酶制剂发酵工艺专家讲座.pptx

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,*,酶制剂发展概况,1894年，美籍日人高峰让吉首先从米曲霉中制备得到高峰淀粉酶（-淀粉酶、他卡酶），用作消化剂，开创了近代酶生产和应用先例。,1908年，德国罗姆（Rohm）用动物胰脏制得胰酶，用于皮革软化。,1908年，法国波伊定（Boidin）制备得到细菌淀粉酶，用于纺织品退浆；,1911年，华勒斯坦（Wallerstein）从木瓜中取得木瓜蛋白酶，用于啤酒澄清。,1949年，日本开始采取微生物液体深层培养方法进行细菌-淀粉酶发酵生产，揭开了当代酶制剂工业序幕。,20世纪80年代发展起来动、植物细胞培养技术，继微生物发酵生产酶之后，已成为酶生产又一个路径。,酶制剂发酵工艺专家讲座,第1页,第一节 酶生产方法,一、酶生产方法,1、提取法,直接从动、植物细胞或组织中将酶提取出来。提取法虽简单易行，但受原材料起源限制。,2、化学合成法,是20世纪60年代中期出现新技术。,只能合成那些已知化学结构酶；成本比较高。,当前依然停留在试验室内合成阶段。,牛胃凝乳酶,胰脏胰酶,血液凝血酶,木瓜木瓜蛋白酶,3、微生物发酵法,是20世纪50年代以来生产酶主要方法。,利用微生物细胞生命活动合成所需酶方法称为发酵法。,酶发酵生产是现在酶生产主要方法。,酶制剂发酵工艺专家讲座,第2页,二、应用微生物来开发酶优点,微生物,酶,微生物种类繁多，制备出,酶种类齐全，几乎全部,酶都能从微生物中得到,微生物繁殖快、生产周期,短、培养简便，并能够经过,控制培养条件来提升酶产量,微生物含有较强适应性和,应变能力，能够经过适应、诱,导、诱变以及基因工程等方法,培育出新产酶高菌株,酶制剂发酵工艺专家讲座,第3页,三、酶发酵生产类型,1、液体深层发酵：,液体培养基，经灭菌、冷却后，接入产酶细胞，在一定条件下发酵。,2、固体培养发酵,培养基以麸皮、米糠等为主要原料，经灭菌后，接入产酶菌株，在一定条件下发酵。,3、固定化细胞发酵（70年代后期发展）,将细胞固定在载体上后，进行发酵生产。,4、固定化原生质体发酵（80年代中期发展）,原生质体是指除去了细胞壁微生物细胞或植物细胞。,酶制剂发酵工艺专家讲座,第4页,第二节 酶生物合成基本理论,一、酶生物合成过程,DNA,RNA,蛋白质（新生多肽链）,成熟蛋白质（酶）,胞内,胞外,转录,翻译,加工,分泌或定位,酶制剂发酵工艺专家讲座,第5页,二、酶生物合成调整,按酶生物合成速度把细胞中合成酶分为两类：,组成酶,恒定（速度、浓度）,诱导酶,在外界环境原因诱导下合成速度急增，酶浓度成百上千倍增加,(适应型酶、调整型酶),酶制剂发酵工艺专家讲座,第6页,酶合成基因调控类型：,诱导,和,阻遏,1、酶合成诱导作用,加进一些物质，使酶生物合成开始或加速现象，称为诱导作用。,诱导物普通是酶催化作用底物或其底物类似物。,例：乳糖诱导-半乳糖苷酶合成,淀粉诱导a-淀粉酶合成,酶制剂发酵工艺专家讲座,第7页,酶制剂发酵工艺专家讲座,第8页,2、酶合成阻遏,（1）终产物阻遏,指酶催化反应产物或代谢路径末端产物使该酶生物合成受到阻遏现象。,（2）分解代谢物阻遏（营养源阻遏）,是指一些物质经过分解代谢产生物质阻遏其它酶合成现象。,葡萄糖阻遏-半乳糖苷酶生物合成,果糖阻遏a-淀粉酶生物合成,A,1,B,1,A,2,B,2,E,A,B,E,色氨酸过量时会阻遏催化色氨酸合成相关酶,酶制剂发酵工艺专家讲座,第9页,酶制剂发酵工艺专家讲座,第10页,第三节 微生物发酵产酶工艺条件及控制,发酵法生产酶制剂，就是给酶生产菌种,提供适当营养和生长环境,，使生产菌,大量增殖,，同时,合成所需要酶,，然后由发酵所得物料制成酶产品。