阴道分泌物检查(课堂PPT).ppt

单击此处编辑母版标题样式,*,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,孕前优生健康检查临床检验操作技术培训,河南省人口和计划生育科学技术研究院,阴道分泌物检查,1,阴道分泌物,是女性生殖系统分泌的液体，俗称“白带”。,主要来自：阴道粘膜、宫颈腺体、前庭大腺及子宫内膜的分泌物等参与。,常用于女性生殖系统炎症、肿瘤的诊断及雌激素水平的判断。,2,一般性状检查,正常阴道分泌物为白色稀糊状，一般无气味，量多少不等，与雌激素水平高低及生殖器充血情况有关。,排卵期白带量又增多，清澈透明，似稀薄的鸡蛋清。排卵期后2-3天白带浑浊粘稠量少，行经前量又增加。妊娠期白带量较多。,3,白带异常色、质、量,大量无色透明粘白带：雌激素药物后卵巢颗粒细胞瘤。,脓性白带：,黄色或黄绿色有臭味，多为阴道毛滴虫或化脓菌感染引起。,泡沫状脓性白带，常见于滴虫性阴道炎。,4,其他脓性白带常见于慢性宫颈炎、老年性阴道炎、子宫内膜炎、宫腔积液、阴道异物等。,豆腐渣样白带：为霉菌性阴道炎所特有，常伴有外阴瘙痒,5,血性白带：白带内混有血液，量多少不等，有特殊臭味。应警惕恶性肿瘤的可能，如宫颈癌、宫体癌等。有时某些宫颈息肉、子宫黏膜下肌瘤、宫颈炎、老年性阴道炎、宫内节育器引起的副反应等也可在白带中见血。,黄色水样白带：往往由于病变组织的变性、坏死所致。常发生于子宫内膜下肌瘤、子宫颈癌、子宫体癌等。,6,PH值：,正常阴道分泌物呈酸性，PH值在45.5，PH值增高见于各种阴道炎、幼女和绝经的妇女。,滴虫性阴道炎PH值增高为5.56.0,7,阴道分泌物取材,女性下生殖道标本采集的部位取决于症状和所感染的疾病：,1、宫颈和宫颈内部：淋病奈瑟氏菌，沙眼衣原体，人乳头瘤病毒,2、阴道高位拭子：念珠菌，阴道毛滴虫，细菌性阴道炎,3、肛门或直肠拭子：淋病奈瑟氏菌，B-群链球菌（+阴道拭子）,8,实验物品,器材：光学显微镜、载玻片、盖破片,试剂：生理盐水,标本来源：,由妇产科医师采集,9,操作步骤：,湿片显微镜检查：,清洁度检查：将阴道分泌物加一滴生理盐水涂片，先用低倍镜观察，再用高倍镜检查。,根据上皮细胞、白细胞（或脓细胞）、杆菌、球菌的多少分清洁度。,10,阴道分泌物涂片清洁度判断表,清洁度,杆菌,球菌,上皮细胞,白细胞或脓细胞,I,多量,几乎无,满视野,0-5/HPF,II,减少,可见少量,1/2视野,5-15/HPF,III,更少,多量,少量,15-30/HPF,IV,几乎无,大量,几乎无,30/HPF,11,临床意义,清洁度：I-II度，无病原微生物。,阴道分泌物涂片清洁度III-IV度为异常，见于阴道炎，如淋菌性阴道炎、真菌性阴道炎、滴虫性阴道炎这三者可分别查到淋病奈瑟菌、真菌和滴虫。,非特异性阴道炎常见的致病菌为葡萄球菌、链球菌、大肠埃希菌等。,12,阴道毛滴虫检查,与清洁度检查同时进行。,低倍镜观察时，若发现有比白细胞大2-3倍，能活动的小球状物，再用高倍镜观察其形态。