中药的检查专题知识讲座.pptx

,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,#,中药的检查专题知识讲座,中药的检查专题知识讲座,第1页,中药检验,药材和饮片通常都检验什么？,中药制剂通常都检验什么？,中药检验与化药检验有何区分？,中药的检查专题知识讲座,第2页,中药材及其炮制品检验,普遍检验,杂质、水分、总灰分、酸不溶性灰分,一些检验,重金属、砷盐、干燥失重、炽灼残渣、溶剂残留、树脂残留,农药残留、黄曲霉素、二氧化硫、有害元素,特殊检验：西洋参,-,人参、大黄,-,土大黄苷、乌头,-,双酯型生物碱,中药的检查专题知识讲座,第3页,比较中药检验与化药检验有何异同？,杂质限量计算,普通杂质检验,特殊杂质检验,重金属,砷盐,铁盐,有害元素,干燥失重,水分,炽灼残渣,灰分,农药残留,黄曲霉素,二氧化硫,中药的检查专题知识讲座,第4页,杂质起源,一是由中药材原料中带入；,二是在生产制备过程中引入；,三是贮存过程中受外界条件影响，制,剂理化性质改变而产生。,中药的检查专题知识讲座,第5页,普通杂质检验方法,杂质检验法,水分,灰分测定法,铁盐,干燥失重,炽灼残渣,重金属,砷盐,树脂残留,农药残留,黄曲霉素,S0,2,有害元素,中药的检查专题知识讲座,第6页,杂质检验法,药材中混存杂质系指以下各类物质：,一、起源与要求相同，但其性状或部位与要求不符；,二、起源与要求不一样物质；,三、无机杂质，如砂石、泥块、尘土等。,中药的检查专题知识讲座,第7页,杂质检验法,检验方法,1.,取要求量供试品，摊开，用肉眼或放大镜（,5,10,倍）观察，将杂质拣出；如其中有能够筛分杂质，则经过适当筛，将杂质分出。,2.,将各类杂质分别称重，计算其在供试品中含量（,%,）。,中药的检查专题知识讲座,第8页,杂质检验法,【,注意,】,1.,药材中混存杂质如与正品相同，难以从外观判别时，可称取适量，进行显微、化学或物理判别试验，证实其为杂质后，计入杂质重量中。,2.,个体大药材，必要时可破开，检验有没有虫蛀、霉烂或变质情况。,3.,杂质检验所用供试品量，除另有要求外，按药材取样法称取。,中药的检查专题知识讲座,第9页,水分测定法,第一法,(,烘干法,),适合用于不含或少含挥发性成份药品。,第二法,(,甲苯法,),适合用于含挥发性成份药品。,第三法,(,减压干燥法,),适合用于含有挥发性成份珍贵药品。,第四法（气相色谱法）适合用于中药制剂中微量水分测定。,中药的检查专题知识讲座,第10页,甲苯法测定水分,A,为,500mL,短颈圆底烧瓶，,B,为水分测定管；,C,为直形冷凝管，外管长,40cm,。,使用前，全部仪器应清洁，,并置烘箱中烘干。,中药的检查专题知识讲座,第11页,甲苯法测定水分,取供试品适量（约相当于含水量,1,4ml,），精密称定，置,A,瓶中,加甲苯约,200ml,，必要时加入干燥、洁净沸石或玻璃珠数粒，将仪器各个别连接，自冷凝管顶端加入甲苯，至充满,B,管狭细个别。将,A,瓶置电热套中或用其它适宜方法缓缓加热,待甲苯开始沸腾时，调整温度，使每秒钟馏出,2,滴。待水分完全馏出，即测定管刻度个别水量不再增加时,将冷凝管内部先用甲苯冲洗,再用饱蘸甲苯长刷或其它适宜方法，将管壁上附着甲苯推下，继续蒸馏,5,分钟，放冷至室温，拆卸装置，如有水黏附在,B,管管壁上，可用蘸甲苯铜丝推下，放置，使水分与甲苯完全分离（可加亚甲蓝粉末少许，使水染成蓝色，方便分离观察）。检读水量，并计算供试品中含水量（,%,）。,中药的检查专题知识讲座,第12页,灰分测定法,总灰分,：中药经粉碎后加热，高温炽灼至灰化，总灰分,=,生理灰分,+,酸不溶性灰分,细胞组织及其内含物成为灰烬而残留，由此所得灰分为“,生理灰分,”。,酸不溶性灰分,：中药经高温炽灼得到总灰分加盐酸处理，得到不溶于盐酸灰分，称为酸不溶性灰分。