,当代酶制剂大规模生产以,深层液体发酵法,为主。,不论哪种发酵法，都要做三方面工作：,（,1,）从原料准备培养基；,（,2,）从原始菌种准备生产菌种；,（,3,）发酵过程管理。,一、发酵产酶普通工艺流程,酶制剂发酵工艺专家讲座,第11页,原 料 原始菌种 麸皮等原料,饼粕等原料 淀粉质原料 试管斜面培养(,活化,)配制培养基,(灭菌),按不一样原料 净化、粉碎 摇瓶等分级扩大培养,作不一样处理,水解 种子罐培养,淀粉糖液 发酵罐(液体发酵)发酵池(固体发酵),培养,配制培养基,(灭菌)发酵液 成品曲,下游加工,液态酶制剂,固体粗酶制剂,各种精制酶制剂,酶发酵生产普通工艺流程图,酶制剂发酵工艺专家讲座,第12页,保藏菌种,试管斜面培养（活化）,摇瓶扩大培养,种子罐培养,发酵罐,分离纯化,酶,培养基,无菌空气,酶制剂发酵工艺专家讲座,第13页,二、酶生产菌种,（一）产酶菌种要求,（1）产酶量高；,（2）繁殖快，发酵周期短；,（3）产酶稳定性好，不易退化，不易被感染；,（4）能够利用廉价原料，轻易培养和管理；,（5）安全性可靠，非致病菌,。,酶制剂发酵工艺专家讲座,第14页,（二）惯用产酶微生物,1、细菌,大肠杆菌,谷氨酸脱羧酶、天冬氨酸酶、青霉素酰化酶、天冬酰胺酶、,-半乳糖苷酶、限制性核酸内切酶、DNA聚合酶、DNA连接酶、核酸外切酶等。,枯草杆菌,-淀粉酶、蛋白酶、-葡聚糖酶、5-核苷酸酶、碱性磷酸酶。,酶制剂发酵工艺专家讲座,第15页,2、放线菌,链霉菌：葡萄糖异构酶、青霉素酰化酶、纤维素酶、碱性蛋白酶、中性蛋白酶、几丁质酶等。,酶制剂发酵工艺专家讲座,第16页,3、霉菌,黑曲霉：糖化酶、,-淀粉酶、酸性蛋白酶、果胶酶、葡萄糖氧化酶、过氧化氢酶、核糖核酸酶、橙皮苷酶等。,米曲霉：氨基酰化酶、磷酸二酯酶、果胶酶等。,红曲霉：,-淀粉酶、糖化酶、麦芽糖酶、蛋白酶等。,青霉：葡萄糖氧化酶、苯氧甲基青霉素酰化酶、纤维素酶等。,木霉：纤维素酶。,根霉：糖化酶、蔗糖酶、碱性蛋白酶，脂肪酶、果胶酶、纤维素酶、半纤维素酶等。,毛霉：蛋白酶、糖化酶、-淀粉酶、脂肪酶、果胶酶、,凝乳酶等。,酶制剂发酵工艺专家讲座,第17页,4、酵母,啤酒酵母,：丙酮酸脱羧酶、醇脱氢酶等。,假丝酵母：,脂肪酶、尿酸酶、尿囊酸酶、转化酶、醇脱氢酶等。,酶制剂发酵工艺专家讲座,第18页,工业规模应用微生物酶和它们一些起源,酶,产酶微生物,用途,-淀粉酶,枯草芽胞杆菌,地衣芽胞杆菌,米曲霉,淀粉液化，织物退浆，消化助剂，加酶洗涤剂,葡萄糖淀粉酶,米曲霉，黑曲霉，米根霉,制造葡萄糖，发酵、酿酒等工业淀粉水解糖,中性蛋白酶,枯草芽胞杆菌，米曲霉,皮革、毛皮加工，食品加工，调味品制造、助消化、消炎、啤酒澄清,碱性蛋白酶,地衣芽胞杆菌,加酶洗涤剂,植酸酶,黑曲霉，毕赤酵母工程菌株,饲料添加剂,酶制剂发酵工艺专家讲座,第19页,纤维素酶,里氏木霉、黑曲霉,水洗布生产，饲料添加剂，消化植物细胞壁,半纤维素酶,木霉、曲霉、根霉,饲料添加剂，消化植物细胞壁，低聚木糖生产,-葡聚糖酶,枯草芽胞杆菌，黑曲霉，,Penicillium