临床微生物质谱鉴定技术及其应用初探.ppt

检验科检验科 微生物室微生物室现代感染性疾病和临床微生物检测现状现代感染性疾病和临床微生物检测现状耐药耐药菌株菌株增多增多疑难疑难菌株菌株增多增多现代感现代感染性疾染性疾病新特病新特点点条件致条件致病菌增病菌增多多人员人员少、少、鉴定鉴定速度速度较慢较慢感染感染菌种菌种类增类增多多临床微生物当前现状病原病原生长时间生长时间报告时间报告时间需氧菌需氧菌24h3-4个工作日个工作日厌氧菌厌氧菌48h酵母菌酵母菌2-5天天5-7个工作日个工作日丝状真菌丝状真菌2-5天天 第一天 第二天 第三-四天分纯分纯培养培养常规微生物检验遇到的困惑：呼吸道、肠道标本的细菌种类繁多，常规的鉴定成本高或者操作麻烦，容易漏掉或者忽视某些细菌。厌氧菌、弯曲菌、分枝杆菌和真菌：培养的难点，鉴定的死角，技术上不好掌握或者成本高、时间长，难以实施。血培养的分级报告制度：存在很多变数，使得初次报告的结果可靠性得不到临床的认可。（比如：直接革比如：直接革兰染色涂片，初步能估染色涂片，初步能估计细菌大菌大类，但是无法确切到种。比如：，但是无法确切到种。比如：L型菌无法确定其革兰染色性。型菌无法确定其革兰染色性。）操作方便的，成本便宜的。不仅是实验室要求的，更是临床迫切需要的。将实验室人员从一些技术要求较低的、能由仪器完成的工作中解脱出来，提高标本处理效率，缩短报告时间。临床微生物实验室自动化 MALDI-TOF革命性基质辅助激光解吸电离-飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)MALDI-TOF MS蛋白蛋白质质指指纹纹特征特征梅里埃梅里埃VITEK MS的数据库包含的数据库包含IVD1046种菌和种菌和RUO1500种菌的图谱。种菌的图谱。挑取部分菌落点样至靶板生成图谱搜库鉴定质谱检测流程质谱检测流程MALDI TOF检测加基质液 质谱作为一项细菌鉴定领域的革新技术，与质谱作为一项细菌鉴定领域的革新技术，与现有传统的鉴定诊断技术相比，具有操作简单、现有传统的鉴定诊断技术相比，具有操作简单、快速、通量高、灵敏度高、准确度好、试剂耗品快速、通量高、灵敏度高、准确度好、试剂耗品非常经济等优势。非常经济等优势。准确度准确度时间（包括操作）时间（包括操作）成本成本MALDI-TOF技技术90%20min20元常规方法80%2448h50元 缩短了常规微生物培养鉴定时间。运用质谱缩短了常规微生物培养鉴定时间。运用质谱检测技术则可缩短至少检测技术则可缩短至少1 1天的鉴定时间，为临天的鉴定时间，为临床救治危急重症患者赢得更多时间。而有研床救治危急重症患者赢得更多时间。而有研究证实，在重症监护室（究证实，在重症监护室（ICUICU）临床治疗中，）临床治疗中，抗生素如果晚一小时准确治疗，病人存活率抗生素如果晚一小时准确治疗，病人存活率下降下降8%8%。Impact of Rapid Organism Identification via Matrix-Assisted Laser Desorption/IonizationTime-of-Flight Combined With Antimicrobial Stewardship Team Intervention in Adult Patients With Bacteremia and Candidemia届由质谱快速分析及快速药敏介入临床抗生素管理小组执行成人病患菌血症及霉菌血症的影响Clinical