微生物的实验室培养经典练习.doc

微生物的实验室培养
班级 姓名
1．下列有关微生物实验室培养的叙述,正确的是（ ）
A．在熔化琼脂时,需要控制火力并不断搅拌,以免发生焦糊
B．灼烧、高压蒸汽灭菌、紫外线照射等都属于无菌技术
C．样品中活菌数量统计时,接种方法应采用划线法
D．用平板培养基培养微生物时,应将平板倒过来放置
2．一位同学要探究土壤微生物能否分解农药，并尽快得出实验结论，用“敌草隆”（一种除草剂）进行实验：取等量砂土分装于相同的两个容器中，a组高压灭菌，b组不灭菌。下列有关事项的叙述中正确的是（ ）
A．向a、b中喷入等量的“敌草隆”，再置于同一恒温箱中培养相同时间
B．检测“敌草隆”的消失情况，预计a的“敌草隆”全部消失，b的基本不变
C．只用砂土实验效果比用几种典型土壤混合后的好
D．再增加c组作为对照，不喷入“敌草隆”，其他处理与a、b组相同
3．做“微生物的分离与培养”实验时,下列叙述正确的是（ ）
A．高压灭菌加热结束时,立即开启锅盖，拿出培养基和工具待用
B．倒平板时,应将打开的皿盖放到一边,以免培养基溅到皿盖上
C．为了防止污染,接种环经火焰灭菌后应趁热快速挑取菌落
D．用记号笔标记培养皿中菌落时,应标记在皿底上
4．甲、乙、丙是三种微生物，下表I、Ⅱ、Ⅲ是用来培养微生物的三种培养基。甲、乙、丙都能在Ⅲ中正常生长繁殖；甲能在I中正常生长繁殖，而乙和丙都不能；乙能在Ⅱ中正常生长繁殖，甲、丙都不能。下列说法正确的是（ ）

粉状硫
10g
K2HPO4
4g
FeS04
0．5g
蔗糖
10g
（NH4）2SO
0．4g
H20
100ml
MgS04
9．25g
CaCl2
0．5g
I
+
+
+
+
-
+
+
+
Ⅱ
+
+
+
-
+
+
+
+
Ⅲ
+
+
+
+
+
+
+
+
A．甲、乙、丙都是异养微生物
B．甲、乙都是自养微生物、丙是异养微生物
C．甲是异养微生物、乙是固氮微生物、丙是自养微生物
D．甲是固氮微生物、乙是自养微生物、丙是异养微生物
5．培养基、培养皿、接种环、实验操作者的双手、空气、牛奶所采用的灭菌、消毒方法依次是（ ）
①化学消毒 ②灼烧灭菌 ③干热灭菌 ④紫外线灭菌 ⑤高压蒸汽灭菌 ⑥巴氏消毒法
A．⑤③②①④⑥
B．①②③④⑤⑥
C．⑥②③④①⑤
D．③④②①⑥⑤
6．细菌培养基的配制过程中，下列操作不正确的是( )
A．在培养基分装完毕后把pH调节到5.4～6.0为宜
B．培养基中的牛肉膏可以为细菌提供碳源、氮源、磷酸盐和维生素
C．培养基配置的步骤是计算、称量、溶化、灭菌、倒平板
D．琼脂是一种从红藻中提取的多糖，常作为凝固剂
7．MS培养基和培养微生物所配制的培养基的主要区别为（ ）
A．MS培养基一般含植物激素，微生物培养基不含植物激素
B．MS培养基不需要氨基酸，微生物培养基含各种氨基酸
C．MS培养基不需要碳源，微生物培养基含碳源
D．MS培养基含维生素B1和维生素B6，微生物培养基不含有
8．不同微生物对营养物质的需要各不相同。下列有关一种以CO2为唯一碳源的自养微生物营养的描述中不正确的是（ ）
A．氮源物质为该微生物提供必要的氮素
B．该碳源物质也是该微生物的能源物质
C．无机盐是该微生物不可缺少的营养物质
D．水是该微生物的营养要素之一
9．下列有关平板划线接种法的操作错误的是 （ ）
A．将接种环放在火焰上灼烧
B．将已冷却的接种环伸入菌液中蘸取一环液
C．蘸取菌液和划线要在火焰旁进行
D．划线时要将最后一区的划线与第一区的划线相连
10．稀释涂布平板法是微生物培养中的一种常用的接种方法。下列相关叙述错误的是