emersonii,啤酒酿造，饲料添加剂,异淀粉酶,产气克雷伯氏菌，芽孢杆菌,淀粉加工,乳糖酶,乳酸酵母，米曲霉，黑曲霉，米根霉,乳品工业（处理牛乳和乳清）,果胶酶,曲霉、欧文氏菌,水果加工，果汁、果酒澄清，麻类纤维脱胶,工业规模应用微生物酶和它们一些起源,酶制剂发酵工艺专家讲座,第20页,转化酶,啤酒酵母、假丝酵母,制造转化糖,凝乳酶,米赫毛霉,大肠杆菌和真菌生产重组酶,制造乳酪,脂肪酶,曲霉、根霉、酵母等,加酶洗涤剂，油脂加工，生物化工,葡萄糖氧化酶,青霉、曲霉,食品去氧、除葡萄糖，测定葡萄糖,葡萄糖异构酶,凝结芽胞杆菌，白色链霉菌,生产果葡糖浆,青霉素酰化酶,细菌、霉菌、放线菌,制造6-氨基青霉烷酸,工业规模应用微生物酶和它们一些起源,酶制剂发酵工艺专家讲座,第21页,（三）生产菌种起源,1、买，专利,向菌种保藏机构索取相关菌株，从中筛选所需菌株。,中国工业微生物菌种保藏中心（CICC）；,中国经典培养物保藏中心（CCTCC，又称武大保藏中心）。,中国农业微生物菌种保藏中心（ACCC）；,中国普通微生物菌种保藏管理中心（CGMCC）,美国经典微生物菌种保藏中心（ATCC）,荷兰微生物菌种保藏中心（CBS）,德国微生物菌种保藏中心（DSMZ）,英国国家经典菌种保藏所（NCTC）,酶制剂发酵工艺专家讲座,第22页,（1）样品采集：主要是各种富含所需微生物土壤、水、气、枯枝烂叶、烂水果等；,产酶菌种筛选步骤：,2、筛选,由自然界采集样品，如土壤、水、动植物体等，从中进行分离筛选。,酶制剂发酵工艺专家讲座,第23页,（2）初筛：分离产目标酶菌株；,给予特殊培养基或培养条件，进而让目标菌株得以繁殖，尽可能地把只成为目标菌菌株分离出来。,-淀粉酶筛选,蛋白,酶筛选,酶制剂发酵工艺专家讲座,第24页,（3）复筛：从所得菌株中筛选优良株；,在初筛基础上，筛选产酶量高、性能更符合生产要求菌种。,诱变育种,细胞杂交,原生质体融合育种,基因工程育种,（4）高产菌株选育。,酶制剂发酵工艺专家讲座,第25页,（四）生产种子制备,生产种子：,由原始保藏菌种，经过,活化,，,扩大培养,，用于发酵罐接种大量菌体。,1、种子制备工艺过程,保藏菌种,活化培养,逐层摇瓶培养,种子罐培养,接种至发酵罐,酶制剂发酵工艺专家讲座,第26页,（1）菌种活化,目标：,保藏菌种在用于发酵生产之前，必须接种于新鲜斜面培养基上，在一定条件下培养，以,恢复细胞生命活动能力,。,方法：在试管斜面上培养1-3代。,（2）扩大培养,目标：,活化后菌种经过一级至数级扩大培养，以取得,足够数量,优质,细胞。,培养基称为种子培养基。,方法：分为试验室培养和车间培养两个阶段。,酶制剂发酵工艺专家讲座,第27页,扩大培养应注意事项：,（1）尽可能,降低传代次数,，以降低菌种衰退和污染可能性；,（2）培养基成份普通应比发酵培养基,氮源,丰富；,（3）培养时间普通控制在微生物生长,对数生长久,，及时接入下一级培养或发酵罐；,（4）严格控制,培养条件,（pH、温度、通气量等），加强培养过程实时监测。,酶制剂发酵工艺专家讲座,第28页,三、培养基,1、碳源,：,提供碳元素；能源。,碳源,、,氮源,、,无机盐,、,生长原因,、,水,等。,起源：淀粉及其水解物淀粉水解糖、糖蜜、或含淀粉原料如大米、薯类、玉米、麸皮、米糠等。,另外石油产品中12碳16碳碳氢化合物已成功用作微生物培养基碳源。,注意,：在选择碳源时，应尽可能选择对所需酶有诱导作用碳源，而不使用或少使用有分解代谢物阻遏作用碳源。,培养基,是人工配制供微生物生长、繁殖及合成酶营养物质混合物。,酶制剂发酵工艺专家讲座,第29页,2、氮源：,提供氮元素。