【实验】DNA片段的扩增和琼脂糖凝胶电泳检测.ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,5.2多聚酶链式反应扩增DNA片段,课程标准,尝,试,PCR,技术的基本操作和应用。,课标解读,1.,理,解,PCR,技术的基本原理。,2.,知道,PCR,技术的基本操作过程。,3.,讨论,PCR,技术的应用。,参与的组分,在,DNA,复制中的作用,解旋酶,DNA,母链,4,种脱氧核苷酸,DNA,聚合酶,引物,打开,DNA,双链,提供,DNA,复制的,模板,合成子链的原料,催化合成,DNA,子链,使,DNA,聚合酶能够从引物的,3,端,开始连接脱氧核苷酸,细胞内,DNA,复制条件,DNA,复制方向,DNA,热变性,PCR,反应过程,PCR,反应过程,PCR,实验操作,1,实验用具,(1)PCR,仪,：该仪器能自动调控,，实现,DNA,的扩增。如果没有,PCR,仪，可用,3,个,代替，操作时按程序,来回转移,PCR,反应的微量离心管。,(2),微量离心管：总容积为,，实际上是进行,的场所。,(3),微量移液器：用于,。,温度,恒温水浴锅,0.5mL,多聚酶链式反应,转移,PCR,配方中的液体,(,将微量离心管放在离心机上，离心约,10 s,。目的是使反应液集中在离心管底部,),3.DNA,含量的测定,稀释,（,50,倍,）,对照调零,（,蒸馏水作对照,）,测定,（,取,DNA,稀释液,100,uL,）,计算,DNA,含量（,g,）,50 x(260nm,的读数）,x,稀释倍数,50,：,OD,260,=1,相当于,50,g,/ml,双链,DNA,概念：,PCR,全称为,_,，是一项,在生物,_,复制,_,的核酸合成技术,条件：,_,、,_,、,_,、,_,原理：,_,方式：以,_,方式扩增，即,_,（,n,为扩增循环的次数）,结果：,聚合酶链式反应,体外,特定,DNA,片段,DNA,复制,已知基因的核苷酸序列（前提）,四种脱氧核苷酸,一对引物,耐热的,DNA,聚合酶（,Taq,酶,）,指数,2,n,使目的基因的片段在短时间内成百万倍地扩增,PCR,总结,PCR,技术扩增与,DNA,复制的比较,PCR,技术,DNA,复制,相同点,原理,原料,条件,不同点,解旋方式,场所,酶,结果,DNA,双链复制,四种脱氧核苷酸,模板、能量、酶、引物,高温下变性解旋,解旋酶,体外,细胞核内,热稳定的,DNA,聚合酶,细胞内的,DNA,聚合酶,大量的,DNA,片段,形成整个,DNA,分子,1.PCR,技术是体外酶促合成特异,DNA,片段的一种方法,，有关,叙述不正确的是,(,),A,PCR,技术是在实验室中以少量,DNA,制备大量,DNA,的技术,B,反应中新合成的,DNA,又可以作为下一轮反应的模板,C,PCR,技术中以核糖核苷酸为原料，以指数方式扩增,D,应用,PCR,技术与探针杂交技术可以检测基因突变,C,2.(2011,江苏,),请,回答有关问题。,1),利用,PCR,技术扩增目的基因，其原理与细胞内,DNA,复制类似,(,如下图所示,),。图中引物为单链,DNA,片段，它是子链合成延伸的基础。,从理论上推测，第四轮循环产物中含有引物,A,的,DNA,片段所占的比例为,_,。,在第,_,轮循环产物中开始出现两条脱氧核苷酸链等长的,DNA,片段。,15/16,三,2,）,设计引物是,PCR,技术关键步骤之一。某同学设计的两组引物,(,只标注了部分碱基序列,),都不合理,(,如下图,),，请分别说明理由。,引物,和引物,局部发生碱基互补配对而失效,引物,自身折叠后会出现局部碱基互补配对而失效,3)PCR,反应体系中含有热稳定,DNA,聚合酶，下面的表达式不能正确反映,DNA,聚合酶的功能，这是因为,_,_,_,。,DNA,聚合酶只能将单个脱氧核苷酸连续结合到双链,DNA,片段的引物链上,