷酸二氢钠和磷酸氢二钠，维生素,C,能还原氧化型染料，而使指示剂发生由绿或深蓝至粉红色的颜色变化，颜色的深浅与,VitC,含量成正比。也有采用,VitC,和作为色素原的磷钼酸反应，形成钼蓝的原理。,尿液常规检验,12,尿试纸法的项目和反应原理,项 目 代号 反应原理 试剂主要成分,酸碱度,pH,pH,指示剂 甲基红、溴麝香草酚蓝,蛋白质,PRO,指示剂的蛋白质误差法 溴酚蓝、枸橼酸钠、表面活性剂,葡萄糖,GLU,葡萄糖氧化酶 葡萄糖氧化酶、过氧化物酶、色原受体,隐血,BLD Hb,类过氧化酶法,过氧化氢茴香素或过氧化氢枯烯、色原受体,胆红素,BIL,偶氮反应法,2,4-,二氯苯胺重氮盐,尿胆原,URO,醛反应法,对二甲氨基苯甲醛或对甲氧基苯重四氟化硼,酮体,KET,亚硝基铁氰化钠法 亚硝基铁氰化钠,亚硝酸盐,NIT,亚硝酸盐还原法 氨基苯砷酸、,1,2,3,4-,四氢并喹啉,-3,酚,白细胞,LEU,酯酶法 吲哚酚酯、重氮盐,比密,SG,多聚电解质离子解离法,甲氧乙烯顺丁烯二酸、溴麝香草酚蓝,抗坏血酸,VitC,吲哚酚法,2,6-,二氯酚靛酚钠,尿液常规检验,【,操作,】,1,混匀尿液,2,浸湿试带,3,沥去多余尿液,4,比色与分析,5,报告方式,尿液常规检验,【,注意事项,】,1,熟悉试带特性 必须了解所用试带各膜块反应原,理、药物干扰以及参考范围等，掌握试带检测每一成分的敏感度和特异性。很多中间环节和干扰因素都可影响颜色变化而导致假阳性或假阴性。同一检测项目，不同厂家所用的色素原可能不同，因此存在显色差别,2,注意试带保存条件 尿试带应根据厂家推荐的条件（如温度、暗处等）保存，在有效期内使用。不应将试带放在直射光下照射或暴露在潮湿环境中，应保存在厂商提供的容器中，不可更换保存容器。,尿液常规检验,3,规范操作,（,1,）试带从冷藏冰箱中拿出后，待平衡至室温再打开盛装的筒盖。一次只取所需要量的试带，并应立即将瓶盖盖好。多余试带不得放回原容器中，更不应该合并各瓶的试带。,（,2,）试带与尿液的反应时间需严格遵循产品说明书的规定，操作中注意切勿触摸试带上的反应检测模块。,（,3,）试带浸入尿液标本的时间应在,1,2s,，所有试剂模块，包括空白和参比模块，要全部渗入尿液中，试带上过多的尿液标本应去除干净。,尿液常规检验,4,、室内质控,试带法检测应至少使用阴性和阳性质控品进行室内质控，每工作日至少检测,1,次。,结果偏差不超过,1,个等级，且阴性不可为阳性，阳性不可为阴性。,应制定程序对失控进行分析并采取相应的措施，应检查失控对之前患者样品检测结果的影响。,尿液常规检验,尿液常规检验,尿液常规检验,尿液常规检验,镜检标准,:,1,、泌尿道疾病、肾病、糖尿病、应用免疫抑制剂和妊娠者尿标本必须镜检。,2,、尿标本外观、浊度不正常必须镜检。,3,、同时满足以下,5,项条件：尿标本外观、浊度正常；白细胞酯酶结果为阴性；亚硝酸盐结果为阴性；尿蛋白结果为阴性；隐血（血红蛋白或红细胞）结果为阴性，可不镜检。否则必须进行镜检复核。,三、尿沉渣显微镜检查,尿液常规检验,尿沉渣的检测方法：,1,、直接镜检法：又称混匀一滴尿法,2,、自然沉降法：尿液置室温下一定时间,(15-30min),，移去上层尿液，余,0.2mL,左右，混匀镜检。,3,、离心镜检法：尿液经一定转速一定时间离心后，移去上层尿液，余,0.2ml,，混匀镜检。