,起源：有机氮：常利用农副产品籽实榨油后副产品，如豆饼、花生饼、菜子饼等；,无机氮：含氮无机化合物，如（NH,4,）,2,SO4、NH,4,NO,3,、NaNO,3,和（NH,4,）,3,PO,4,等。,3、无机盐：,大量元素和微量元素,。,基本功效：组成细胞成份；,组成酶产品组分；,作为酶激活剂。,酶制剂发酵工艺专家讲座,第30页,4、生长因子,指微生物生长繁殖所必不可缺微量有机物，主要包含各种氨基酸、嘌呤或嘧啶、维生素等三类物质。,酶制剂中所用生长因子，大多是由天然原料提供，如玉米浆、麦芽汁、豆芽汁、麸皮、米糠、酵母膏等。,5、水,酶制剂发酵工艺专家讲座,第31页,配制培养基注意事项,：,（1）培养基,碳氮比,是培养基成份配比重点；,（2）碳源和氮源选择，要注意防止,碳分解代谢阻遏,和,氮分解代谢阻遏,；,（3）培养基中无机盐选择要注意盐类引发,生理酸碱性反应,；,（4）发酵生产所用培养基成份配比,不可轻易改变,。,酶制剂发酵工艺专家讲座,第32页,（二）培养基种类,1、斜面培养基：,是供菌种生长繁殖使用。,2、种子培养基：,是供菌种生长繁殖使用。,3、发酵培养：,是供菌种生长繁殖和发酵产物合成之用。,酶制剂发酵工艺专家讲座,第33页,酶制剂发酵工艺专家讲座,第34页,四、发酵条件控制,影响产酶几个主要条件,1、温度调整控制,（2）有些微生物,生长最适温度,与,发酵产酶最适温度,有所不一样。,例：酱油曲霉生产蛋白酶，28时蛋白酶产量比在40 条件下高24倍，在20条件下发酵，则蛋白酶产量更高，但细胞生长速率较慢。,为此,，在有些酶发酵生产过程中，,要在不一样发酵阶段控制不一样温度,，即在微生物生长阶段控制在生长最适温度范围，而在产酶阶段控制在产酶最适温度范围。,（1）不一样微生物有不一样最适生长温度。,酶制剂发酵工艺专家讲座,第35页,（3）温度控制方法,普通采取热水升温，冷水降温。所以，在发酵罐中均设有足够传热面积热交换装置，如排管、蛇管，夹套、喷淋管等。,酶制剂发酵工艺专家讲座,第36页,酶制剂发酵工艺专家讲座,第37页,2、pH值调整控制,（1）不一样微生物，其生长繁殖最适pH值有所不一样。,（2）微生物生长最适pH值与产酶最适pH值往往不一样。,（3）有些微生物能够同时产生若干种酶，在生产过程中，经过控制培养基pH，往往能够改变各种酶之间产量百分比。,黑曲霉,-淀粉酶 糖化酶,pH值中性,pH值偏酸性 ,酶制剂发酵工艺专家讲座,第38页,（4）影响pH值原因,普通来说，培养基成份中,C/N比高,，发酵液倾向于,酸性,，pH低；,C/N比低,，发酵液倾向于,碱性,，pH高。,不一样盐利用对pH也会产生影响。,（5）生产中控制pH值方法,添加,缓冲液,维持一定pH值（如磷酸盐）；,调整培养基,原始pH,，保持一定,C/N比,；,发酵液中pH过高，加,糖或淀粉,来调整。反之，加,尿素或液氨,；,pH值还与通气量相关。,经过调整,通气量,来实现；,加,酸,、,碱,。,酶制剂发酵工艺专家讲座,第39页,3、溶解氧调整控制,溶解氧,指溶解在培养基中氧。微生物普通只能利用溶解氧。,调整溶氧速率方法,（1）调整通气量；,（2）调整氧分压；,（3）调整气液接触时间；,（4）调整气液接触面积；,（5）改变培养液性质。,酶制剂发酵工艺专家讲座,第40页,酶制剂发酵工艺专家讲座,第41页,酶制剂发酵工艺专家讲座,第42页,5、湿度调整控制,用固体培养基生产酶制剂时，普通前期湿度低些，培养后期湿度大些，有利于产酶。,4、泡沫,形成：,通气搅拌、培养基中一些成份改变、代谢产生气体。,危害：,妨碍CO,2,排除，影响氧溶解；引发染菌。