,中药的检查专题知识讲座,第13页,总灰分测定法,称取供试品,2,3g,（如需测定酸不溶性灰分，可取供试品,3,5g,），置炽灼至恒重坩埚中，称定重量（准确至,0.01 g,），缓缓炽热，注意防止燃烧，至完全炭化时，逐步升高温度至,500,600,，使完全炭化并至恒重，依据残渣重量，计算供试品中总灰分含量（,%,）。,中药的检查专题知识讲座,第14页,酸不溶性灰分测定法,供试品先按总灰分测定方法测定其总灰分，然后取所得灰分，在坩埚中注意加入稀盐酸约,10ml,，用表面皿覆盖坩埚，置水浴上加热,10,分钟，表面皿用热水,5ml,冲洗，洗液并入坩埚中，用无灰滤纸滤过，坩埚内残渣用水洗于滤纸上，并洗涤至洗液不显氯化物反应为止。滤渣连同滤纸移至同一坩埚中，干燥，炽灼至恒重。依据残渣重量，计算供试品中含酸不溶性灰分含量（,%,）。,中药的检查专题知识讲座,第15页,灰分测定注意事项,1.,测定前先将供试品称取适量粉碎，使其能经过,2,号筛，将粉末混合均匀后再取样。,2.,如供试品不易灰化，可将坩埚放冷，加热水或,10%,硝酸铵溶液,2ml,；使残渣湿润，然后置水浴上蒸干，得到残渣再按上面所说方法炽灼至坩埚内容物完全灰化。,中药的检查专题知识讲座,第16页,重金属,第一法,第二法,第三法,第四法,化药常见哪个方法？,中药常见哪个方法？,中药的检查专题知识讲座,第17页,砷盐,古蔡氏法,Ag-DDC,法,原理、方法、注意事项,样品前处理,化药常见哪个方法？,中药常见哪个方法？,中药的检查专题知识讲座,第18页,有机破坏测砷盐,中药材、中药制剂和一些有机药品砷盐检出通常应先行有机破坏，因砷在分子中可能以有机状态结合，如不经破坏，则砷不易析出。,常见破坏方法有,酸破坏法（溴,-,稀硫酸破坏法、硫酸,-,过氧化氢破坏法）、,碱破坏法（氢氧化钙破坏法、无水碳酸钠破坏法、硝酸钠,-,无水碳酸钠破坏法）,直接炭化法等，以,氢氧化钙破坏法,较为常见。,中药的检查专题知识讲座,第19页,砷盐样品前处理,普通有机药品处理方法：,取一定量供试品，加入等量无砷,氢氧化钙,混匀后，加水湿润，烘干，在小火上小心炽灼（注意不使内容物溅出）至烟雾除尽，移入高温炉中，在,500-600,炽灼至灰化，砷成为非挥发性亚砷酸钙，取出放冷，加蒸馏水,5ml,，再缓缓加入盐酸及浓溴液数滴（不含硫检品可不加浓溴液），置水浴上加热至溶液中红色溴驱尽，滴加氯化亚锡试液数滴，再全部转入测砷瓶中，依法测定，做空白试验校正。,注意炽灼温度以,600,左右为宜，温度过高，,As,2,O,3,损失大，给检验带来误差；一定要灰化完全，若不完全，有游离碳存在，能使所显砷斑颜色较浅，且不规律。,中药的检查专题知识讲座,第20页,溶剂残留,树脂残留,农药残留,方法,色谱柱,检测器,限量,中药的检查专题知识讲座,第21页,树脂残留物,苯限量为,2ppm,，正己烷、甲基环己烷、甲苯、二甲苯、苯乙烯、二乙烯苯限量为,20ppm,。,GC,法；方法学验证：同溶剂残留,图,1,对照品溶液色谱图,1-,正己烷；,2-,苯；,3-,甲基环己烷；,4-,甲苯；,5-,二甲苯；,6-,苯乙烯；,7-,二乙烯苯,中药的检查专题知识讲座,第22页,检验农药残留量,必要性？,中药材有相当数量为人工栽培，为提升药材产量，降低昆虫、真菌和霉菌危害，在生产过程中常,喷洒农药,。另外，,土壤中残留,农药也可能引入药材中，致使中药材农药残留问题较为严重，而农药对人体危害极大，所以需对中药材及中药制剂进行农药残留量检验。,农药残留量检验,中药的检查专题知识讲座,第23页,常见农药种类,按化学结构分类：,有机氯类：,DDT,、六六六等；,有机磷类：,敌敌畏、乐果等；,苯氧羧酸类除草剂：,2,，,4D,；,2,，,4,，,5T,等；,氨基甲酸酯类：西维因（甲萘威）等；,二硫代氨基甲酸酯类：福美铁、福美锌等；,无机农药：磷化铝、砷酸钙等；,植物性农药：烟叶和尼古丁等；,其它：溴螨酯、氯化苦等。