,4,、染色法：常用结晶紫,沙黄法（,Sternheimer-Malbin,，,S-M,）对尿沉渣中的有形成份进行染色后镜检，提高尿沉渣的识别率和检出率。,5,、尿沉渣计数板法：取,10ml,尿液于离心管内，在规定时间和转速下离心，移去上层尿液，取尿沉渣混,尿液常规检验,匀后滴入计数板内，显微镜下计数，换算成一定体积内尿有形成份的含量。,6,、尿沉渣分析仪法：综合应用电阻抗法和流式细胞术，定量检测非离心尿中的有形成份。,尿液常规检验,方法学评价：,1,、尿沉渣显微镜检查,直接镜检法：简便易行费用低，但阳性率低，重复性差，易漏诊。一般用于门诊筛查、健康体检或有明显血尿脓尿患者。,离心法：相对于直接镜检法敏感、阳性率高，为我国临床常用的尿沉渣检查方法，并已制定了相关标准化操作规程。缺点是操作繁琐耗时，对门诊量大的医院做为常规项目检查劳动强度大。,尿沉渣计数板法：由于使用了标准化的定量计数板，使尿沉渣检查更符合标准化要求，更为定量和有比较性。,尿液常规检验,粪便检查,the,examination of feces/stool,粪便组成,是水,是固体,未消化的食物,消化道分泌物和有形成分,食物分解产物,细菌,占干重,1/3,固体,成分,检查的主要目的,1.,了解消化道以及消化器官是否有炎症、出血和寄生虫感染等情况,;,2.,OB,试验作为消化道肿瘤的过筛试验,;,3.,根据粪便的性状和组成，了解消化状况，借以粗略判断胰腺外分泌功能,;,4.,检查粪便中有无致病菌以防治肠道传染病,。,第一节,标本采集,一、标本的采集,采用自然排出的粪便,无粪便排出而又必须检查,肛门指诊或采便管采集标本。,标本采集注意事项,1,标本容器,带盖、干净、干燥、无渗漏、无吸水性,细菌学检查：灭菌容器,2,标本的采集量,常规性检查：约,5g,粪便,集卵检查和血吸虫毛蚴孵化：约,30g,粪便,3,标本的采集部位,含粘液、脓血等异常成分,从粪便的表面不同部位，深处及粪端多处取材,4,标本的送检时间,随送随检，,1h,内检查完毕,阿米巴滋养体：立即检查，标本保温,5,检查蛲虫卵,透明薄膜拭子,/,棉拭子,:,晚,12,时或清晨排便前自肛门周围皱裂处拭取，立即镜检。,6,检查寄生虫虫体及虫卵计数,采集,24,小时粪便,7,粪胆原定量检查,连续采集,3,天粪便，每天约取,20g,送检,8,脂肪定量检查,脂肪膳食,50,150g/,日，连服,6,天，第,3,天开始收集,72h,内的粪便，混合称重，取约,60g,送检,9,隐血试验化学法,素食三天，禁服,VitC,及铁剂等干扰试验的药品,10,灌肠或服油类泻剂的粪便,不适合作检查标本,第二节 粪便理学检验,一、量,二、性状,三、颜色,四、气味,五、寄生虫,一、量,粪便量的多少与人体的进食量、食物的种类及消化器官的功能状态有直接的关系。,进食粗粮及含纤维素较多的食物：粪便量相对较多；反之，则相对较少。,健康成人每日排便一次，粪便量约,100,300g,。,病理情况：粪便的量、排便次数和性状等可不同程度改变。,二、性状,正常成人粪便：,黄色或棕黄色，质软，成形便,婴儿粪便：,黄色或金黄色糊状便。