葡萄糖酸钙检验操作规程.doc

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SOP-QC-2011-01
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题 目
葡萄糖酸钙检验操作规程
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GMP办公室
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质量部
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4份
分发部门
质量部、生产部、物流部

1 感官要求
取10g被测样品，置于洁净的白瓷盘中，用肉眼在自然光线下观察其色泽、组织形态、杂质，品尝其滋味，嗅其气味。
2一般规定
本标准所用试剂除非另有说明，在分析中仅使用确认为分析纯的试剂和 GB/T 6682—2008中规定的三级水。
试验方法中所需标准滴定溶液、制剂及制品，在没有注明其他要求时，均按 GB/T 601、GB/T 603之规定制备。
3 鉴别试验
3.1 试剂和材料
3.1.1 冰乙酸。
3.1.2 苯肼：临用时蒸馏。
3.2 鉴别试验
3.2.1 钙盐鉴别
3.2.1.1 方法原理
钙盐与草酸铵试液反应，生成白色沉淀，沉淀在乙酸中不溶解，但可溶解于稀盐酸。
3.2.1.2 分析步骤
取约 1.0 g实验室样品，精确至 0.01 g，加 40 mL水溶解，必要时加热使溶解，取此溶液按《中华人民共和国药典》 2005年版二部附录 Ⅲ一般鉴别试验钙盐项下（ 2），应显钙盐的鉴别反应。

3.2.2 葡萄糖的鉴别
3.2.2.1 方法原理
样品在乙酸介质中，与苯肼共热，生成黄色葡萄糖酰苯肼结晶。
3.2.2.2 分析步骤
取约 0.5 g实验室样品，精确至 0.01 g，置 10 mL试管中，加 5 mL水，溶解（必要时加热），加 0.7 mL冰乙酸和 1 mL苯肼，在水浴上加热 30min，放至室温，用玻璃棒摩擦试管内壁，则析出黄色的结晶。
3.2.3 红外光吸收图谱鉴别
采用溴化钾压片法测定，实验室样品的红外光吸收图谱应与对照的图谱《药品红外光谱集》465图）一致，对照图谱见附录 B。
4 葡萄糖酸钙的测定
4.1 方法提要
以钙紫红素为指示剂，用乙二胺四乙酸二钠标准滴定液滴定样品水溶液，根据乙二胺四乙酸二钠标准滴定液的用量，计算以 C12H22CaO14·H2O计的葡萄糖酸钙的含量。
4.2 试剂与材料
4.2.1 钙紫红素指示剂。
4.2.2 氢氧化钠溶液：40g/L。
4.2.3 乙二胺四乙酸二钠标准滴定液：c(EDTA)=0.05mol/L。
4.3 分析步骤
取约 0.5g实验室样品，精确至 0.000 1g，加 100 mL水，使溶解（必要时加热），放至室温，加 15mL氢氧化钠溶液， 0.1g钙紫红素指示剂，用乙二胺四乙酸二钠标准溶液滴定至溶液由紫色转变为纯蓝色，并将滴定结果用空白试验校正，每 1mL的乙二胺四乙酸二钠滴定液相当于 22.42mg的 C12H22CaO14·H2O 。
4.4 结果计算
葡萄糖酸钙（以 C12H22CaO14·H2O 计）的质量分数 w1，数值以 %表示，按公式计算：

式中：
V——实验室样品消耗乙二胺四乙酸二钠标准滴定液体积的数值，单位为毫升(mL)；
V0——空白试验消耗乙二胺四乙酸二钠标准滴定液体积的数值，单位为毫升(mL)；
c——乙二胺四乙酸二钠标准滴定溶液浓度的准确数值，单位为摩尔每升(mol/L)；
m1——实验室样品质量的数值，单位为克（g）；
w3——按A.8下测定的供试品干燥减量质量分数，数值以%表示；
M——C12H22CaO14·H2O 的摩尔质量的数值，单位为克每摩尔（ g/mol）（ M=448.39）。
取两次平行测定结果的算术平均值为测定结果，两次平行测定结果的绝对差值不大于0.2%。
5 氯化物的测定
5.1 试剂和材料
5.1.1 硝酸溶液：25→100。
5.1.2 硝酸银溶液：17g/L。
5.1.3 氯化钠标准溶液：每毫升含0.01mg的Cl。
5.2 分析步骤
称取 1.0g±0.01g实验室样品，置 100mL容量瓶中，加 80mL水使溶解，再用水稀释至刻度，摇匀，即为实验室样品溶液。分别吸取 10.0 mL实验室样品溶液与 5mL±0.05mL氯化钠标准溶液，按 GB/T 9729测定。
6 硫酸盐的测定
6.1 试剂和材料
6.1.1 盐酸：20→100。
6.1.2 硫酸钾乙醇溶液：0.2g/L。
6.1.3 氯化钡溶液：250g/L。
6.1.4 硫酸盐标准溶液：每毫升含0.1mg 的SO4。
6.2 分析步骤
称取0.5g±0.01g实验室样品，加水微热溶解成约 20mL，用此溶液，同时另取2.5mL±0.05mL硫酸盐标准溶液按 GB/T 9728测定。
7 还原物质的测定
7.1 方法原理
还原糖将二价铜离子还原成氧化亚铜，剩余的二价铜离子在酸性条件下与碘离子反应生成定量的碘，以硫代硫酸钠标准溶液滴定生成的碘，从而计算出样品中还原糖的含量。
7.2 试剂和材料
7.2.1
碱性柠檬酸铜溶液的配制：
溶液A：称取 173 g柠檬酸钠（枸橼酸钠）和 100g无水碳酸钠，加温水使溶解成 700mL（若溶液显浑浊过滤使澄清）。
溶液B：称取17.3 g硫酸铜结晶，加水使溶解成 100mL。
临用前取100 mL溶液B，在不断振摇下，缓缓加入700mL溶液A，冷却后，加水定容至1000mL。
7.2.2 碘标准液：c(1/2I2)=0.05 mol/L。
7.2.3 硫代硫酸钠标准滴定溶液：0.1mol/L。
7.2.4 淀粉指示液：10g/L。
7.2.5 乙酸溶液：1+27。
7.2.6 盐酸溶液：3mol/L。
7.3 分析步骤
称取约1.0g实验室样品，精确至 0.001g，置250mL碘瓶中，加 20mL水（必要时加热）使溶解，冷却至室温，精确加入25.0 mL碱性柠檬酸铜溶液，瓶口用小表面皿盖住，准确微沸5 min后，迅速冷却至室温，加25.0 mL乙酸溶液，摇匀，精确加入 10.0 mL碘标准液，密塞，摇匀，放置10 min，加入10.0mL盐酸溶液，再加3.0mL淀粉指示液，立即用硫代硫酸钠标准溶液滴定至溶液显亮蓝色，并将滴定结果用空白试验校正。每毫升硫代硫酸钠标准溶液（0.1mol/L）相当于 2.7mg葡萄糖。
7.4 结果计算
还原糖(以C6H12O6计) 的质量分数 w 2，数值以%表示，按公式计算

