金黄色葡萄球菌检验方法.ppt

,单击此处编辑母版标题样式,*,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,金黄色葡萄球菌,检验方法,简介,金黄色葡萄球菌，也称,“,金葡菌,”,，细胞壁含,90%,的肽聚糖和,10%,的磷壁酸。其肽聚糖的网状结构比革兰氏阴性菌致密，染色时结晶紫附着后不被酒精脱色故而呈现紫色，相反，阴性菌的细胞壁肽聚糖层薄、交联度差，脂类含量高，所以紫色复合物被酒精冲掉然后附着了沙黄的红色。金黄色葡萄球菌与青霉素的发现有很大的渊源。当年弗莱明就是在他的金黄色葡萄球菌的培养皿中发现有些球菌被杀死了，于是发现了青霉素。而研究也表明青霉素只对以金黄色葡萄球菌为代表的革兰氏阳性菌作用明显。这也是由肽聚糖层的厚度和结构造成的。,金黄色葡萄球菌的流行病学一般有如下特点：季节分布，多见于春夏季；中毒食品种类多，如奶、肉、蛋、鱼及其制品。此外，剩饭、油煎蛋、糯米糕及凉粉等引起的中毒事件也有报道。上呼吸道感染患者鼻腔带菌率,83%,，所以人畜化脓性感染部位，常成为污染源。,金黄色葡萄球菌是人类化脓感染中最常见的病原菌，可引起局部化脓感染，也可引起肺炎、伪膜性肠炎、心包炎等，甚至败血症、脓毒症等全身感染。,检验方法,一材料与方法,1,、材料,培养基：,7.5%NaCl,肉汤培养基，血琼脂平板培养基（按常规方法制作）,试剂：,7.5%NaCl,肉汤培养基，革兰氏染色，血琼脂平板，,Baird-Parker,琼脂平板，生理盐水，兔血浆（,1,：,4,），,器材：温箱，显微镜，天平，均质器，载玻片，,L,型涂片棒，三角瓶，刻度吸管，平皿，试管及试管架，研磨，,1ml,注射器，,实验动物：健康的小白鼠,2,、方法,待检样品,25g+225ml,灭菌生理盐水,直接计数法 增菌培养方法,Baird-Parker,琼脂平板,7.5%NaCl,肉汤培养基,血平板 血平板,涂片染色镜 溶血观察动物接种试验 血浆凝固试验,报告,1,、样品的采集,称取,25g,火腿肠，切碎搅匀（用灭菌研钵研磨），置于,250ml,锥形瓶中，加入,225ml,灭菌生理盐水，制成,1,：,10,样品混悬液，混匀后作用,20,分钟，随机取,10ml,离心。,2,、增菌及分离培养,增菌培养方法：吸取,5ml,上清液，接种于,7.5%NaCl,肉汤培养基内，置于（,37,1,）恒温箱中培养,24h,，划线接种入血平板，（,37,1,）恒温箱中培养,24h,。,直接计数方法：吸取上述悬液，进行,10,倍递增稀释，根据样品污染情况，选择不同浓度的稀释液各,1ml,，分别加入,3,个,Baird-Parker,琼脂平板，每个平板的接种量分别为,0.3ml,、,0.3ml,、,0.4ml,。用灭菌,L,型涂布棒涂布整个平板，置于（,37,1,）恒温箱中培养,24h,。之后分别对,3,个平板上生长的周围有浑浊带的黑色菌落进行计数。转接入血平板，（,37,1,）恒温箱中培养,24h,。,3,、涂片、染色与镜检,将纯培养的未知菌涂片，革兰氏染色，显微镜观察。,4,、生化实验,触酶试验,在载玻片上滴,1,滴,3%,的过氧化氢，调取纯化的细菌放在过氧化氢中观察变化。,30s,内产生大量气泡者为阳性，不产生气泡者为阴性。,血浆凝固酶试验,吸取,1,：,4,新鲜兔血浆,0.5ml,，放入小试管中，再加入培养,24h,的,2,中的肉汤培养液,0.5ml,，摇荡均匀，放入（,37,1,）恒温箱中培养，每,0.5h,观察一次，观察,6h,，检查是否出现凝固。将试管倾斜或倒置时，呈现凝块状，可判定为阳性，同时以已知阳性葡糖球菌和阴性肉汤作为对照。,5,、动物感染实验,用无菌生理盐水将,2,中血琼脂板上纯化的菌落洗下后，以,0.5ml/,只腹腔注射入小白鼠体内，同时用灭菌生理盐水注射入另外的小白鼠体内，以做对照，分别在相同条件饲养，观察其症状。对感染试验出现症状或死亡的小白鼠进行剖检，并采集病料，进行分离。,二结果与分析,1,、培养特性及形态特征,培养特性,在,37,条件下，需氧与厌氧培养的血液营养琼脂平板均长出光滑、湿润、隆起，约,1mm,大小的金黄色菌落，并且有,溶血现象。,镜检结果,显微镜下观察该菌为革兰氏阳性球菌，排列成葡萄串状，也有个别,2,个或,3,个球菌相连。根据菌落形态、镜检结果怀疑该菌为葡萄球菌。,2,、菌落计数报告,将直接计数法试验中的,3,个平板中疑似黑色葡萄球菌的金黄色菌落数相加，乘以血浆凝固酶试验阳性数，除以,5,，在乘以稀释倍数，即为每克样品中金黄色葡萄球菌数量。,3,、动物感染试验,只注生理盐水的小白鼠没有任何变化：接种分离菌的小白鼠在,9h,内死亡。将死亡的小白鼠剖检采集病料，进行细菌分离和生化试验，得到与原分离菌。,“,金球菌,”,列为,“,极重要质量项目,”,金黄色葡萄球菌因思念、三全、湾仔码头事件而引发标准争议，在,2011,年,12,月,21,日实施的速冻食品新国标中，金黄色葡萄球菌从原来,“,不得检出,”,变为,“,限量检出,”,，但这一检测标准的改变并不代表可以忽略金黄色葡萄球菌的危害性。,在市质监局征集意见而公示的抽检项目中查询到，对包括速冻水饺、汤圆、包子、花卷、馒头、南瓜饼、八宝饭等在内的速冻米面食品，仍然计划把金黄色葡萄球菌列入,A,类检验项目，并标注为,“,极重要质量项目,”,，同时速冻米面食品的沙门氏菌也是,A,类检验。,谢谢,后面内容直接删除就行,资料可以编辑修改使用,资料可以编辑修改使用,主要经营：网络软件设计、图文设计制作、发布广告等,公司秉着以优质的服务对待每一位客户，做到让客户满意！,致力于数据挖掘，合同简历、论文写作、,PPT,设计、计划书、策划案、学习课件、各类模板等方方面面，打造全网一站式需求,感谢您的观看和下载,The user can demonstrate on a projector or computer,or print the presentation and make it into a film to be used in a wider field,