氨基肽氮测定.pptx

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,一、氨基酸定量分析的意义,蛋白质,氨基酸,保健食品及调味品的重要评价指标,国标（,GB5009.235,-,2016,）中收载了两种方法，酸度计法与比色法法。,第一法：酸度计法,，适用于以粮食和其副产品豆饼、麸皮等为原料酿造或配制的酱油，以粮食为原料酿造的酱类，以黄豆、小麦粉为原料酿造的豆酱类食品中氨基酸态氮的测定；,第二法：比色法,，适用于以粮食和其副产品豆饼、麸皮等为原料酿造或配制的酱油中氨基酸态氮的测定。,二、氨基态氮定量分析方法,三、应用实例,酸度计法,测定氨基酸态氮含量,1,、原理：该方法又称为甲醛值法。,氨基酸含有羧基和氨基，利用其两性特点，先加入甲醛固定氨基的碱性，使其羧基显示出酸性，然后用氢氧化钠标准溶液滴定后进行定量。,2,、仪器与试剂,36甲醛溶液,0.050mol/L NaOH标准溶液,酸度计,磁力搅拌器,10mL微量滴定管,酸度计,磁力搅拌器,三、应用实例,酸度计法,测定氨基酸态氮含量,3,、操作流程：,样品滴定,：移取,5mL,样液,定容,100mL,容量瓶移取样液,20mL,于锥形瓶中加蒸馏水,60mL,开动磁力搅拌器用0.05mol/L NaOH标准溶液滴定,至,pH,值为,8.2,记录消耗NaOH标准溶液的体积,（计算酱油中总酸含量）加入甲醛,10mL,用0.05mol/L NaOH标准溶液滴定,至,pH,值为,9.2,记录消耗NaOH标准溶液的体积,（计算酱油中氨基酸态氮含量）,三、应用实例,酸度计法,测定氨基酸态氮含量,3,、操作流程：,空白实验,：,取蒸馏水80mL,用,0.05mol/L NaOH标准溶液滴定至pH8.2,加入10mL甲醛溶液,用,0.05mol/L NaOH标准溶液滴定,至pH9.2为终点,记录消耗NaOH标准溶液体积。,三、应用实例,酸度计法,测定氨基酸态氮含量,4,、计算：,X,：,酱油样液中氨基液态氮的含量，g/100mL；,V,1,：,加入甲醛后，所消耗,NaOH,标准溶液的体积,，,mL；,V,2,：,为试剂空白试验加入甲醛后所消耗,NaOH,标准溶液的体积,，,mL,C,：,NaOH标准溶液的浓度，mol/L,0.014,：,与1.00mL 1.000mol/L氢氧化钠标准滴定液相当于0.014g的氮元素,V,：,吸取样液的体积,，,mL；,V,3,：,样品稀释液取用量，mL；,V,4,：,指样液稀释定容的体积，mL；,100,：,单位换算系数。,三、应用实例,比色,法,测定氨基酸态氮含量,1,、原理：在pH 为4.8的乙酸钠-乙酸缓冲液中,氨基酸态氮与乙酰丙酮和甲醛,反应生成,黄色的3,5-二乙酸-2,6-二甲基-1,4二氢化吡啶氨基酸衍生物,。在波长400nm处测定吸光度,与标准系列比较定量。,2,、仪器与试剂,乙酸；无水乙酸钠；甲醇；乙酰丙酮,分光光度计；恒温水浴锅；10mL具塞玻璃比色管,三、应用实例,比色,法,测定氨基酸态氮含量,3,、操作流程,标准溶液配制,氨氮标准储备溶液(1.0mg/mL)：,精密称取105 干燥2h的硫酸铵0.4720g于小烧杯中,加水溶解后移至100mL容量瓶中,并稀释至刻度,混匀,此溶液每毫升相当于1.0mg氨氮(10 下冰箱内贮存稳定1年以上)。,氨氮标准使用溶液(0.1g/L)：,用移液管精确量取10mL氨氮标准储备液(1.0mg/mL)于100mL容量瓶内,加水稀释至刻度,混匀,此溶液每毫升相当于100g氨氮(10下冰箱内贮存稳定1个月),三、应用实例,比色,法,测定氨基酸态氮含量,3,、操作流程,标准曲线绘制,标准使用液体积,0.1g/L,（,mL,）,0,0.05,0.1,0.2,0.4,0.6,0.8,1,乙酸钠-乙酸缓冲溶液,4mL,显色剂,4mL,样液反应,100 水浴中加热15min,冷却至室温,样液吸光度值,A,（,400nm,）,A0,A1,A2,A3,A4,A5,A6,A7,三、应用实例,比色,法,测定氨基酸态氮含量,3,、操作流程,样品测定,2mL,试样,4mL乙酸钠-乙酸,缓冲溶,液，4mL,显色剂,稀释至刻度,置于100 水浴中加热15min,冷却至室温后,于波长,400nm,处测量吸光度,三、应用实例,比色,法,测定氨基酸态氮含量,4,、计算：,X,：,试样中氨基酸态氮的含量,g/100g；,m,：,试样测定液中氮的质量,g；,m,1,：称取试样的质量，,g,；,V,：,吸取样液的体积,，,mL；,V,1,：,测定用试样溶液体积，mL；,V,2,：,试样前处理中的定容体积,，,mL；,100,、,100,0,：,单位换算系数。,