式中：
V0 ——空白试验所消耗的硫代硫酸钠标准滴定溶液的体积的数值，单位为毫升（mL）；
V1——滴定试验溶液所消耗的硫代硫酸钠标准滴定溶液的体积的数值，单位为毫升（ mL）；
c——硫代硫酸钠标准滴定溶液实际浓度的数值，单位为摩尔每升（mol/L）；
m2——实验室样品质量的数值，单位为克（g）；
M——还原糖（3/20C6H12O6）的摩尔质量的数值，单位为克每摩尔（g/mol）（M=27）。
8 干燥减量的测定
8.1 仪器和设备
恒温干燥箱。
8.2 分析步骤
称取约1.0g实验室样品细粉，精确至 0.000 1g，置于已经在 105 ±2干燥至恒重的称量瓶中，精密称定，再置 105 ±2恒温干燥箱内干燥至恒重，从减失的质量和称样量计算样品的干燥减量。
8.3 结果计算
葡萄糖酸钙干燥减量的质量分数 w3，数值以 %表示，按公式计算

式中：
M0——称量瓶的质量的数值，单位为克（g）；
M3——称量瓶和干燥前实验室样品质量的数值，单位为克（g）；
M4——称量瓶和干燥后实验室样品质量的数值，单位为克（g）。
9 重金属的测定
9.1 试剂和材料
9.1.1 硝酸。
9.1.2 甘油。
9.1.3 乙酸铵。
9.1.4 硝酸铅。
9.1.5 硫代乙酰胺。
9.1.6 盐酸溶液：c（HCl）=2 mol/L。
9.1.7 氨水溶液：c（NH3·H2O）=5 mol/L。
9.1.8 氢氧化钠溶液：c（NaOH）=1 mol/L。
9.1.9 盐酸溶液：c（HCl）=7 mol/L。
9.1.10 乙酸盐缓冲液（pH3.5）：称取25 g乙酸铵，精确至0.01 g，加25 mL水溶解后，加7 mol/L盐酸溶液38 mL，用2 mol/L盐酸溶液或5 mol/L氨水溶液准确调节 pH至3.5（pH计），用水稀释至 100 mL。
9.1.11 硫代乙酰胺试液：称取4 g硫代乙酰胺，精确至 0.01 g，加水使溶解成 100 mL，置冰箱中保存。临用前取5.0 mL混合液（由15 mL 1 mol/L氢氧化钠溶液、5.0 mL水及20 mL甘油组成），加上述1.0 mL硫代乙酰胺溶液，置水浴上加热20s，冷却，立即使用。
9.1.12 铅标准溶液：称取 0.160 g硝酸铅，精确至 0.000 2g,置于1000 mL容量瓶中，加硝酸5 mL与50 mL水溶解后，用水稀释至刻度，摇匀，作为贮备液。临用前，移取 10 mL±0. 02mL贮备液，置于 100 mL容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得（每 1mL相当于10 μg的Pb）。配制与贮存用的玻璃仪器均不得含铅。
9.2 分析步骤
按《中华人民共和国药典》 2005年版二部附录 Ⅷ H 重金属检查法第一法进行。具体方法如下：
取 25 mL纳氏比色管两支，甲管中加入 1 mL±0.01mL（含铅 10.0μg）铅（Pb）标准溶液与 2 mL乙酸盐缓冲液后，加水稀释成 25 mL，另称取 1 g实验室样品，精确至 0.01 g，置于纳氏比色管乙管中，加 20 mL水，微热溶解后，放冷，加 2 mL乙酸盐缓冲液（ pH3.5），用水稀释成 25 mL，若该溶液带颜色，可在甲管中滴加少量的稀焦糖溶液或其他无干扰的有色溶液，使之与乙管一致；再在甲乙两管中分别加硫代乙酰胺试液各 2 mL，摇匀，放置 2min，同置白纸上，自上向下透视，乙管中显出的颜色与甲管比较，不得更深。
10 砷的测定（砷斑法）
称取 1g±0.01g实验室样品，加盐酸试剂 5mL，再加水至 30 mL溶解后，按 GB/T 5009.76砷斑法测定，量取 2mL±0.02mL砷标准溶液（含砷 2.0 μg），制备砷限量标准。
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