实验判断可逆抑制剂为何种类型.doc

问：给定一种抑制剂（I）对某种酶（E）的抑制反应为可逆抑制，设计实验判断该可逆抑制剂为何种类型？
答：利用不同浓度抑制存在时，进行E的动力学参数测定实验，并在同一坐标进行双倒数作图，根据曲线之间的关系来进行抑制反应类型的判断。具体做法：
1、 在无抑制剂情况下，设定5个不同的底物浓度【S】（等差或等比），在酶的最适反应条件下，分别测定各个底物浓度下的反应速度V，每个浓度做三次重复；
2、 用0.5µmol/L的抑制剂进行酶反应抑制，同样在第1步设定的5个不同【S】下，在酶的最适反应条件下，分别测定有I存在时，各个底物浓度下的反应速度V，每个浓度做三次重复；
3、 用1µmol/L的抑制剂进行酶反应抑制，同样在第1步设定的5个不同【S】下，在酶的最适反应条件下，分别测定有I存在时，各个底物浓度下的反应速度V，每个浓度做三次重复；
4、 用上述反应得到的数据（反应速度V为三次重复的平均值），在同一坐标内进行双倒数作图，并根据做出的图进行抑制类型的判断，判断结果如下：

说明：该实验必须做三条以上曲线进行判断，根据计算出的曲线方程，交点或斜率不一定绝对是同一数值，但差别在统计误差范围内，可认为是相同。因为实验的误差是不可避免的，实验做得越精确，误差就越小。本方法是常用的简单可靠地方法
大家的想法理论上都是对的，但未考虑到误差的影响，只有两个数据之间进行比较，如果误差较大，而且还存在正负两种误差，有可能比较大小时得不到正确的结果。
还有班级给出同位素标记的方法，在理论上可行，但实际操作困难较大，难度也较大。