,粪便异常性状及可能原因,1,粪便性状,可能机制,常见原因,球状硬块便,粪便在肠内停留过久，水分吸收过多,便秘患者、老年人、经产妇排便无力者和儿童巨结肠症,粘液便,肠道受刺激、炎症或过敏反应,各种肠炎、细菌性痢疾、阿米巴痢疾和急性血吸虫病等,鲜血便,下消化道出血,肛裂、痔疮、直肠息肉、直肠癌及结肠癌等,脓便及,脓血便,炎症，寄生虫感染,恶性肿瘤,细菌性痢疾、阿米巴痢疾、溃疡性结肠炎、局限性肠炎、肠结核、结肠癌或直肠癌和急性血吸虫病,柏油样便,上消化道出血,消化道溃疡等,粪便异常性状及可能原因,2,粪便性状,可能机制,常见原因,稀糊状样便,肠蠕动亢进或分泌物增多所致,各种因素引起的感染性或非感染性腹泻,米泔样便,霍乱弧菌外毒素刺激所致分泌性腹泻,霍乱、副霍乱患者,白陶土样便,胆道梗阻时，分泌到肠道的胆汁减少或缺如,阻塞性黄疸,胨状便,肠易激综合征腹部绞痛后排出,乳凝块状便,脂肪或酪蛋白消化不全,婴儿消化不良和腹泻,条状便,直肠狭窄,直肠癌,三、颜色,正常人粪便：,黄色或褐色,婴儿粪便：,黄绿色,病理情况：,粪便可不同的颜色改变,粪便异常颜色及可能的原因,颜色,食物或药物原因,病理原因,鲜红色,服用西红柿和西瓜,肠道下段出血，如痔疮、肛裂、直肠癌等,暗红色,食用大量咖啡、可可、,巧克力等,阿米巴痢疾、肠套叠等,灰白色,钡餐造影服用硫酸钡，,食入脂肪过量或金霉素,胆道梗阻、肠结核,绿色,食用大量绿色蔬菜或甘汞,乳儿肠炎因胆绿素来不及转变为粪胆素而呈绿色,黑色,食用铁剂、动物血、肝脏、活性炭及某些中药,上消化道出血,淡黄色,乳儿便、服用大黄、山道年,胆红素未氧化及脂肪不消化,四、气味,健康人粪便有一定臭味：,经细菌作用后，蛋白质分解产生吲哚、硫醇、粪臭素、硫化氢、靛基质等很多有臭味的物质,肉食者：,含大量蛋白质而使臭味强烈,素食者：,臭味相对较淡,慢性肠炎、胰腺疾病、消化道大出血、结肠或直肠溃烂：,多因未消化的蛋白质发生腐败而致粪便有,恶臭,脂肪及糖类消化或吸收不良：,由于脂肪酸分解及糖的发酵，可致粪便有,酸臭味,阿米巴肠炎：,粪便呈,鱼腥臭味,五、寄生虫,肉眼分辨的较大虫体：,蛔虫、蛲虫、猪肉绦虫、牛肉绦虫、阔头裂节绦虫等,将粪便过筛冲洗后：,可发现钩虫、鞭虫等细小虫体,服驱虫剂后：,查有无虫体,驱绦虫后：,寻找头节,主要肠道寄生虫形态,鞭形虫,鞭虫卵,鞭虫成虫,鞭虫卵呈纺锤形，大小约为5022,m，,黄褐色，卵壳较厚，两端各具一个透明的盖塞,。,虫卵自人体排出时，卵壳内细胞尚未分裂,主要肠道寄生虫形态,钩虫,钩虫卵,钩虫生活史,虫卵椭圆形，壳薄，无色透明。大小约为6040,m，,卵内细胞多为24个，卵壳与细胞间有明显的空隙,主要肠道寄生虫形态,蛲虫,蛲虫卵,蛲虫成虫,(,雌,),雌虫夜间在肛周皮肤上产卵，引起肛门皮肤及会阴部奇痒，患者用手搔抓后，虫卵附着在手上，如果不洗手就吃东西，虫卵即可被吞入肚子里，重新感染,隐血试验,（,occult blood test,OBT,）,隐血,消化道出血量少于,5ml,，肉眼及镜检不能发现大便内的血液,隐血试验,可以通过化学法或免疫学等方法来证实隐血的试验,第三节 粪便化学检验,检测方法,1,化学法,2,免疫法,【,检测原理,】,1,化学法,血红蛋白含有,类似过氧化物酶,的作用，催化供氢体，将供氢体中的氢转移给过氧化氢生成水，供氢体脱氢（氧化）后形成发色基团而呈色。呈色的深浅可反映血红蛋白量（出血量）的多少。