A．操作中需要将菌液进行一系列的浓度梯度稀释
B．需将不同稀释浓度的菌液分别涂布到固体培养基表面
C．不同浓度的菌液均可在培养基表面形成单个的菌落
D．操作过程中对培养基和涂布器等均需进行严格灭菌处理
11．用平板划线法或稀释涂布平板法纯化大肠杆菌时①都需要用固体培养基②都需要使用接种针进行接种③都需要在火焰旁进行接种④都可以用菌落数来计数活菌
A．①② B．①③
C．②④ D．③④
12．培养甲型H1N1病毒时，应选用
A．无菌的牛肉汤 B．含多种无机盐的培养液
C．固体培养基 D．适宜温度和湿度条件下的活鸡胚
13．如图是微生物平板划线示意图。划线的顺序为12345。下列操作方法正确的是 （ ）

A．操作前要将接种环放在火焰边灼烧灭菌
B．划线操作应在火焰上进行
C．在5区域中才可以得到所需菌落
D．在12345区域中划线前后都要对接种环灭菌
14．关于制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的叙述错误的是 （ ）
A．操作顺序为计算、称量、溶化、倒平板、灭菌
B．将称好的牛肉膏连同称量纸一同放入烧杯
C．等培养基冷却至50 ℃左右时进行倒平板
D．待平板冷却凝固5～10 min后将平板倒过来放置

15．由于酵母菌直接利用淀粉的能力很弱，有人将地衣芽孢杆菌的α-淀粉酶基因转入酵母菌中经筛选得到了可高效利用淀粉的工程酵母菌菌种（过程如图甲所示）。

（1）图甲中，过程①需要的酶有___________。为达到筛选目的，平板内的固体培养基应以__________作为唯一碳源。②、③过程需要重复几次，目的是_______ 。
（2）某同学尝试过程③的操作，其中一个平板经培养后的菌落分布如图乙所示。该同学的接种方法是_____；推测该同学接种时可能的操作失误是____ ____。该操作过程中需要对哪些实验器材进行灭菌（ ）
A、玻璃刮铲
B、接种针
C、培养基
D、工程酵母菌种
E、酒精灯
（3）对于实验结果分析正确的是：（ ）
A．在培养基中添加碘液进行染色，菌落周围会出现透明圈，颜色较浅。
B．可挑选透明圈较大的工程菌进行培养。
C．在密闭和不密闭的情况下培养，酵母菌出现的透明圈大小不同。
D．在实验条件适宜时，酵母菌进行孢子生殖，繁殖迅速。
（4）以淀粉为原料，用工程酵母菌在适宜条件下密闭发酵，隔一段时间需要进行排气，其原因是_______ 。
16．请回答下列有关微生物培养和分离的问题。
（1）筛选石油分解菌一般要经过如下的步骤：海水取样→______→梯度稀释→将样品涂布到培养基上→挑选菌落，其中第二步的目的是______。
（2）培养微生物时，获得纯洁培养物的关键是_________。为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在_________附近进行。采用固体平板培养细菌时，为防止冷凝水影响细菌的生长，需将培养皿____培养。
（3）在菌种保藏时，对于我们频繁使用的菌种一般采用临时保藏的方法，但这种方法有两个缺点：__________________；_________________。
（4）做完实验将培养基倒掉之前，一定要进行______处理。
（5）现有5种酵母菌的营养缺陷型菌株1、2、3、4、5，它们不能合成生长所必需的物质G，已知A、B、C、D、E都是合成G物质的必需中间产物，但不知这些物质合成的顺序， 于是在培养基中分别加入这几种物质并分析了这几种物质对各种营养缺陷型菌株生长的影响结果如下表所示。