,其中有机氯和有机磷类农药是,长久残留,，故应测定其含量。,农药残留量检验,中药的检查专题知识讲座,第24页,1,、残留农药提取,提取溶剂：,有机氯类农药：常见正已烷（或石油醚）、,乙腈、丙酮,、苯等，混合溶剂常见正已烷,-,丙酮、乙腈,-,水等。,有机磷类农药：依据其极性采取对应极性溶剂进行提取。,提取方法：,索氏提取法；,振荡提取法。,农药残留量检验,中药的检查专题知识讲座,第25页,2,、样品纯化：,液,液分配,（,LLP,）：常见溶剂体系有二氯甲烷,丙酮,/,水、二氯甲烷,甲醇,/,水、乙腈,石油醚、乙腈,石油醚,/,水、二氯甲烷,乙腈,/,水等。,柱层析分离：常见吸附剂有弗罗里硅土（,Florisil,）、,Celite-Nuchar,、硅胶、氧化铝、活性炭等。,农药残留量检验,中药的检查专题知识讲座,第26页,3,、检测方法：,气相,色谱法。,层析柱：,毛细管柱,。,检测器：常见,电子捕捉,检测器。,固定液及其配比,有机氯农药：常见,DC-200,、,OV-17,、,QF-1,、,SE-30,、,OV-210,等。,有机磷农药：常见,10%DC-200,、,10%-200+15%QF-1,、,2%DEGS,等。,柱温：有机氯农药：普通使用,180-220,，视农药而异，其中以,200,最常见；,有机磷农药：测定对象不一样，柱温改变较大。,载气：氮气。,农药残留量检验,中药的检查专题知识讲座,第27页,难点提醒：,对中药进行农药残留量检验已成为必定，尤其是出口中药材及中药制剂必须进行该项检验。,农药残留量分析属微量分析，在对样品进行前处理时需尤其注意待测成份损失。,农药残留量检验,中药的检查专题知识讲座,第28页,黄曲霉毒素测定法,为何要测定？,方法,注意事项,中药的检查专题知识讲座,第29页,检验黄曲霉素必要性,中药材采集后干燥或贮存不妥，或在制备和加工过程中处理不善，可能污染在自然界普遍存在黄曲霉而产生黄曲霉毒素，黄曲霉毒素含有极强毒性和致癌性，故需对中药材及中药制剂中黄曲霉毒素含量进行控制。,中药的检查专题知识讲座,第30页,黄曲霉基础结构：,黄曲霉毒素是一类结构相同化合物，其基础结构都有二呋喃和香豆素。黄曲霉毒素在紫外线照射下，都能了出荧光，依据荧光颜色、,Rf,值及结构等不一样，分别命名为,B1,、,B2,、,G1,、,G2,、,M1,、,M2,、,P1,、,Q,等。,B1,B2,G1,中药的检查专题知识讲座,第31页,黄曲霉毒素测定法（,）,本法系用高效液相色谱法（附录,D,）测定药材、饮片及制剂中黄曲霉毒素（以黄曲霉毒素,B1,、,B2,、,G1,、,G2,总量计），除另有要求外，按以下方法测定。,要求：,B15g/kg,，,G2+G1+B2+B1,总量,10g/kg,。,陈皮、僵蚕、桃仁、胖大海、酸枣仁,中药的检查专题知识讲座,第32页,黄曲霉毒素测定法（,）,色谱条件与系统适用性试验,以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇,-,乙腈,-,水（,40,：,18,：,42,）为流动相，流速每分钟,0.8ml,；采取,柱后衍生法,检测，衍生溶液为,0.05%,碘溶液（取碘,0.5g,，加入甲醇,100ml,使溶解，用水稀释至,1000ml,制成），衍生化泵流速每分钟,0.3ml,，衍生化温度,70,；以,荧光检测器,检测，激发波长,ex=360nm,（或,365nm,），发射波长,em=450nm,。两个相邻色谱峰分离度应大于,1.5,。,中药的检查专题知识讲座,第33页,黄曲霉毒素测定法（,）,混合对照品溶液制备,精密量取黄曲霉毒素混合标准品（黄曲霉毒素,B1,、,B2,、,G1,、,G2,标示浓度分别为,1.0g/ml,、,0.3g/ml,、,1.0g/ml,、,0.3g/ml,）,0.5ml,，置,10ml,量瓶中，用甲醇稀释至刻度，作为贮备液。