,阴道毛滴虫呈梨形、透明、无色，前1/3处有一椭圆形细胞核，一根细长的轴住由前向后贯穿虫体并伸出体外，有四根前鞭毛和一根后鞭毛，体侧有波动膜，在25-42度下可活动。,13,阴道毛滴虫梨形、有鞭毛、运动,14,阴道霉菌检查,同阴道毛滴虫检查。,混匀并加盖玻片，先以低倍镜观察，若发现有菌丝样物，再转高倍镜检查。,如见到单个或成群卵圆形、无色透明的孢子，常为芽生或多个连成状分支状即可报告 霉菌：“阳性”。,15,真菌菌丝与孢子,16,17,18,19,20,线索细胞,线索细胞为阴道鳞状上皮细胞黏附大量加德纳式菌及其他短小杆菌形成。,高倍镜下可见该细胞边缘呈锯齿状，细胞有溶解，细胞核模糊不清，其上覆盖大量加德纳式菌及厌氧菌，使其表面毛糙，出现斑点和大量的细小颗粒。,线索细胞是诊断细菌性阴道病的重要指标，当线索细胞占全部上皮细胞的20%以上时报告线索细胞阳性。,21,线索细胞湿片与染片,22,23,质量控制,阴道分泌物检查中最重要的是取材正确、送检及时；否则阴道毛滴虫会死亡。,阴道毛滴虫活动的最适温度为25-42度，递送标本时要注意保温。,注意因生理盐水污染，造成对实验的干扰，生理盐水应一周更换一次。,24,淋病奈瑟氏菌检测,25,简介,淋病奈瑟氏菌，属奈瑟氏菌属。,奈瑟氏菌属（Neisseria）是一群触酶、氧化酶阳性的革兰氏阴性球菌，包括脑膜炎奈瑟氏菌、淋病奈瑟氏菌、乳糖奈瑟氏菌、灰色奈瑟氏菌、粘液奈瑟氏菌、多糖奈瑟氏菌、微黄奈瑟氏菌、干燥奈瑟氏菌等。,26,淋病奈瑟氏菌为淋病的病原菌，成人感染初期，一般引起男性尿道炎，附睾炎、前列腺炎、咽喉炎;女性尿道炎与子宫颈炎，若未经治疗，可扩散到两性生殖系统，引起慢性感染，亦是导致不育及流产的原因之一；,新生儿经产道感染可引起淋菌性结膜炎，并可逐渐涉及全眼，常致失明。,27,淋病奈瑟氏菌形态与染色,为革兰氏阴性双球菌（粉红色）。,形态呈园形，卵园形或肾形，常成对排列，邻近面扁平或略凹陷，形似一对咖啡豆。,大小为0.6um*0.8um，无芽胞和鞭毛，一般无芽膜，有菌毛。,28,29,培养特性与生化反应,专性需氧，营养要求高，一般多用,巧克力琼脂平板，初次分离培养时需在5%-10%二氧化碳条件下，孵育48小时后形成圆形、凸起、灰白色的光滑形菌落，只分解葡萄糖产酸，而部分解麦芽糖等糖类。,30,抵抗力,极弱，对干燥、热、冷极敏感，在干燥的环境中，仅存活1-2小时，湿热55摄氏度仅存活5分钟。,在患者分泌物污染的衣裤、被褥及厕所上，能存活24小时。,对消毒剂极敏感，如用1：4000硝酸银作用2分钟即可杀死淋病奈瑟氏菌；对多种抗生素敏感，但易产生耐药。,31,免疫性,人体对淋病奈瑟氏菌无自然抵抗力，普遍易感。,病后免疫力不强，体内虽出现IgG、IgM抗体，但不能防止再次感染和慢性感染。,32,直接涂片染色,取患者尿道分泌物或宫颈分泌物，新生儿取结膜分泌物作革兰氏染色，在多形核白细胞内找到革兰氏阴性双球菌。,涂片对有大量脓性分泌物的单纯淋菌性前尿道炎患者，此法阳性率在90%左右，可以初步诊断。,33,女性宫颈分泌物中杂菌多，敏感性和特异性较差，阳性率仅为50-60%，且有假阳性。,因此确诊淋病奈瑟氏菌必须：,1、直接涂片，镜检可见多形核白细胞内有革兰氏阴性双球菌。