根据以上结果，推测这几种物质的合成顺序应是________________。
17．生物柴油是一种可再生的清洁能源，其应用在一定程度上能够减缓人类对化石燃料的消耗，科学家发现，在微生物M产生的脂肪酶作用下，植物油与甲醇反应能够合成生物柴油（如下图）

（1）用于生产生物柴油的植物油不易挥发，宜选用_______、_______方法从油料作物中提取。
（2）筛选产脂肪酶的微生物M时，选择培养基中添加的植物油为微生物生长提供______，培养基灭菌采用的最适方法是________法。
（3）测定培养液中微生物数量，可选用________法直接计数；从微生物M分离提取的脂肪酶通常需要检测________，以确定其应用价值；为降低生物柴油生产成本，可利用______技术使脂肪酶能够重复使用。
（4）若需克隆脂肪酶基因，可应用耐热DNA聚合酶催化的__________技术。
18．（10 分）从自然菌样中筛选较理想生产菌种的一般步骤是：采集菌样→富集 培养→纯 种分离→性能测定。请回答筛选过程中的问题。
（1）不同微生物的生存环境不同，获得理想微生物的第一步是从合适的环境采集菌样，然 后再按一定的方法分离、纯化。培养噬盐菌的菌样应从 的环境采集，培养厌氧菌的菌样应从 的环境采集。
（2）富集培养是指创设仅适应该条件的微生物旺盛生长的特定的环境条件，使待分离微生 物在群落中的数量大大增加，从而实现从自然界中分离出所需的特定微生物的培养方法。对 固氮菌富集培养的培养基应是 培养基；对耐高温淀粉酶菌的富集培养应选择 的培养基，并在 条件下培养。
（3）实验室最常用的灭菌方法是利用高温处 理达到杀菌的效果。高温灭菌的原理是高温使微生物的 等物质发生 。在微生物研究和教学中应用最 广、效果最好的湿热灭菌法是 灭菌法。
（4）下图中 A、B 是采用纯化微生物培养、用两种接种方法接种产生的效果图解，请分析 接种的具体方法：

AB获得图 A 效果的接种方法是 ；获得图 B 效果的接种方法是 。

试卷第5页，总6页
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参考答案
1．ABD
【解析】
试题分析：琼脂属于多糖，在熔化琼脂时要控制火力并不断搅拌,以免发生焦糊，A项正确；灭菌和消毒都属于无菌技术，常用的灭菌方法主要有灼烧灭菌、干热灭菌和高压蒸汽灭菌，实验室可以用紫外线照射或化学药物进行消毒，B项正确；样品中活菌数量统计时,应用稀释涂布平板法进行接种,而不是用划线法，C项错误；用平板培养基培养微生物时,为防止冷凝水滴在培养基造成污染，需要将平板倒过来放置，D项正确。
考点：本题考查微生物实验室培养的相关知识，意在考查学生能理解所学知识的要点，把握知识间的内在联系，形成知识网络结构的能力。
2．A
【解析】本实验的自变量的有无土壤微生物，而敌草隆的使用量和培养条件是无关变量，无关变量应保持一致且适宜，所以应向a、b中喷入等量敌草隆，再置于同一温箱中培养相同时间，A正确；
B、a组土壤经过高压灭菌，不含微生物，不能将“敌草隆”分解，预计a的“敌草隆”基本不变，b组不灭菌，存在土壤微生物，可能将“敌草隆”分解，预计b的“敌草隆”含量减少，但不会全部消失，B错误；不同的土壤微生物的种类和数量不同，只用砂土实验效果不如几种典型土壤混合后的好，C错误；本实验是验证土壤中的微生物能对农药“敌草隆”具有分解作用，若不喷入“敌草隆”，则不能证明土壤中的微生物的此种作用，D错误。
【考点定位】培养基对微生物的选择作用