精密量取贮备液,1ml,，置,25ml,量瓶中，用甲醇稀释至刻度，即得。,中药的检查专题知识讲座,第34页,黄曲霉毒素测定法（,）,供试品溶液制备,取供试品粉末约,15g,（过二号筛），精密称定，加入氯化钠,3g,，置于均质瓶中，精密加入,70%,甲醇溶液,75ml,，高速搅拌,2,分钟（搅拌速度大于,11000,转,/,分钟），离心,5,分钟（离心速度,2500,转,/,分钟），精密量取上清液,15ml,，置,50ml,量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜（,0.45m,）滤过，量取续滤液,20.0ml,，经过,免疫亲合柱,（,AflaT-estP,）,流速每分钟,3ml,，用,水,20ml,洗脱，洗脱液弃去，使空气进入柱子，将水挤出柱子，再用适量,甲醇,洗脱，搜集洗脱液，置,2ml,量瓶中，并用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得。,中药的检查专题知识讲座,第35页,黄曲霉毒素测定法（,）,测定法,分别精密吸收上述混合对照品溶液,5l,、,10l,、,15l,、,20l,、,25l,，注入液相色谱仪，测定峰面积，以峰面积为纵坐标，进样量为横坐标，绘制标准曲线。另精密吸收上述供试品溶液,20-25l,，注入液相色谱仪，测定峰面积，从标准曲线上读出供试品中相当于黄曲霉毒素,B1,、黄曲霉毒素,B2,、黄曲霉毒素,G1,、黄曲霉毒素,G2,量，计算，即得。,中药的检查专题知识讲座,第36页,黄曲霉毒素测定法（,）,附注：,（,1,）本试验应用对应安全、防护办法，并不得污染环境。（,2,）残留有黄曲霉毒素废液或废渣玻璃器皿，应置于专用贮存容器（装有,10%,次氯酸钠溶液）内，浸泡,24,小时以上，再用清水将玻璃器皿冲洗洁净。,中药的检查专题知识讲座,第37页,中药的检查专题知识讲座,第38页,中药的检查专题知识讲座,第39页,二氧化硫残留量测定法,为何要测定？,方法,硫磺含有漂白、增艳、防虫等作用，一些中药材在加工过程中有用硫磺熏蒸习惯，残留,S0,2,可能影响人体健康。,版药典要求，中药材,不再允许使用,硫磺熏蒸，并要对其进行检测。,中药的检查专题知识讲座,第40页,二氧化硫残留量测定法（,）,A,为,1000ml,两颈圆底烧瓶；,B,为竖式回流冷凝管；,C,为（带刻度）分液漏斗；,D,为连接氮气流入口；,E,为二氧化硫气体导出口。,另配磁力搅拌器及电热套。,中药的检查专题知识讲座,第41页,取药材或饮片细粉约,10g,，精密称定，置两颈圆底烧瓶中，加水,300-400ml,和,6mol/L,盐酸溶液,10ml,，连接刻度分液漏斗，并导入氮气至瓶底，连接回流冷凝管，在冷凝管上端,E,口处连接导气管，将导气管插入,250ml,锥形瓶底部。锥形瓶内加水,125ml,和淀粉指示液,1ml,作为吸收液，置于磁力搅拌器上不停搅拌。加热两颈圆底烧瓶内溶液至沸，并保持微沸约,3,分钟后开始用碘滴定液（,0.01mol/L,）滴定，至蓝色或蓝紫色连续,20,秒钟不褪，并将滴定结果用空白试验校正。,中药的检查专题知识讲座,第42页,A,为供试品消耗碘滴定液体积，,ml,；,B,为空白消耗碘滴定液体积，,ml,；,C,为碘滴定液浓度，,0.01mol/L,；,W,为供试品重量，,g,；,0.032,为每,1ml,碘滴定液（,1mol/L,）相当二氧化硫质量，,g,。,供试品中二氧化硫残留量（,mg/g,）,=,中药的检查专题知识讲座,第43页,中药的检查专题知识讲座,第44页,中药的检查专题知识讲座,第45页,重金属及有害元素测定法,（,）,铅、镉、砷、汞,是当前世界公认对人体有害元素，国际上对此十分重视，很多国家对进口中药、中药制剂都有明确程度要求。一些国家对,铜,也有明确限定。