,2,免疫法,免疫学法有三类抗体：,抗人血红蛋白抗体,抗人红细胞基质抗体,抗血液中其他成分如,1,-AT,、,Tf,、,Hb-Hp,抗人血红蛋白法和抗人红细胞基质法隐血试验,主要检测下消化道出血,约有,40,50%,的上消化道出血不能检出,红细胞或血红蛋白经消化酶降解变性失去免疫原性,;,大量出血使反应体系抗原过剩出现后带现象,抗,1-AT,、,Tf,、,Hb-Hp,等抗体的隐血实验,对所有消化道出血均呈阳性反应。,主要方法：,酶联免疫吸附法,胶体金法,免疫斑点法,胶乳凝聚法,反向间接血凝法等,对照线,检测线,阳性,对照线,阴性,无效,粪便隐血试验,-,胶体金法,失败,【,方法学评价,】,1.,化学法,优点：,操作简单易行，成本低廉，应用广泛。,缺点：,特异性差、灵敏度较低、影响因素多,易受试剂类型、粪便中血红蛋白的多少、过氧化氢的浓度及粪便放置时间、观察时间、血液在肠道中滞留时间、粪便取材的多少以及食物、服用药物等。,1,）假阳性,动物性食品,：,含有血红蛋白和肌红蛋白或其它酶类,大量生食蔬菜,：,含有的过氧化酶或触酶及某些肠道菌属,以及重金属离子的存在,2,）假阴性,：,服用大量维生素,C,或其他具有还原作用的药物,：,还原,H,2,O,2,，不能再氧化色原,血液在肠道停留过久：,细菌降解,Hb,2.,免疫学方法,优点：,快速方便、灵敏度高、特异性强。,HBG 0.2mg/L,或,0.03mg/g,粪便：阳性；,检测前不需控制饮食,动物,HBG 500mg/L,，,HRP 2000mg/L,：无干扰,缺点：,仍存在假阳性,(,高灵敏度引起,),与假阴性（带现象）,第四节 粪便显微镜检查,一、细胞,二、食物残渣,三、结晶,四、病原生物,最常用的方法：,生理盐水涂片法,镜检方法：,低倍镜浏览全片：注意观察有无寄生虫卵、原虫及其包囊等,高倍镜：寻找、观察和鉴定病理性成分的形态结构。要观察,10,个以上的高倍视野,粪便中镜检细胞报告方式,10,个以上高倍镜视野所见,报告方式,(/Hp),仅看到一个某种细胞,偶见,有时不见细胞，最多见到,2,3,个,0,3,最少可见,5,个细胞，最多,10,个,5,10,大多超过,10,个以上细胞,多数,细胞均匀布满视野不能计数,满视野,一、细胞,1,、白细胞,2,、红细胞,3,、吞噬细胞,4,、上皮细胞,1,、白细胞,正常粪便偶见：,主要是中性分叶核粒细胞。,肠道炎症：,增多，,15,个,/HP,，分散存在，数量与炎症轻重程度及部位相关。,小肠炎症：,白细胞均匀混合于粪便中，细胞形态难以辩认；,细菌性痢疾、阿米巴痢疾和溃疡性结肠炎：,大量成堆出现，伴脓细胞；,过敏性肠炎和肠道寄生虫感染：,较多的嗜酸性粒细胞，伴有夏科,-,莱登结晶。,WBC on stool smear,2,红细胞,正常粪便中不含红细胞,红细胞增加：,下消化道炎症或出血,溃疡性结肠炎、急性血吸虫病、结肠癌、直肠癌、直肠息肉、细菌性痢疾、阿米巴痢疾、痔疮出血及其它出血性疾病等,细菌性痢疾：,以白细胞为主，红细胞形态正常，常散在分布,阿米巴痢疾：,红细胞多于白细胞，且成堆出现伴形态破碎,炎症：,红细胞常伴白细胞出现,上消化道出血：,红细胞常被胃肠道中的消化液消化破坏，显微镜检查常阴性，可通过隐血试验证实,RBC on stool smear,3,吞噬细胞,细菌性痢疾：,常见较多的吞噬细胞,吞噬细胞可辅助诊断急性细菌性痢疾,急性出血性肠炎：,可见吞噬细胞,溃疡性结肠炎：,偶见吞噬细胞,phagocyte on stool smear,4,上皮细胞,正常粪便：,很难发现,结肠炎症：,上皮细胞数量增多,坏死性肠炎、霍乱、副霍乱、伪膜性肠炎等,epithelia on stool smear,二、食物残渣,正常情况：,仅见到无定形的细小颗粒残渣，偶见少量脂肪小滴和淀粉颗粒。