【名师点睛】解题思路：1、生物实验中的变量：实验过程中可以变化的因素称为变量；自变量：想研究且可人为改变的变量称为自变量； 因变量：随着自变量的变化而变化的变量称为因变量；无关变量：在实验中，除了自变量外，实验过程中存在一些可变因素，能对实验结果造成影响，这些变量称为无关变量。2、分析题干可知，本题是通过实验探究土壤微生物能否分解农药，a组高压灭菌，没有微生物，b组不灭菌，存在土壤微生物，所以a组为实验组，b组为对照组。
3．D
【解析】高压灭菌加热结束，等待压力表指针回到零后，才能开启锅盖，不能打开放气阀使压力表指针回到零，A错误；倒平板过程中不能打开培养皿的皿盖，B错误；接种环火焰上灼烧后，待冷却后才可以快速挑取菌落，C错误；用记号笔标记培养皿中菌落时，应标记在皿底上，D正确。
【考点定位】微生物的分离和培养
【名师点睛】1、无菌操作，包括灭菌和消毒两种方式，消毒的方法有巴氏消毒法、酒精消毒、煮沸消毒法；灭菌的方法有干热灭菌、灼烧灭菌和高压蒸汽灭菌。2、微生物的接种：微生物接种的方法很多，最常用的是平板划线法和稀释涂布平板法，常用来统计样品活菌数目的方法是稀释涂布平板法。3、平板划线法：通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基表面。
4．D
【解析】从表中所列的三种培养基成分着手，培养基I 中缺少氮源，培养基Ⅱ中缺少有机碳，培养基Ⅲ中营养成分最全．由题意中所给的情况分析，只有甲能在培养基I 中生长，而乙、丙不能说明甲能自行固氮；乙能在Ⅱ中生长，说明乙可自行合成有机碳，是一种自养微生物；而丙只能在Ⅲ中生长，说明它既不能固氮也不能自行合成有机物．由此可知甲是固氮微生物、乙是自养微生物、丙是异养微生物。答案是D。
【考点定位】微生物的培养
5．A
【解析】
试题分析：培养基用高压蒸汽灭菌；培养皿能耐高温，需用干热灭菌；接种环可用灼烧灭菌达到迅速彻底的灭菌效果；实验操作者的双手可用化学药剂进行消毒，如用酒精擦拭双手；空气可用紫外线消毒；为不破坏其营养成分，对牛奶可采用巴氏消毒法，故选：A。
考点：本题主要考查灭菌与消毒的区别于联系，关键是熟记各自的方法与适用范围。
6．A
【解析】
试题分析：在培养基分装前，先pH调节到5.4～6.0，在来分装，A错误；培养基中的牛肉膏可以为细菌提供碳源、氮源、磷酸盐和维生素，B正确；培养基配置的步骤一般是：计算、称量、溶化、灭菌、倒平板，C正确；琼脂是一种从红藻中提取的多糖，常作为凝固剂，D正确。
考点：本题主要考查微生物培养的相关知识，意在考查考生能理解所学知识的要点，把握知识间的内在联系的能力。
7．A
【解析】
试题分析：植物组织培养所用的MS培养基和微生物培养所用的培养基的主要区别是MS培养基一般含植物激素，微生物培养基不含植物激素．A正确，BCD错误，故选：A。
考点：本题主要考查组织培养常用的MS培养基和培养微生物所配制的培养基的主要区别相关知识，意在考查考生能理解所学知识的要点，把握知识间的内在联系的能力。
8．B
【解析】
试题分析：氮源物质为该微生物提供必要的氮素．A正确；该碳源是二氧化碳，属于无机物，不能作为微生物的能源物质，B错误；无机盐是该微生物不可缺少的营养物质，C正确；水是该微生物的营养要素之一，D正确。
考点：本题主要考查微生物的分离和培养相关知识，意在考查考生能理解所学知识的要点，把握知识间的内在联系的能力。
9．D
【解析】要将接种环在火焰上灼烧灭菌，A正确；应将冷却的接种环伸入菌液蘸取，温度高会杀死菌种，B正确；蘸取菌液和划线都要在火焰旁进行，防止杂菌的污染，C正确；划线时最后一区的划线与第一区划线不能相连，D错误；答案是D。