,2、淋病奈瑟氏菌培养阳性。,34,男性慢性淋病由于分泌物中淋病奈瑟氏菌较少，阳性率低，因此要取前列腺按摩液，以提高检出率。,咽部涂片发现革兰氏阴性双球菌不能诊断淋病，因为其他奈瑟氏菌属在咽部是正常菌群。,另外对症状不典型的涂片阳性应做进一步检查。,35,白细胞内的革兰氏阴性双球菌,36,37,镜检与结果报告,阳性：革兰氏染色显微镜下为革兰氏阴性双球菌，呈双肾形成对排列。,结果报告：细胞内可见革兰氏阴性双球菌。,注意：,镜检见到白细胞内或外见到或未见到革兰氏阴性双球菌，不能直接报告见到淋病双球菌。,38,淋球菌检测的其他方法培养检查法,培养法对症状很轻或无症状的男、女性病人都是较敏感的方法，只要培养阳性就可确诊。,国内采用巧克力琼脂培养基，含抗生素，可选择地抑制其他细菌生长。在36，70%湿度，含5%-10%CO2环境中培养，24-48小时观察结果。,培养后还需进行菌落形态，革兰氏染色，氧化酶试验和糖发酵试验等鉴定。,培养阳性率：男性80%-95%，女性80-90%,39,40,免疫反应法,固相酶免疫试验（EIA）：,可用来检测临床标本中的淋病奈瑟氏菌抗原，在流行率很高的地区而又不能做培养或标本需要长时间远送时使用，可以在妇女人群中用来诊断淋病奈瑟氏菌感染。,41,胶体金法,原理：采用胶体金作为标记，交联抗-淋病奈瑟氏菌单克隆抗体与泌尿系统标本中淋病奈瑟氏菌菌体抗原结合，形成夹心一步法。,42,操作步骤,准备试剂，平衡至室温；,将已取样棉签放置采集管中，往采集管中加5-6滴稀释液；,将测试条有箭头的一端插入样品采集液中，约10秒钟后取出平放，10-20分钟观察测试条的显色结果；,结果判定：,阴性：测试区中只有红色对照线出现。,阳性：测试区中有红色对照线和检测线先后出现。,43,生化酶法,原理：,淋球菌具有一种特异性酶反应测定系统，当标本中含有此酶时，会发生生化反应，同时伴有气泡产生。,44,检验方法,1取一个本产品所配的反应试管，加约2ml（约在试管刻度下1mm处）标本（若为尿，直接使用；若为分泌物，需用无菌生理盐水涮洗至试剂盒所配的反应试管中，弃去拭子）。,2直滴加试剂3滴，塞紧管塞，轻轻摇匀；,3放置5分钟后（轻度病人可延至10分钟），再轻轻摇匀一次（若已产生气泡不必再摇），观察反应试管内,尿液上部气泡形成情况，20分钟后的结果无效。,45,检验结果的解释,液面上部形成一层白气泡或液面上层管壁形成一圈细小的白气泡，即可判为阳性；液面无气泡或气泡较少，未形成一圈，即可判为阴性。,46,注意事项,1本产品应由专业检测人员使用，在室温（1530）和相对湿度（65%20%）下操作。,2滴加试剂时，试剂滴瓶应垂直。,3临床的诊断与治疗，不能依赖单一检测结果，由于本产品为一种快速筛选试剂（非确诊试剂），灵敏度较高，因此对于检测结果阳性者应考虑患者的性接触史及临床症状，综合判断，建议选用淋球菌培养基做细菌培养进行确认。,4操作时应带手套，试剂勿与皮肤、眼接触，一旦接触可用大量清水冲洗。,47,5每次测试时，应注意反应试管的管塞是否塞紧，否则影响结果。,6加入试剂后必须在20分钟内观察结果，否则整个试验要重做。