,食物消化不完全时：,不同类型的食物残渣,1,淀粉颗粒,2,脂肪,3,肌肉纤维,4,结缔组织,5,植物纤维及细胞,1,淀粉颗粒,正常粪便中较少见,碳水化合物消化不良及腹泻：可大量出现，常伴较多的脂肪小滴和肌肉纤维,granule amylum on stool smear,2,脂肪,三种形式：中性脂肪、游离脂肪酸、结合脂肪酸,正常情况：粪便中很少见到,脂肪排泄增多：脂肪小滴,6,个,/HP,，常见腹泻,脂肪小滴大量存在：提示胰腺功能障碍：,急慢性胰腺炎、胰头癌、乳糜泻和吸收不良综合征等,游离脂肪酸增多：提示脂肪吸收障碍：,阻塞性黄疸,fattiness on stool smear,粪便残渣,脂肪球,呈大小不一圆形折光强的小球珠,淀粉颗粒,具有同心性纹或不规则放射线纹的大小不等的圆形、椭圆形或棱角状颗粒，无色，具有一定折光性,粪便中脂肪的检验和鉴别,检验项目,中性脂肪,游离脂肪酸,结合脂肪酸,镜下形态,无色、块状或淡黄色折光性强、大小不等小滴状,无色细长针状结晶或片状,块状或针束状,苏丹,染色,红色,片状染橘黄色，针状不染色,不染色,加热,熔化,熔化,不熔,乙醚,溶化,溶化,不溶,NaOH,不溶,溶化,不溶,冷乙醇,不溶，加温后溶,溶化,不溶,3,肌肉纤维,大量食肉后的粪便：少量肌肉纤维，,10,个,/,标准盖片,肌肉纤维增多：常见于腹泻、肠蠕动亢进或蛋白质消化不良,4,结缔组织,正常情况下结缔组织少见,结缔组织增多：胃蛋白酶缺乏或腹泻,connective tissue on stool smear,5,植物纤维及细胞,正常粪便中可少量出现,plan fibre and cell on stool smear,三、结晶,正常粪便：,可见到少量磷酸盐结晶、草酸钙结晶和碳酸钙结晶，一般没有临床意义,phosphatic crystal,on stool smear,calcium carbonate crystal on stool smear,calcium oxalate crystal,on stool smear,四、病原生物,1,、细菌,2,、寄生虫卵,3,、肠道原虫,4,、酵母菌,5,、霉菌,1,、,细菌,正常菌群与菌群失调,成人粪便：,主要菌群：大肠埃希氏菌、肠球菌和厌氧菌，约占,80%,少量菌群：产气杆菌、变形杆菌、芽胞菌及酵母菌等；,少部分：致病细菌,bacterium on stool smear,霍乱弧菌初筛：,米泔样粪便：生理盐水悬滴检查，加入霍乱弧菌抗血清，观察是否制动试验阳性,粪便粘液部分：涂片染色后，油镜观察。革兰阴性红色鱼群样排列，逗点状或香蕉样形态的弧菌，应及时报告并培养和鉴定,2,、寄生虫卵,正常人粪便没有虫卵,肠道寄生虫感染：,涂片中可出现相应的虫卵,粪便中常见的寄生虫卵：蛔虫卵、鞭虫卵、钩虫卵、蛲虫卵、血吸虫卵、肺吸虫卵、华枝睾吸虫卵、姜片虫卵、绦虫卵等,最少观察,10,个低倍视野，以低倍镜所见虫卵的最低和最高数值报告。