,年版中国药典对上述,5,种有害元素建立了测定方法，要求,铅,5ppm,、镉,0.3ppm,、砷,2ppm,、汞,0.2ppm,，铜,20ppm,中药的检查专题知识讲座,第46页,重金属及有害元素测定法,（,）,6,种药材中需测定：,甘草、黄芪、西洋参、丹参、白芍、金银花、,测定方法：原子吸收分光光度法，电感耦合等离子体质谱法（,ICP-MS,）,中药的检查专题知识讲座,第47页,ICP-MS,特点,仪器结构,ICP,工作原理,样品前处理,分析方法,应用前景,中药的检查专题知识讲座,第48页,ICP-MS,电感耦合等离子体质谱：是以电感耦合等离子体（,ICP,）作为离子源，产生样品离子经质量分析器和检测器按质荷比（,m/z,）分离后，得到质谱图，用于元素和同位素分析一个新方法。,中药的检查专题知识讲座,第49页,ICP-MS,特点,更低检出限：,0.020.1ng/ml,非常宽线性范围：,89,个数量级,谱线简单、干扰少、精密度高,多元素同时定性、定量分析等特点,速度快：通常分析时间,1,5 min,可分析地球上几乎全部元素（,C,、,O,）。,中药的检查专题知识讲座,第50页,ICP-MS,仪器结构,等离子体离子源通常，液体样品经过蠕动泵引入到一个雾化器产生,气溶胶,。双通路雾室确保将气溶胶传输到,等离子体,。在一套形成等离子体同心石英管中通入氩气（,Ar,）。炬管安置在射频,(RF),线圈中心位置，,RF,能量在线圈上经过。强射频场使氩原子之间发生碰撞，产生一个高能等离子体。,样品气溶胶瞬间在等离子体中被解离,（等离子体温度大约为,6000-10000 K,），形成被分析原子，同时被电离。将等离子体中产生离子提取到高真空（普通为,10-4 Pa,）质谱仪个别。真空由差式抽真空系统维持：被分析离子经过一对接口（称作采样锥和截取锥）被提取。,中药的检查专题知识讲座,第51页,雾化系统,中药的检查专题知识讲座,第52页,等离子炬管,中药的检查专题知识讲座,第53页,取样锥,中药的检查专题知识讲座,第54页,离子透镜,中药的检查专题知识讲座,第55页,河水,ICP-MS,质谱图,中药的检查专题知识讲座,第56页,ICP-MS,样品前处理：微波消解、干法,分析方法：内标法、外标法,应用：,中药元素分析：有益微量元素、有害元素,元素形态分析：,中药的检查专题知识讲座,第57页,中药的检查专题知识讲座,第58页,西洋参中人参检验,取人参对照药材,1g,，依法制成对照药材溶液。照薄层色谱法试验，吸收西洋参供试品溶液和上述对照药材溶液各,2,m,l,分别点于同一硅胶,G,薄层板上，以氯仿,-,甲醇,-,水,(13,7,2)5,10,放置,12,小时下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以,10%,硫酸乙醇溶液，在,105,加热至斑点显色清楚，分别置日光及紫外灯,(365nm),下检视。供试品色谱中不得显与对照药材一致斑点。,中药的检查专题知识讲座,第59页,大黄流浸膏中土大黄苷检验,取本品适量，加甲醇,2 ml,，温浸,10,分钟，放冷，取上清液,10l,，点于滤纸上，以,45%,乙醇展开，取出，晾干，放置,10,分钟，置紫外灯（,365nm,）下检视，不得显持久亮紫色荧光。,中药的检查专题知识讲座,第60页,乌头酯型生物碱检验,（,1,）制川乌中酯型生物碱检验,比色法（,）,双酯型生物碱在碱性条件下与盐酸羟胺反应，生成,异羟肟酸,，再与三价铁离子反应，生成红色异羟肟酸铁，在,520nm,波优点有特征吸收，所以在此波优点测定其吸收，从而算出浓度而控制制川乌毒性成份含量。,？,中药的检查专题知识讲座,第61页,乌头酯型生物碱检验,（,2,）附子理中丸中乌头碱检验,薄层层析法（,）,以乌头碱为对照品，采取薄层层析法对含乌头制剂进行薄层层析，经过比较样品中与乌头碱对照品色谱对应位置上出现斑点大小及有没有进行检验。,？,中药的检查专题知识讲座,第62页,中药的检查专题知识讲座,第63页,