选修一课堂填空大肠杆菌和尿素-答案.docx

选修一课堂默写（1）
班级 姓名
试验1 大肠杆菌的培育和分别
1．培育基的配制
（1） LB 培育基是通用的细菌培育基，其中包含水, NaCl , 蛋白胨 和 酵母提取液 （假如配制的是固体培育基，还须要加入 琼脂 ）。
（2）培育细菌的培育基中加入肯定量NaCl的作用是 维持渗透压 。
（3）在制备培育基时，还需调整培育基的pH，细菌通常喜爱 中性偏碱性 的环境，调整pH应当在培育基灭菌之 前 （填“前”或“后”）。
（4）培育基配置完成后，需转移分装到三角瓶, 试管中，为了避开发生 污染 ，三角瓶口, 试管口不能沾有培育基，因此，分装时必需用 三角漏斗（玻璃漏斗）。分装完成后，三角瓶口和试管口须要加棉塞，制作棉塞所需的棉花不能用脱脂棉，因为脱脂棉 易吸水，吸水后简单引起污染 。假如有条件，可以用__ 封口膜（橡胶塞, 塑料盖）代替棉塞。
（4）常见的灭菌方法还有 高压蒸汽 灭菌法和 灼烧 灭菌法等三角瓶, 培育皿和试管等器皿的灭菌要在121℃（ 1kg/cm2 压力）下灭菌15 分钟，这种灭菌方法称为 高压蒸汽 灭菌法。
（5）制备培育细菌用的空白试管斜面：LB液体培育基配好后，加入 琼脂并加热使之 溶化 ，在未凝固时，通过三角漏斗（玻璃漏斗） 加入试管（15mmX150mm）中，每支试管 2 ml。试管口加 棉塞 ，并将试管捆在一起，上端加盖一张 牛皮纸（报纸） 纸，灭菌后将试管 斜靠在平放的铅笔上 ， 冷却后，固体培育基即成为斜面。
2．大肠杆菌的扩大培育
将 接种环在酒精灯火焰上烧红后伸入保存有大肠杆菌的试管斜面，待其 冷却后再蘸取大肠杆菌，将其放入三角瓶的液体培育基中，然后将三角瓶用封口膜密封，放到37℃, 每分钟200转的 摇床 上 振荡 12小时。
3．大肠杆菌的分别
（1） 单菌落 的分别是消退污染杂菌的通用方法，也是筛选高表达量菌株的最简便方法之一。分别细菌的方法主要有 划线 分别法和 涂布分别法。前者通常运用的工具是 接种环 ，后者通常运用的工具是 玻璃刮刀。其中操作方法较简单的是 划线 分别法，较简单得到单菌落的是 涂布 分别法。假如要统计活细菌的数目，宜采纳 涂布 分别法。
（2）划线分别法：将 接种环 烧红并冷却后蘸取大肠杆菌菌液，然后在培育皿的 固体 培育基上连续划线。完成后盖上盖子，然后将培育皿 倒置 ，在37℃的 恒温培育箱 中培育12～24小时。由于在划线过程中 接种环 上的菌液渐渐 稀释，因此划线最终部分细菌间的距离渐渐 加大 。经培育后可看到在划线的末端出现不连续的 单菌落 ，这表明细菌已被分别。
（3）涂布分别法：先将大肠杆菌菌液 稀释 ，然后取 0.1 ml稀释度不同的菌液，加到培育皿的 固体 培育基上。再将保存在 70% 酒精中的 玻璃刮刀 放在酒精灯火焰上，待玻璃刮刀上的火焰熄灭后，用其将培育皿中的菌液涂布在培育基平面上。完成后盖上盖子，然后将培育皿 倒置 ，在37℃的恒温培育箱 中培育12～24小时，最终可得到相互分开的 单菌落，这表明细菌已被分别。在适当的稀释度下，可培育得到相互分开的菌落，通常以每个培育皿中有 20 个以内的单菌落 最为相宜。
4．大肠杆菌的保存
在 无菌 条件下，将大肠杆菌的单菌落用 接种环 取出，再用划线法接种在试管中的 斜面培育基 上，37℃培育24小时后，置于4℃的 冰箱 中保存。
试验2 分别以尿素为氮源的微生物
1．尿素又称脲 ，是 蛋白质 降解的产物。土壤中有一些细菌含有 脲酶 ，它们可以将尿素降解为 氨 ，从而为其生长供应 氮源 。在脲酶作用下，尿素分解的化学方程式是： 书25页
2．分别以尿素为氮源的微生物所用的培育基中含有水, NaCl, K2HPO4, 尿素 , 葡萄糖 , 琼脂糖和酚红等，其中酚红作为 指示剂，琼脂糖作为 凝固剂，选用琼脂糖而不选用琼脂的缘由是琼脂中含有肯定量的含氮化合物，不利于以尿素为氮源的微生物的筛选。尿素培育基灭菌时，为防止尿素 分解 ，可将尿素溶液通过 G6玻璃砂漏斗 过滤，使其无菌。该设备运用前需经过 高压蒸汽灭菌，运用后需用1mol/L的 盐酸 浸泡，并抽滤去酸，再用 蒸馏水 清洗至洗出液呈中性，干燥后保存。培育基的其余成安排制好后用 高压蒸汽 灭菌法灭菌，待冷却至60 ℃时，加入无菌的尿素溶液，混合匀称后待用。同时配置好LB 固体培育基，灭菌待用。
3．制备土壤细菌悬液：在 无菌条件下，将1g土样加入有 99 ml无菌水的三角瓶中， 振荡10min，即成10-2土壤稀释液。取上述土壤稀释液0.5ml加入有4.5ml 无菌水 的试管中，震荡制成稀释度 10-3为土壤稀释液。依次法制备10-4和10-5土壤稀释液。取样时，尽量只取 悬液 。
4.涂布：取稀释度10-4和10-5土壤稀释液各0.1ml，分别加到有LB 培育基和 尿素培育基的培育皿中，再将保存在 70%酒精中的玻璃刮刀放在酒精灯火焰上，待刮刀上的 火焰熄灭 ，在 酒精灯 旁打开培育皿，将菌液涂布到整个平面上。
5.培育和视察：涂布后，将培育皿 倒置 ，在37℃的 恒温培育箱 中培育24～48小时。最终在尿素培育基上出现的菌落数要少于 （填“多于”, “等于”或“少于”）LB培育基，而且在尿素培育基上的菌落四周会出现 红 色环带。这是因为尿素培育基中的 氮源 只有尿素，含有 脲酶 的细菌才能利用尿素存活生长。它们将培育基中的尿素降解为 氨 ，使 酚红 变为 红 色。
第 4 页