,常用方法：,饱和盐水漂浮法、离心沉淀法、静置沉淀集卵法,3,、肠道原虫,常见感染,阿米巴原虫、蓝氏贾第鞭毛虫、隐孢子虫、人芽胞子虫等,肠道阿米巴,滋养体,大滋养体,20,40,m,大小，依靠伪足作一定方向移动，见于急性期患者的粪便或肠壁组织中，吞噬组织和红细胞，故又称组织型滋养体。小滋养体（肠腔型滋养体）,6,20,m,大小，伪足少,包囊,多见于隐性感染者及慢性患者粪便中，呈圆形、,5,20,m,大小，成熟包囊具有,4,个核，是溶组织阿米巴的感染型，具有传染性,溶组织阿米巴,新鲜粪便的脓血粘液部分,直接涂片检查滋养体,碘液染色检查包囊,Fig10-4-23,Entamoeba histolytica trophozoit cyst,on stool smear,蓝氏贾第鞭毛虫,旅游者、男性同性恋者、胃切除者、胃酸缺乏者和免疫功能低下者易感，可引起慢性腹泻。,Fig10-4-24,Giardia lamblia,on stool smear,隐孢子虫,条件感染性原虫,引起严重腹泻,儿童和免疫功能缺陷患者，尤其是艾滋病患者,列为艾滋病患者的重要检查项目之一,粪便常规直接涂片,金胺,-,酚,-,改良抗酸染色法,人芽胞子虫,寄生在高等灵长类动物和人类消化道的机会致病性寄生原虫,人芽胞子虫与白细胞及原虫包囊形态鉴别：,破坏试验：,用蒸馏水代替生理盐水涂片迅速镜检，人芽胞子虫遇水即破坏消失，而白细胞与原虫因不易破坏仍可看见,4,酵母菌,粪便中常可见到酵母菌，呈卵圆形，其排列因芽生增殖呈出芽或短链状,粪便中酵母菌与红细胞的区别,鉴别要点,酵母菌,红细胞,正常粪便,可有,没有,折光性,强,弱,形态,卵圆形，圆形，无凹面,双凹圆盘形,芽生现象,有,没有,碘染色,红色，完整,破坏,高渗环境,形态不变,皱缩,低渗环境,形态不变,膨胀,5,霉菌,正常粪便中少见，应排除容器污染或粪便在室温下显露过久污染所致。,常见应用大量抗菌素所致的肠道菌群失调，引起霉菌性二重感染。,mildew on stool smear,基层检验科微生物标本的处理,采血时机,在出现临床症状后应尽快抽血作培养，最好在,发热初期和高峰或寒战,时。,原则上应选择在,抗菌药物应用之前,，对已应用药物而病情不允许停药的患者也应,在下一次用药前采血,。,采血部位,通常采血部位为肘静脉。,疑似细菌性心内膜炎时，以肘动脉或股动脉采血为宜。,多次采血,时,应在,不同部位,进行。,不要从血管插管内采血。,切忌在静滴抗菌药物的静脉处采取,血标本。,采血次数与间隔,急性感染患者,：从两臂分别采2份血样。,感染性心内膜炎患者,:24,h,内采血3次,每次间隔不少于30分钟。,发热原因不明患者,:24-48,h,后可再采血2次,间隔不少于60分钟。,采血方法,采血部位的局部皮肤应严格消毒。将采集的血液注入血培养瓶前，应更换针头或过火消毒针头。,血培养瓶口也要消毒，并待酒精挥发后（建议用酒精灯烧灼瓶口）再注入血样,。,采血量,每次采血量成人510,ml，,婴幼儿12,ml，,培养基与血液之比以10：1为宜，以稀释血液中的抗生素。,每增加1,ml,血量平均提高阳性率3.2%。,抗凝剂,0.025-0.05%聚茴香脑磺酸钠(,sodium polyanethol sulfonate,SPS),。,SPS,具有抗凝抗吞噬抗补体及拮抗某些抗生素的作用。,培养条件,视患者的感染、用药情况选用不同的培养瓶。