Infectious Diseases 2013;57(9):123745快速快速鉴鉴定定质谱结质谱结合合药药敏敏报报告减少告减少鉴鉴定定时间时间并帮助并帮助临临床床执执行最合适抗生素用行最合适抗生素用药药30 天内死亡率减少天内死亡率减少6.6%;ICU 住院天数减少住院天数减少6.6天天;对对症用症用药时间缩药时间缩短短10个小个小时时 鉴鉴定定/药药敏最敏最终报终报告告时间时间提早提早 29小小时时;84hr vs 55.9hr有效用有效用药时间药时间提早十个小提早十个小时时:30.1hr vs 20.4 hr正确使用广效抗生素正确使用广效抗生素选择选择提早提早43小小时时;90.3hr vs 47.3 hr501位位临临床病患中床病患中,快速快速报报告族群告族群30天内死亡率减少天内死亡率减少6.6%脓脓毒症复毒症复发发率减少率减少3.9%;5.9%vs 2.0%对少见菌、厌氧菌、部分真菌、奴卡菌等非常对少见菌、厌氧菌、部分真菌、奴卡菌等非常难鉴定菌难鉴定菌的检测准确度和速度将大大提高。的检测准确度和速度将大大提高。少见菌往往有其独特的药物选择，比如布鲁菌属首少见菌往往有其独特的药物选择，比如布鲁菌属首选四环素类、奴卡菌首选复方新诺明等等。选四环素类、奴卡菌首选复方新诺明等等。克柔假丝酵母菌对氟康唑天然耐药，热带假丝酵母克柔假丝酵母菌对氟康唑天然耐药，热带假丝酵母菌对唑类药物的耐药性也有上升。菌对唑类药物的耐药性也有上升。质谱鉴定技术的临床价值产单核李斯特菌产单核李斯特菌4 4度可生长，易污染食物和乳制品，对人类可引起原发性脑膜炎、度可生长，易污染食物和乳制品，对人类可引起原发性脑膜炎、脑炎、败血症。脑炎、败血症。对儿科常用药物头孢菌素天然耐药，对氨苄西林敏感。对儿科常用药物头孢菌素天然耐药，对氨苄西林敏感。因此，实验室一旦发现疑似产单核李斯特菌可能，就要快速给予临床相关信息。因此，实验室一旦发现疑似产单核李斯特菌可能，就要快速给予临床相关信息。梅里埃细菌鉴定药敏分析仪梅里埃细菌鉴定药敏分析仪 给出两个鉴定选项（产单核、无害李斯特菌），给出两个鉴定选项（产单核、无害李斯特菌），VITEK 2 COMPACT 需要补充需要补充CAMP试验结果（试验结果（24小时孵育）小时孵育）质谱鉴定质谱鉴定 直接给出直接给出99.9%的鉴定结果的鉴定结果 产单核李斯特菌产单核李斯特菌微小单胞菌微小单胞菌微小单胞菌微小单胞菌 对少见菌、厌氧菌、部分真菌、奴卡菌等非常对少见菌、厌氧菌、部分真菌、奴卡菌等非常难鉴定菌难鉴定菌的检测准确度和速度将大大提高。的检测准确度和速度将大大提高。少见菌往往有其独特的药物选择，比如布鲁菌属首少见菌往往有其独特的药物选择，比如布鲁菌属首选四环素类、奴卡菌首选复方新诺明等等。选四环素类、奴卡菌首选复方新诺明等等。克柔假丝酵母菌对氟康唑天然耐药，热带假丝酵母克柔假丝酵母菌对氟康唑天然耐药，热带假丝酵母菌对唑类药物的耐药性也有上升。菌对唑类药物的耐药性也有上升。质谱鉴定技术的临床价值 质谱鉴定技术的临床价值 使血培养的分级报告更准确使血培养的分级报告更准确 临床医师可根据以往的耐药监测结果进行用药选临床医师可根据以往的耐药监测结果进行用药选择择MALDI-TOF MS对血培养阳性样本的直接检测优点：快速。缺点：操作麻烦，且抽滤容易产生气溶胶，污染环境。不易于在临床推广。鉴定的缺陷：多种菌感染不能鉴定，或者鉴定有误，链球菌等难于区分的菌是最大的问题。感感谢谢聆听！聆听！检验检验科微生物室（内科微生物室（内线线1055）