微生物限度检查室浮游菌测试操作规程.doc

微生物限度检查室浮游菌测试操作规程

微生物限度检查室浮游菌测试操作规程

一、范围：本标准规定了微生物限度检查室浮游菌的测试方法和要求；
适用于本公司浮游菌的测试。
二、引用标准：GB/T-16293-1996，GMP（1998年修订）附录，中国药典2000年版二部。
三、浮游菌测定的标准：

洁净度级别
法定标准
活微生物数/m3
100
≤5
10,000
≤100

四、仪器、设备和培养基
1、所用的仪器、设备和培养基
1.1 浮游菌采样器
1.2 真空抽气泵
1.3 培养皿（φ150mm×15mm）
1.4 培养皿（营养琼脂培养基）
1.5 恒温培养箱
2、仪器、设备、培养基的要求
2.1 浮游菌采样器
2.1.1 浮游菌采样器必须要有流量计和定时量。
2.1.2 应严格按仪器说明书的要求进行操作。
2.1.3 采样器必须按仪器的检定周期，定期对仪器作检定，以保证测试数据的可靠性，检验项目有：定时器，转盘转速，流量计。

2.1.4 每次测试前应先接通电源，启动真空抽气泵，然后调节流量计和定时器。
2.1.5 空气采样量根据需要选定，已知采样器的流量（L/min），设定采样时间（nin）两者相乘即采样量（ L）。
2.1.6 采样口必须用便于消毒及化学性能稳定的材料制造，采样管严禁渗漏，内壁应光滑，采样管的长度应根据测定点的高度定，尽量减少弯曲。
2.2 真空抽气泵
2.2.1 真空抽气泵的排气量应及采样器匹配。
2.2.2 宜采用无油真空抽气泵，必要时可在排气口安装气体过滤器。
2.2.3 真空抽气泵安装的位置一般装在采样器下面。
五、测试方法
1、测试有仪器、培养皿表面必须严格消毒。
1.1 采样器进入被测房间前先用消毒剂灭菌，用于100级洁净室的采样器宜一直放在被测房间内。
1.2 用消毒剂擦净培养皿的外表面。
1.3 采样前，先用消毒剂消毒采样器的顶盘，转盘以及罩子的内外面，采样结束再用消毒剂轻轻喷射罩子的内壁和转盘。
1.4采样口及采样管，使用前必须高温灭菌，如用消毒剂对采样管的外壁外内壁进行消毒，应将管中的残留液倒掉并晾干。
1.5 采样者应穿戴及被测洁净区域相应的工作服，在转盘上放入或调换培养皿前，双手用消毒剂消毒。
2、采样程序
2.1 仪器经消毒后先不放入培养皿，开动真空泵抽气，使仪器中的残余消毒剂蒸发，时间不少于5min，并调好流量，转盘转速。
2.2 关闭真空泵，放入培养皿，盖上盖子后调节采样吕缝隙高度。
2.3 置采样口于采样点后，开启采样器、转动定时器，根据采样量设定采样时间。
3、培养
3.1 全部采样结束后，将培养皿倒置于恒温培养箱中30~35℃培养48h。
3.2 每批培养基可选3只培养皿作对照培养，检验培养基本身是否污染。
4、菌落计数
4.1 用肉眼直接计数，标记或在菌落计数器上点计，然后用5~10倍放大镜检查，有否遗漏。
4.2 若平板上有2个或2个以上的菌落重叠，可分辨时仍以2个或2个以上菌落计数。
5、注意事项：
5.1 使用前应检查每个培养皿的质量，培养基及培养皿有变质、破损或污染的不能使用。
5.2 采用一切措施防止采样管的污染或其他人为对样本的污染。
5.3 对培养基，培养条件及其他参数作详细的记录。
六、测试规则
1、测试状态
1.1 浮游菌测试前微生物限度检查室的温、温度必须达到规定的要求，换气次数，空气流速必须控制在规定值内。
1.2 浮游菌测试前，微生物限度检查室已经过消毒。
1.3 测试状态为静态测试，并在报告中注明测试状态。
2、测试人员
2.1 测试人员必须穿戴符合环境级别的工作服。
2.2 静态测试时，室内人员不得多于2人。
3、测试时间：
3.1 对单向流，如100级净化工作台，测试应在净化空调系统正常运行不少于10min 后开始。
3.2 对非单向流，如缓冲室、培养室，测试应在净化空调系统正常运行不少于30min后开始。
4、最少采样点数目及其布置，最小采样量，见下表

区域
面积（m2）
洁净度级别
最少采样点
最小采样量（L/次）
验证
监测
环境验证
日常监测
净化
工作台
0.8
100
2~3
1
1000
600
微生物限度检查室
4.8
100,000
2
1
500
400

采样点的布置，见“质检微生物限度检查室悬浮粒子测试操作规程（5.4.1）”。
4.1 对每个100级净化操作台，可在离药物敞开口处30cm处设测点，每班一次。
4.2 对每个1000级洁净工作区或可在工作面处设测点，每班一次。
4.3 采样点位置可以同悬浮粒子测试点，工作区测点位置离地0.8m~1.5m左右，（略高于工作面）；送风口测点位置离开送风面30cm左右；可在关键设备或关键工作活动范围处增加测点。
4.4 每个采样点一般采样一次。
4.5 对于单向流或送风口，采样器采样管口朝向应正对气流方向，对于非单向流，采样管口向上。
4.6 布置采样点时，至少应离开尘粒较集中的回风口1m以上。
4.7 采样时，测试人员应站在采样口的下风侧。
七、结果计算
1、用计算方法得出各个培养皿的菌落数。
2、每个测点的浮游菌平均浓度的计算：
菌落数
平均浓度（个/m3） = ————
采样量

1m3=1000L

八、结果评定
用浮游菌平均浓度判断微生物限度检查室空气中的微生物。
1、每个测点的浮游菌平均浓度必须低于所选定的评定标准中关于细菌浓度的界限。
2、若某测点的浮游菌平均浓度超过评定标准，则必须对此区域先行消毒，然后重新采样两次，两次测试结果必须合格。
九、记录
1、测试报告中应记录房间的温度、相对湿度及测试状态。
微生物限度检查室浮游菌测试记录

编 号： 测试单位：
测试依据： 测试状态：
温 度： 相对湿度：
采样品名称： 型 号：
培养基名称： 培养温度：
测试日期： 报告日期：

区 域
净化操作台
微生物限度检查室
面积m2
0.8
4.8
洁净度级别
100
10000
采样点
编号及菌数
1

2

3

4

采样速率L/min

采样量m3

平均浓度CFU/m3

结 论：

测试人： 复核人：

11 / 11