,7尿液标本应在1小时内测定，否则可能影响结果，应重新取样。,8阳性试验用过的反应管在处理之前，应打开管塞，否则阳性反应产生的气体可能迸开管塞，管内液体污染实验室。,9所用标本及其培养废弃物应视为有潜在传染性的物质，应按传染病实验室操作规范处理。,48,革兰氏染液的组成,1、结晶紫液,2、卢戈氏碘液,3、95%乙醇,4、稀释石碳酸复红溶液,49,革兰氏染色流程,1、晾干：让涂片在空气中自然干燥。,2、固定：让菌膜朝上，通过火焰2-3次固定（以不烫手为宜）。,3、染色：在固定过的涂片上滴加草酸铵-结晶紫液，染10秒。用水缓慢冲洗涂片上的染色液，用吸水纸吸干。,50,4、媒染：滴加1滴碘液，染10秒，水洗。,5、脱色：吸水纸吸去残留水，连续滴加95%乙醇脱色10-20S至流出液无紫色,立即水洗。,6、复染：滴加复红复染10S，水洗。至此，革兰氏染色结束。,51,注意事项,*染液注意密封，以免凝结产生沉淀影响使用效果。,*取样时不论男女尿道及子宫颈均需用拭子插入尿道及子宫颈3cm深取样送检，要避免受阴道分泌物污染拭子。,52,*体液标本均应离心后取下层沉淀液与染液混合，以提高检出率。,*对于不能及时送检的样本应常温保存，不可以冷藏。,*提高责任心，做到全片检查。,53,油镜检查的方法,（1）上升聚光器，全开虹彩光圈。,（2）用粗调节轮提起镜筒或下降载物台，转动转换器将油镜转至镜筒正下方。在玻片标本的镜检部位滴上一滴香柏油。右手顺时针方向慢慢转动粗调节轮使镜筒下降或载物台上升，与此同时，从显微镜的侧面观察使油镜侵入油中，直到几乎与标本接触时为止。注意不要压到标本，以免压碎玻片，甚至损坏镜头。,54,（3）从接目镜内观察，进一步,调节光线，使光线明亮，再用粗,调节轮将镜筒徐徐上升或将载物,台徐徐下降，直到视野内出现物,像为止，然后用细轮校正焦距。,如油镜已离开油面而仍未见物象，,必须再从侧面观察，将油镜降下，,重复操作至物象看清为止。,55,显微镜的保养,1、油镜使用完毕，先用擦镜纸擦去镜头上的油，再取一张擦镜纸，滴上少量的脱油剂擦拭，然后再取另一张新擦镜纸将镜头上残留的脱油剂擦净。否则粘固透镜的胶质会被脱油剂溶解，日久镜片易移位脱落。,2、下降聚光器，打开虹彩光圈，使反光镜垂直于镜座，以免积聚灰尘。,56,阴道分泌物沙眼衣原体检测,57,沙眼衣原体感染症,沙眼衣原体沙眼、性病淋巴肉芽肿,（Ctrachomatis，CT）,鹦鹉热衣原,（C.passitaci）,肺炎衣原体,（C.pneumoiae）,58,59,沙眼衣原体包涵体,60,沙眼衣原体检测的临床意义,沙眼衣原体（CT）感染可以引起多种疾病。沙眼衣原体是几种性传播疾病的病原因子，沙眼衣原体感染已成为主要的性传播疾病之一，在非淋性尿道炎中约占40-60%。检测分泌物中的沙眼衣原体，可作为沙眼衣原体所致上生殖道或播散性感染。,61,沙眼衣原体感染可引起男性尿道炎、睾丸炎和附睾炎，女性尿道炎、宫颈炎和输卵管炎，新生儿包涵体结膜炎和婴幼儿阶段性肺炎，以及不孕不育、流产等。,所以，国内外已将衣原体感染检测作为生殖泌尿系统症状（包括不育、不孕、孕前、产前、人流前等）必检项目。