【考点定位】接种方法
10．C
【解析】稀释涂布平板法，包括系列稀释和涂布平板两个过程，涂布平板之前需要将菌液进行一系列的浓度梯度稀释，A正确．涂布平板时，需要将不同稀释度的菌液分别涂布到固体培养基表面，B正确；只有稀释度足够大的菌液才能在培养基表面形成单个的菌落，C错误；操作过程中对培养基和涂布器等均需进行严格灭菌处理，以防止杂菌污染，D正确；答案是C。
【考点定位】微生物的分离和培养
【名师点睛】技巧点拨：阅读题干可知，本题是考查稀释涂布平板法的具体过程，先梳理稀释涂布平板法的具体操作，然后根据选项描述分析判断。
11．B
【解析】
试题分析：①正确，固体培养基上面可以获得大肠杆菌的单菌落；②错误，分离纯化大肠杆菌可使用接种环或涂布器进行划线法或涂布平板法接种；③正确，在火焰旁会形成一个相对无菌区来进行接种，可以避免杂菌感染；④错误，平板划线法只能用来分离纯化获得单菌落，而不能用来计数。故答案选B。
考点：本题考查微生物培养的相关知识，意在考查考生能理解所学知识的要点，把握知识间的内在联系，形成知识网络的能力。
12．D
【解析】
试题分析：病毒必须寄生在活细胞中才能生存，A、B、C都是普通的培养基，故错误。活鸡胚是细胞，故D正确。
考点：本题考查病毒相关知识，意在考察考生对知识点的理解掌握程度。
13．D
【解析】
试题分析：进行微生物平板划线操作之前，要将接种环放在酒精灯火焰上灼烧灭菌，直到接种环烧红，A项错误；划线操作应在火焰旁进行，不能在火焰上进行，B项错误；平板划线分离微生物的原理就是通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到单个菌落。5区域是最后一个区域，因此，有可能在5区域得到所需菌落，但在4区域也有可能得到所需菌落，C项错误；操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物，每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，因此，在12345区域中划线前后都要对接种环灭菌，D项正确。
考点：本题考查平板划线操作的相关知识，意在考查考生理解所学知识的要点，把握知识间的内在联系的能力。
14．A
【解析】
试题分析：制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的操作顺序为计算、称量、溶化、灭菌、倒平板，A项错误；首先将称好的牛肉膏连同称量纸一同放入烧杯，加入少量的水，加热，B项正确；高压蒸汽灭菌后，等培养基冷却至50 ℃左右时，在酒精灯火焰附近进行倒平板，C项正确；待平板冷却凝固5～10 min后将平板倒过来放置，使皿盖在下、皿底在上，D项正确。
考点：本题考查制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的相关知识，意在考查考生理解所学知识的要点，把握知识间的内在联系的能力。
15．（1）限制性核酸内切酶（限制酶）、DNA连接酶 淀粉
进一步筛选纯化获得分解淀粉能力强的酵母菌
（2）稀释涂布平板法 涂布不均匀 AC
（3）AC
（4）酒精发酵产生CO2需要排出，否则压力过大
【解析】（1）图甲过程①表示基因表达载体的构建，该过程先要用同种限制性核酸内切酶切割含有目的基因的外源DNA分子和质粒，再用DNA连接酶将目的基因和载体连接起来形成重组质粒．普通酵母菌直接利用淀粉的能力很弱，而工程酵母菌可以高效利用淀粉，所以用以淀粉为唯一碳源的选择培养基可以选出工程酵母菌．②、③过程重复几次的目的是纯化获得分解淀粉能力强的酵母菌。