真菌培养可和普通培养共用一需氧瓶。,不需要每个血培养都作厌氧培养。若同一次抽血既做需氧也做厌氧，应先厌氧再需氧。,黄色,小儿瓶,蓝色,未用抗生素需氧,绿色,已用抗生素需氧,（,）,紫色,未用抗生素厌氧,橙色,已用抗生素厌氧,（,）,尿液标本,标本采集时间:,应在用药前或停药5天后留取标本,以晨起第一次尿为宜,使尿液在膀胱内停留6-8,h,以上(给细菌足够的繁殖时间),。,尿液标本采集方法,中段尿,：,女性采样前应先用肥皂水或0.1%高锰酸钾溶液冲洗外阴部及尿道口。,男性须翻转包皮冲洗，用0.1%新洁尔灭消毒尿道口，灭菌纱布擦干。,弃前段尿，无菌杯收集中段尿。,导尿管导尿,无菌操作进行导尿可减少尿道污染。,对留置导尿者，可用碘酒消毒尿道口处的导尿管壁，用联空针筒的细针斜穿管壁抽吸尿液；或拔去闭式引流的集尿袋，弃去导尿管前段尿液，留无污染的膀胱内尿液数毫升送检。,不可从集尿袋的下端管口留取标本。,长期留置导尿管者，应在更换新导尿管后留取尿标本,。,尿液标本采集方法,膀胱穿刺法:,是收集尿液的最好方法,尤其对厌氧菌检查,但由于是侵入损伤性操作,临床常少用,收集的标本可直接注入血培养瓶中。,肾盂尿采集法:,应请泌尿科医生采取,左右侧的标本要标明,收集的标本可直接注入血培养瓶中,。,尿液标本运送和保存,无菌杯立即送检,室温下尿标本担搁稍久可导致尿内细菌数量明显增加而影响病原菌与污染菌的区分和细菌定量。,不能立即送检者，可,暂存4冰箱,。,标本留取质量的好坏直接影响到对下呼吸道病原学的诊断。,标本留取不当会导致抗菌治疗失败,以及造成耐药菌的出现。,标本采集时间,痰液：以,晨痰,为好。多数患者晨痰较多，即使对痰量少的患者，也以清晨采集最为容易。对支气管扩张症或与支气管相通的肺空洞患者，清晨起床后进行体位引流，可采集大量痰液。最好在,应用抗菌药物之前或停药1天后,采集标本。,鼻咽拭子：应于抗菌药物治疗前采集为好。咽部又是呼吸和食物的通路，因此亦以,晨起后,采集为宜。,呼吸道标本,痰标本采集方法,自然,咳痰,：,清水反复漱口,后用力咳痰，从呼吸道深部咳出新鲜痰液于无菌容器送检。痰量极少者可用4510%氯化钠溶液雾化吸入导痰。,气管穿刺法,:适用于昏迷和咳嗽乏力患者。,纤维支气管镜抽取法,:适用于纤维支气管镜检查或治疗的患者。用纤维支气管镜可直接在病灶部位采集高浓度的感染病原菌，但不能完全避免咽喉部正常菌群感染。,小儿取痰法,：用弯压舌板向后压舌，用棉拭子伸入咽部，小儿因压舌刺激咳嗽时，可喷出肺部或气管分泌物粘在拭子上，从而获得标本。,痰标本运送和保存,从病人留痰后应在1,h,内送至实验室,不能及时送检者，可暂存4冰箱。室温下担搁数小时定植于口咽部的非致病菌呈过度生长而肺炎链球菌、葡萄球菌和流感嗜血杆菌检出率明显降低,未用运送培养基的标本送到实验室后应在30分钟内接种到相应培养基,粪便标本采集,应在发病早期并且尽量在用抗生素治疗前采集。,排便后，挑取有脓血、黏液部分的粪便,（,液状粪便则取絮状物），稀便不少于1,ml,，,固体便不少于1克，无便患者可用直肠拭子。,对不易获取粪便者或婴幼儿，可用肛拭采集。将拭子前端用无菌甘油水湿润。然后插入肛门约45,cm（,幼儿约23,cm）,处，轻轻旋转擦取直肠表面黏液后退出，置运送培养基内送检。,除婴儿和有活动性腹泻症状的患者外不推荐用拭子做常规病源检查,。,谢谢！,