,消泡方法：,机械消泡、化学消泡。,酶制剂发酵工艺专家讲座,第43页,五、提升酶产量办法,（一）添加诱导物,诱导酶发酵生产，添加酶合成诱导物，能够显著提升酶产量。,1、不一样酶有各自不一样诱导物；但有时一个诱导物可诱导生成同一酶系若干种酶；同一个酶往往有各种诱导物。,3、诱导物浓度：,必须控制在适当浓度。,2、诱导物分类,（1）酶作用底物；,（2）酶作用底物类似物；,（3）酶反应产物；,（4）底物和底物类似物前体物。,酶制剂发酵工艺专家讲座,第44页,（二）控制阻遏物浓度,1、解除终产物阻遏方法,降低培养基中酶作用产物浓度；,添加终产物类似物。,2、解除分解代谢产物阻遏方法,控制培养基中葡萄糖等轻易利用碳源浓度，可采取其它较难利用碳源（如淀粉等），或采取补料，分次流加碳源等方法，以控制碳源浓度在较低水平，以利于酶产量提升；,添加一定量环腺苷酸（cAMP），能够解除分解代谢物阻遏作用。,酶制剂发酵工艺专家讲座,第45页,（三）经过基因突变提升酶产量,使诱导型变成组成型；,使阻遏型变成去阻遏型。,（四）其它提升酶产量方法,1、添加细胞渗漏增强物：,如吐温（Tween）、催通（Triton）等。,在培养基中添加1%吐温（Tween），可使纤维素酶产量提升1020倍。,酶制剂发酵工艺专家讲座,第46页,2、其它产酶促进剂,植酸钙 ：,霉菌蛋白酶或橘青磷酸二酯酶 120倍,聚乙烯醇 衍生物 ：,可预防霉菌菌丝结球，提升糖化酶产量,聚乙烯醇、醋酸钠等 ：,纤维素酶,这些物质实际效果显著，但作用机制还需深入探讨。,酶制剂发酵工艺专家讲座,第47页,第四节 酶分离纯化,一、酶提取、分离纯化技术路线,细胞破碎,酶提取,酶分离纯化,酶浓缩,酶贮存,动物、植物或微生物细胞,发酵液,离心分离，过滤分离，沉淀分离，层析分离，电泳分离，萃取分离，结晶分离等。,酶制剂发酵工艺专家讲座,第48页,1、细胞破碎,许多酶存在于细胞内。为了提取这些胞内酶，首先需要对细胞进行破碎处理。,1）机械破碎,2）物理破碎,3）化学破碎,4）酶解破碎,JY92-II D超声波,细胞粉碎机,细胞破碎珠,高压细胞破碎机,DY89-I型 电动玻璃匀浆机,酶制剂发酵工艺专家讲座,第49页,酶提取是指在一定条件下，用适当溶剂或溶液处理含酶原料，使酶充分溶解到溶剂或溶液中过程。也称为酶抽提。,酶提取时首先应依据,酶结构和溶解性质，选择适当溶剂,。普通说来，极性物质易溶于极性溶剂中，非极性物质易溶于非极性有机溶剂中，酸性物质易溶于碱性溶剂中，碱性物质易溶于酸性溶剂中。,酶都能溶解于水，通常可用,水或稀酸、稀碱、稀盐溶液等进行提取,，有些酶与脂质结合或含有较多非极性基团，则可用有机溶剂提取。,2、酶提取,提升温度，降低溶液粘度、增加扩散面积、縮短扩散距离，增大浓度差等都有利于提升酶分子扩散速度，从而增大提取效果。,为了提升酶提取率并预防酶变性失活，在提取过程中还要注意控制好温度、pH值等提取条件。,酶制剂发酵工艺专家讲座,第50页,酶主要提取方法,提取方法,使用溶剂或溶液,提取对象,盐溶液提取,0.020.5mol/L盐溶液,用于提取在低浓度盐溶液中溶解度较大酶,酸溶液提取,PH26水溶液,用于提取在稀酸溶液中溶解度大，且稳定性很好酶,碱溶液提取,PH812水溶液,用于提取在稀碱溶液中溶解度大且稳定性很好酶,有机溶剂提取,可与水混溶有机溶剂,用于提取那些与脂质结合牢靠或含有较多非极性基团酶,大多数蛋白类酶都溶于水，而且在低浓度盐存在条件下，酶溶解度随盐浓度升高而增加，这称为,盐溶现象,。