（2）由图乙可知，该同学采用的是稀释涂布平板法，但菌落比较集中，没有很好的分散开来，可能是涂布不均匀导致的。玻璃刮铲和培养基要严格灭菌，否则会有杂菌。
（3）培养基中添加碘液进行染色，先用颜色反应，后面淀粉被分解后，会出现菌落周围会出现透明圈，颜色较浅。在密闭和不密闭的情况下培养，酵母菌进行的呼吸方式不同，数量也不同，淀粉分解的程度不同，酵母菌出现的透明圈大小也不同。
（4）普通酵母菌直接利用淀粉的能力很弱，而工程酵母菌可以高效利用淀粉，即将淀粉分解产生葡萄糖的能力强，导致酒精发酵速率快，产生二氧化碳的速率更快，所以接种工程酵母菌的发酵罐要先排气。
【考点定位】因工程的原理及技术；微生物的分离和培养
16．（1）选择培养 增加石油分解菌浓度
（2）无菌操作（防止杂菌污染） 酒精灯火焰 倒置
（3）保存的时间不长 菌种易被污染或产生变异
（4）灭菌
（5）EACBDG
【解析】（1）在实验室筛选所要的特定菌种一般步骤为海水取样→选择培养→梯度稀释→将样品涂布到培养基上→挑选菌落，其中选择培养就是利用制成的富含石油选择培养基来培养细菌，以增加石油分解菌浓度。
（2）要从海水中筛选出石油分解菌，需要配置选择培养基，并且这种选择培养基只能是以石油为唯一碳源，使得其他微生物因为无法利用石油，而缺少碳源无法生存，在这个过程中必须严格按照微生物实验室培养的原则，在接种细菌前，培养基要用高压蒸汽进行灭菌，分离和纯化石油分解菌时最常用的接种方法是稀释涂布平板法。
（3）菌种保存的时候，一般长期保存使用甘油管藏，在零下20℃。
（4）做完实验将培养基倒掉之前，一定要进行灭菌处理，防止环境污染。
（5）由于题中给出G是必需的物质，在5种突变菌株中只要加入G，都可以活下来，则G必然是最后的产物；凡是只加了E的都没能存活，则E就是最开头的产物，加A物质，1、2、3、4均没有存活，说明A物质处于第二位；其他类推，C物质处于第三位，B物质处于第四位，D物质处于第五位，因此这几种物质的合成顺序应是E→A→C→B→D→G。
【考点定位】微生物培养和分离
17．（1）压榨、萃取
（2）唯一碳源 高压蒸汽灭菌
（3）普微镜直接计数 酶活性 因定化酶
（4）PCR
【解析】（1）因为植物油不挥发，所以不适合采用蒸馏法提取，应采用压榨法或萃取法提取。
（2）植物油中不含有矿质元素，只为微生物提供碳源；培养基适合用高压蒸汽灭菌法进行灭菌。
（3）测定微生物的数量，可以用显微镜直接计数；分离出的脂肪酶要对其活性进行检测，以确定其实用价值；可以利用酶固定技术重复使用脂肪酶。
（4）利用PCR技术可以扩增基因。
【考点定位】提取芳香油；培养基对微生物的选择作用；制备和应用固相化酶；PCR技术的基本操作和应用
18．（每空1分，10分）
（1）含盐高（或高盐度） 缺氧（或厌氧、无氧）
（2）缺氮（或无氮） 含有淀粉 高温
（3）蛋白质、DNA 变性（或结构改变） 高压蒸汽
（4）涂布分离法 划线分离法
【解析】（1）噬盐菌的菌样应从高盐环境采集，如高盐海滩等。
（2）目的微生物能够产生淀粉酶说明其碳源是淀粉，筛选菌株时应选择以淀粉为唯一碳源的培养基，并在高温条件下培养。
（3）配制培养基时各种成分在溶化后分装前必须进行调整pH，接种前要进行高压蒸汽灭菌，在实验中要注意在无菌条件下进行。
（4）图A菌落分布较均匀，接种方法是稀释涂布平板，图B菌落集中呈线状，接种方法是平板划线法。
【考点定位】微生物实验
答案第7页，总7页