常用细菌生化反应试验(课堂PPT).ppt

,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,常用细菌生化反应试验,1,糖醇类代谢试验,糖发酵试验,甲基红试验,V-P,试验,葡萄糖氧化发酵试验（,O/F,试验）,七叶苷水解试验,半乳糖苷渗透酶试验,2,糖发酵试验,原理,多糖,单糖,丙酮酸,酸性产物,(,或产酸产气,),pH,指示剂呈酸性变色,(,若产气者有气泡出现,),培养基：糖发酵管、半固体发酵管、微量发酵管,试剂：酚红、溴甲酚紫等,结果,:,培养基呈酸性变色,应用：观察细菌对糖度的 分解情况，常用于肠道杆菌的鉴定,3,糖发酵试验结果判断,反应现象,结果描述,酸性,变色,、有气泡,分解,糖产酸、产气,酸性,变色,、无气泡,分解,糖产酸、不产气,培养基不变色,不分解,糖,4,甲基红试验,原理：细菌分解糖，产生丙酮酸，进一步生成大量混合酸，使培养基,pH,维持在,4.4,以下，加入甲基红后，使甲基红呈现红色反应。此为甲基红试验,阳性。,培养基：葡萄糖蛋白胨水,试剂：甲基红试剂,结果：加入试剂后，培养基呈现,红色,：,+,培养基不变色：,应用：是肠道杆菌常用的生化反应试验，主要用于区别大肠肝菌和产气肠杆菌,5,伏普试验（,V-P,试验）,原理：细菌发酵葡萄糖，产生丙酮酸，丙酮酸脱羧生成乙酰甲基甲醇，在碱性环境中乙酰甲基甲醇被氧化为二乙酰，二乙酰与蛋白胨中的精氨酸所含的胍基结合，生成红色化合物。,培养基：葡萄糖蛋白胨水,结果：加入试剂后，培养基呈现,红色,：,+,培养基不变色：,应用：是肠道杆菌常用的生化反应试验，主要用于区别大肠肝菌和产气肠杆菌,6,葡萄糖,丙酮酸,大量混合酸,pH,降至,4.4,以下,甲基红试剂,培养基,变红,甲基红试验,7,葡萄糖,丙酮酸,乙酰甲基甲醇,二乙酰,V-P,试剂,培养基,变红,V,P,试验,脱酸,8,葡萄糖发酵形成丙酮酸后的不同代谢途径,葡萄糖,丙酮酸,大量混合酸,pH,降至,4.4,以下,甲基红试剂,培养基,变红,乙酰甲基甲醇,二乙酰,V-P,试剂,培养基,变红,脱酸,9,蛋白质类代谢试验,靛基质试验,硫化氢试验,苯丙氨酸脱氨试验,尿素酶试验,10,靛基质试验,原理：细菌产生色氨酸酶，可分解蛋白胨中的色氨酸，生成靛基质（吲哚），靛基质与试剂对二甲基氨基苯甲醛作用，生成玫瑰靛基质。,培养基：蛋白胨水,试剂：靛基质试剂（含对二甲基氨基苯甲醛）,结果：加入试剂后，培养基出现红色液面：,+,培养基液面为黄色：,应用：用于肠道杆菌的鉴定,11,靛基质试验原理,色氨酸酶,色氨酸,靛基质,（吲哚）,玫瑰靛基质,（玫瑰吲哚）,对二甲基氨基苯甲醛,12,硫化氢试验,原理：细菌分解蛋白质中的含硫氨基酸，生成硫化氢，硫化氢与培养基中的铁盐或铅盐结合生成黑色络合物。,培养基：含硫酸亚铁或醋酸铅的培养基,结果：培养基 变黑,为阳性，不变黑为阴性,应用：常用于肠道杆菌的鉴定,13,苯丙氨酸脱氨实验,原理：细菌的具有的苯丙氨酸脱氨酶，可使培养基中的苯丙氨酸脱氨，形成苯丙酮酸，后者与三氯化铁作用，形成绿色化合物。,培养基：苯丙氨酸琼脂,试剂：,10,三氯化铁,结果：加入试剂后培养基呈现,绿色,为阳性,应用：多用于肠道杆菌的鉴定,14,苯丙氨酸脱氨试验原理,苯丙氨酸,苯丙氨酸脱氨酶,苯丙酮酸,10,三氯化铁,绿色化合物,15,尿素酶试验,原理：产生脲酶的细菌，能水解尿素生成氨和,CO2,，氨使培养基呈碱性变色。,培养基：尿素培养基,试剂：酚红指示剂,结果：培养基变红：,+,培养基不变色,应用：肠杆菌科属间鉴定,16,尿素酶试验原理,尿素,尿素酶,氨,+CO2,培养基,pH,升高,酚红呈碱性变色,17,枸橼酸盐利用试验,原理：某些细菌能力利用培养基中的枸橼酸盐作为唯一的碳源，也能利用其中的铵盐 作为唯一碳源，细菌生长过程中分解枸橼酸盐产生碳酸盐和分解铵盐生成的氨，使培养基变碱，是指示剂呈碱性反应。,培养基：枸盐酸盐培养基,试剂：溴麝香草酚蓝（,pH6.0,以下呈黄色，,pH7.6,以上呈蓝色）,结果：培养基变蓝：,+,培养基不变色：,应用：肠杆菌科属间鉴别,18,枸橼酸盐利用试验原理,枸橼酸盐,铵盐,碳酸盐,氨,培养基,pH,下降,溴麝香草酚蓝,呈碱性变色,培养基变蓝,培养基,19,糖发酵试验,20,甲基红试验,21,靛基质试验,22,血清学试验,血清学鉴定：,用已知抗体鉴定未知的细菌或标本中的抗原,血清学诊断：,用已知抗原检测血清中的特异性抗体,23,血清学鉴定,试剂（诊断血清）：含抗体,检测对象：特异性抗原,方法：直接凝集试验（玻片法）、荚膜肿胀试验,伤寒杆菌诊断血清,（含抗伤寒杆菌抗体）,+,待检测细菌,细菌凝集,玻片凝集试验,：阳性,报告：,检出伤寒杆菌,24,血清学诊断,试剂：含已知抗原,应用：检测待检者血清中有无相应的抗体以及抗体的效价,25,