,62,标本的采集,女性子宫颈棉拭标本的采集,用一支棉拭或棉球去除外宫颈（子宫颈阴道部）处多余的粘液，然后丢弃。另用一支棉拭深入子宫颈内膜，滚动10-30秒。将棉拭放回转载移试管，并在标签上注明病人身份和日期。,带标本的棉拭可在常温下送检，不应使用转移媒体。如标本不在1天内接受检测，应将其冷藏（2-8度），不要冷冻，这样最多可保持5天。,63,男性尿液标本的采集,病人在标本采集之前一小时内不应小便。使用洁净而干燥的容器采集大约20-30毫升的“初射”尿液。,如尿液不能在6小时接受检测，应将其冷藏（2-8度），不要冷冻，这样最多可保持5天。,64,检测方法,沙眼衣原体的检测方法比较多，有培养法、免疫荧光法、PCR法和胶体金法等。,65,胶体金法：,又称免疫层析法,检测原理：标本与提取液在80下加热10-12分钟后，即可提取衣原体抗原。,66,条件：,离心机、加样器、加热器等设备。,操作步骤：,准备试剂，平衡至室温,准备水浴箱至80,提取衣原体抗原：取0.6ml试剂并加入试管。,67,蜗旋混合至少30S。将重新悬浮的颗粒移至一支试管中，将试管放入水浴锅（80）加热10-12分钟后，取出提取试管，室温下冷却5分钟。,检测：取出检测块将其水平放置。将滴管附件盖在提取试管上，向检测块的标本窗滴上5滴提取液。15分钟后读取结果。,68,结果判定,阳性：控制窗内有一条线出现，同时在结果窗内有一条线出现，即表示检测结果为阳性。,阴性：控制窗内有一条线出现，但结果窗内无线条出现，即表示检测结果为阴性。,69,无效结果：控制窗内有一条线出现，即表示检测过程中操作正确无误，所有未能在15分钟后在,控制窗显示一条,线的检测块，其,检测结果均属无,效。,70,生化反应法：,检验原理：根据,沙眼衣原体侵入,上皮细胞而产生,的糖原结构，在,酸性条件下选用,蒽酮试剂与之发,生生化反应，并,发生颜色变化。,71,检验方法：,取分泌物拭子加于反应管中，搅拌35下，弃拭子，3000转离心10分钟，弃上清（可轻轻甩去，但勿把沉淀甩出），倒置于吸水纸上空干。,往反应管内的沉淀物中加10滴显色剂，摇匀，置80温育10分钟，观察颜色变化。,72,检验结果的解释：,对照比色卡：,颜色由黄色变成绿色或蓝色，即可判断为阳性。,颜色保持浅黄色不变或变成其他色如粉红色等，即可判断为阴性。,73,检验方法的局限性,由于女性经期和孕期的分泌物中糖原成分显著增加，若不慎重使用这时期标本可能产生假阳性结果，因此应避开经期和孕期；,试验表明，霉菌对检测可能产生假阳性结果。,74,注意事项,本产品在室温下操作，使用完毕剩余试剂应置28贮存。,由于沙眼衣原体寄生于上皮细胞内，故采样时必须采到上皮细胞。,滴加显色剂时，滴瓶应垂直，如果发现显色剂颜色变黑，则不可使用。,本产品含有强酸碱，使用时要注意其腐蚀性。,75,质量控制,衣原体的生物活性不稳定，实验室检验的标本需要低温储存，并且应缩短采集与检测之间的时间差。,如标本不在1天内接受检测，应将其冷藏（2-8度），不要冷冻，这样最多可保持5天。,对于脓性排泄物样本，在采集时应对患处进行清洗后再采取标本。,76,谢 谢 大 家！,77,