免疫实验1.ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,实 验 一,1.,免疫血清的制备与应用（一）：家兔皮内注射羊红细胞悬液,2.,吞噬细胞吞噬功能检测,3.,免疫器官的组织,结构观察,潍坊医学院免疫学教研室,林志娟,Tel:[phone],Email:myx,实验室规则,1,上实验课时，穿好隔离衣。,2,实验室内要保持肃静和秩序，不得谈笑或,随处走动，,少说、多,做、多想,。,3,实验室内禁止饮食和吸烟，关闭通讯工具。,4,用过的实验材料，放于指定地点，不得随意抛置。,5,注意节约实验试剂，爱护实验器材（显微镜的使用）。,6,易燃物品（如酒精等）不准接近火源。,7,实验结束后,，以小组为单位将,实验台整理清洁，值日同学打扫好室内卫生并检查水、电等开关是否关好，离开实验室要关好门窗。,养成良好的习惯,Part I,免疫血清的制备与应用,（,一,）：免疫,注射,【,原理,】,将适当的抗原物质注入动物体内，经过一定时间后，动物血清中可以产生大量的特异性抗体，这种含有特异性抗体的血清称为免疫血清。,优质免疫血清的产生，主要取决于,抗原的纯度,和,免疫原性,，以及,动物的应答能力,。此外，尚需考虑免疫途径、抗原剂量、注射次数、时间间隔、有无佐剂等因素。,抗体（,Ab,、溶血素）,浆细胞,B,细胞,流程：,制备抗原,免疫动物,采血、分离血清,纯化、鉴定,分装、保存,【,步骤,】,1.,备皮：,家兔,背部剪毛。,2.,消毒：碘酒棉球、酒精棉球。,3.,抽取,0.5,1.0mL,绵羊红细胞悬液，,在瓶内排,出气体。,4.,针头斜面向上，刺入,皮内,后平行进针使针头没入，推注,0.1ml,羊红细胞悬液。,5,6,点注射。,5.,注射器以及消毒棉球弃掉，将家兔放回笼子。,Rabbit handling and restraint,Part II,吞噬细胞吞噬功能检测,【,原理,】,：,机体内的吞噬细胞具有吞噬大颗粒异物的特性，受到趋化因子的趋化作用可以到达炎症部位，对细菌等异物进行吞噬和消化。,巨噬细胞：大吞噬细胞（长寿）,中性粒细胞：小吞噬细胞（短寿）,动物：小白鼠。,试验器材：剪刀、镊子、注射器、解剖板、瑞氏染液、载玻片、显微镜等。,抗原：白葡菌菌液。,【,材料,】,Mouse handling and manual restraint,Intraperitoneal injection of mouse,1.,取已注射过淀粉肉汤的小白鼠一只，取白葡菌菌液,0.5ml,注入其,左下腹腔,，轻揉腹部。,2.,30min,后，将小白鼠拉颈处死，固定，打开腹腔，用玻片在暴露的肠管上印片，自然晾干。,3.,滴加,3,5,滴瑞氏染液于印片上，,半分钟,后加等量蒸馏水，混匀染色,5min,（一直保持湿润）。自来水冲洗，滤纸吸干。,4.,显微镜下观察。,5.,交回实验器材，最后将小鼠，玻片弃掉。,【,步骤,】,吞噬有细菌的吞噬细胞,吞噬细胞的百分率,100,个吞噬细胞,100,吞噬指数,100,个吞噬细胞中所吞噬的细菌总数,100,2.,计算：,1.,巨噬细胞的吞噬现象：高倍镜下可见大量巨噬细胞，胞浆内数量不等的蓝色细菌。淀粉肉汤已经注射,23,天，游走至肠管外的中性粒细胞因为寿命短多已死亡。,【,结果,】,1.,小鼠的抓法，拉颈处死手法，不能伤害动物；,2.,右侧腹腔注射易伤及肝脏；开腹时正中皮肤剪开，沿腹白线，,避免伤及血管,；印片时避免印到肝脏上；,3.,瑞氏染液与蒸馏水等量，染液完全覆盖印迹，并,防止干片,；,4.,显微镜的使用。,5.,用品放入指定地点,，注意个人防护。,【,注意事项,】,瑞氏染色,10 40,瑞氏染色,10 40,Part,免疫器官的组织结构观察,免疫系统,：机体执行免疫应答和免疫功能的重要系统。,免疫器官 骨髓、,胸腺、淋巴结、脾脏,等；,免疫组织 淋巴小结、弥散的淋巴组织等；,免疫细胞,T,细胞、,B,细胞、,NK,细胞等；,免疫分子 抗原、抗体、细胞因子等。,免疫器官,法氏囊（,Bursa of Fabricius,）,免疫细胞,1.,胸腺（,Thymus,）,:,位于胸腔纵隔上部、胸骨后方，分左右两叶，青春期后开始缓慢退化。,胎儿胸腺,成人胸腺,胸腺的结构胸腺小叶,皮质 深皮质区和浅皮质区,胸腺细胞（未成熟T细胞）8590%,胸腺上皮细胞（TEC）,巨噬细胞（M,）,胸腺基质细胞（TSC）,树突状细胞（DC）,髓质,较成熟的胸腺细胞,胸腺上皮细胞（TEC）,单核巨噬细胞,树突状细胞（DC）,胸腺小体（赫氏小体）,胸腺基质细胞（,TSC,）,胸腺的结构,HE 100,胸腺小体的结构,HE 400,2.,淋巴结（,lymph node,）,皮质区：,初级淋巴滤泡：,浅皮质区：淋巴滤泡 静止,B,细胞,（淋巴小结）（非胸腺依赖区）,次级淋巴滤泡：生发中心，,增殖分化,B,细胞,深皮质区：,T,细胞，巨噬细胞，内皮细胞；,（胸腺依赖区）高内皮小静脉（,HEV,），淋巴细胞再循环,髓质区：,髓索：,B,细胞，浆细胞，部分,T,细胞和,M,髓窦：大量,M,淋巴结的结构,深（副）皮质区,淋巴小结,被膜下淋巴窦,被膜,淋巴结的结构,小结帽,：小淋巴细胞为主,明区,：中淋巴细胞为主,暗区,：大淋巴细胞为主,淋巴小结的结构,-,生发中心,淋巴结深皮质区的高内皮小,静脉,髓窦,髓索,淋巴结髓质的结构,3.,脾的基本结构,脾脏的基本结构,:,白髓,脾小体（,B,细胞区）,中央动脉与动脉周围淋巴鞘,红髓,边缘区（,T,、,B,、,M,）,脾血窦,脾索（,B,，浆细胞，,M,，,DC,）,脾脏的基本结构,:,红髓,试验报告：,1.,免疫血清的制,备的原理、免疫注射步骤,2.,吞噬细胞吞噬功能检测的原理、步骤及镜下观察结果。,（瑞氏染色 观察倍数）,3.,绘制免疫器官（脾脏，胸腺，淋巴结）的镜下观察结果。,（,HE,染色 观察倍数）,值日：,请,班干部排好值日生，清理实验桌面，清理显微镜，关掉显微镜开关。,医学免疫学实验报告,班 级,学 号,姓 名,实验室号,带教老师,上课周次,上课时间,实验报告,装订,成册，,以实验室为单位,于,周四,或,周一,交到,21206,房间。,注：实验成绩（实验报告,+,实验考试）计入期末考试成绩。,