,酶制剂发酵工艺专家讲座,第51页,（1）沉淀分离,沉淀分离是经过改变一些条件或添加某种物质，使酶,溶解度降低,，而从溶液中沉淀析出，与其它溶质分离技术过程。,沉淀分离方法,分离原理,盐析沉淀法,利用不一样蛋白质在不一样盐浓度条件下溶解度不一样特征，经过在酶液中添加一定浓度中性盐，使酶或杂质从溶液中析出沉淀，从而使酶与杂质分离,等电点沉淀法,利用两性电解质在等电点时溶解度最低，以及不一样两性电解质有不一样等电点这一特征，经过调整溶液pH值，使酶或杂质沉淀析出，从而使酶与杂质分离,有机溶剂沉淀法,利用酶与其它杂质在有机溶剂中溶解度不一样，经过添加一定量某种有机溶剂，使酶或杂质沉淀析出，从而使酶与杂质分离,复合沉淀法,在酶液中加入一些物质，使它与酶形成复合物而沉淀下来，从而使酶与杂质分离,选择性变性沉淀法,选择一定条件使酶液中存在一些杂质变性沉淀，而不影响所需酶，从而使酶与杂质分离,酶制剂发酵工艺专家讲座,第52页,盐析,在盐浓度到达某一界限后，酶溶解度随盐浓度升高而降低，这称为,盐析现象,。,酶制剂发酵工艺专家讲座,第53页,有机溶剂之所以能使酶沉淀析出。主要是因为有机溶剂存在会使溶液介电常数降低。比如，20时水介电常数为80，而82乙醇水溶液介电常数为40。,溶液介电常数降低，就使溶质分子间静电引力增大，相互吸引而易于凝集，同时，对于含有水膜分子来说，有机溶剂与水相互作用，使溶质分子表面水膜破坏，也使其溶解度降低而沉淀析出。,惯用于酶沉淀分离有机溶剂有乙醇、丙酮、异丙醇、甲醇等,有机溶剂沉淀法,酶制剂发酵工艺专家讲座,第54页,（2）过滤与膜分离,过滤是借助于,过滤介质,将不一样大小、不一样形状物质分离技术过程。,过滤介质各种多样，惯用有滤纸、滤布、纤维、多孔陶瓷、烧结金属和各种高分子膜等，能够依据需要选取。,过滤,非膜过滤：采取高分子膜以外物质作为过滤介质,膜过滤：采取各种高分子膜为过滤介质,酶制剂发酵工艺专家讲座,第55页,过滤分类及其特征,(,依据过滤介质截留物质颗粒大小不一样,),类别,截留颗粒大小,截留主要物质,过滤介质,粗滤,2m,酵母、霉菌、动物细胞、植物细胞、固形物等,滤纸、滤布、纤维多孔陶瓷、烧结金属等,微滤,0.22m,细菌、灰尘等,微滤膜、微孔陶瓷,超滤,200.2m,病毒、生物大分子等,超滤膜,反渗透,20,生物小分子、盐、离子,反渗透膜,酶制剂发酵工艺专家讲座,第56页,微滤,0.110,m,：,细菌、煤灰、发酵细胞、颜料、蛋白等,超滤,0.005,0.1,m,：,蛋白、颜料、多糖、大分子,纳滤,0.00050.005m,：,低聚糖、染料、多价离子,反渗透,0.00010.001m,：,电解质、大于100Da有机溶质,水、小于100Da有机溶质,膜适用范围,酶制剂发酵工艺专家讲座,第57页,（3）酶浓缩、干燥与结晶,浓缩与干燥都是酶与溶剂（通常是水）分离过程。在酶分离纯化过程中是一个主要步骤。,离心分离、过滤与膜分离、沉淀分离、层析分离等都能起到浓缩作用。用各种吸水剂，如硅胶、聚乙二醇、干燥凝胶等吸去水分，也能够到达浓缩效果。,蒸发浓缩是经过加热或者减压方法使溶液中部分溶剂汽化蒸发，使溶液得以浓缩过程。因为酶在高温条件下不稳定，轻易变性失活，故酶液浓缩通常采取,真空浓缩,。即在一定真空条件下，使酶液在60以下进行浓缩。,酶制剂发酵工艺专家讲座,第58页,在固体酶制剂生产过程中，为了提升酶稳定性，便于保留、运输和使用，普通都必须进行干燥。惯用干燥方法有：,真空干燥,冷冻干燥,喷雾干燥,气流干燥,吸附干燥,酶制剂发酵工艺专家讲座,第59页,