肉毒梭菌专题知识讲座.pptx

#,肉毒梭菌专题知识讲座,肉毒梭菌专题知识讲座,第1页,2,、培养特征,最严格厌氧菌,生长最适温度：,28,37,：,pH,为,6.87.6,，产毒最适,pH,为,7.8 8.2,。,产毒培养温度：不一样菌型产毒最适培养温度不完全相同。,C,、,D,型温度高些为宜，,35,培养,3d,即可，而,E,型菌低温度长时间培养效果很好。,对营养要求不高：在普通培养基上都能生长。,肉毒梭状芽孢杆菌菌落,在固体培养基表面上，形成类圆形，边缘不整齐，约,3,毫米左右菌落。菌落半透明，表面普通比较光滑也有呈颗粒状，界限不显著，向外扩散。呈绒毛网状，经常扩散成菌苔。,肉毒梭菌专题知识讲座,第2页,2,、培养特征,在含有肉渣液体或者半流动培养基中，肉毒梭菌生长旺盛且产生大量气体，,A,、,B,、,F,三型表面浑浊，底部有粉状和颗粒状沉淀，并能消化肉块，变黑有臭味；而,C,、,D,、,E,三型表明清亮，絮片状生长，粘贴于管壁。,肉毒梭状芽孢杆菌菌落,在葡萄糖鲜血琼脂平板上，菌落较小，扁平，颗粒状。中央低落，边缘不规则，有菌落还有大溶血环。,在卵黄琼脂平板上生长，菌落及其培养基周围表面覆盖着特有彩虹样薄层，但,G,型没有。,肉毒梭菌专题知识讲座,第3页,肉毒梭菌生化性状很不规律，即使同型，也常见到株间差异。,3,、肉毒梭菌生化特征,表,1,各型肉毒梭菌生化反应,肉毒梭菌专题知识讲座,第4页,二、,肉毒梭菌致病性,肉毒梭菌能产生,外毒素,即肉毒毒素（大分子蛋白），依据毒素抗原特异性将其分为,A,、,B,、,C,（,1,、,2,）、,D,、,E,、,F,、,G,七个型别。与毒素型别相对应，肉毒梭菌也分为一样七个型别。,其中,A,、,B,、,E,、,F,四型毒素对人有不一样程度致病性。,A,型毒素经,60,2,分钟加热，差不多能被完全破坏，而,B,、,E,二型毒素要经,70,2,分钟才能被破坏；,C,、,D,二型毒素对热抵抗更大些；,C,型毒素要经过,90,2,分钟加热才能完全破坏，不论怎样，只要煮沸,1,分钟或,75,加热,5,10,分钟，毒素都能被完全破坏。肉毒毒素对酸性反应比较稳定，对碱性反应比较敏感。一些型肉毒毒素在适宜条件下，毒性能被胰酶激活和加强。,肉毒梭菌专题知识讲座,第5页,致病机理,肉毒毒素是一个神经麻痹毒素，主要抑制神经末梢释放乙酰胆碱，引发肌肉松弛麻痹，尤其是呼吸肌麻痹造成死亡。,肉毒毒素毒性极强，是当前已知在天然毒素和合成毒剂中毒性最强生物毒素，据称，精制毒素,1,克能杀死,400,万吨小白鼠，一个人致死量大约,1,微克左右。,肉毒中毒一年四季均可发生。美国以罐头发生中毒较多，日本以水产品较多；我国以发酵食品（如：臭豆腐、豆瓣酱、豆豉等）发生中毒较多。,肉毒梭菌专题知识讲座,第6页,三、检验方法,1,、检验标准：,GB 4789.12-,2,、培养基和试剂,培养基：,庖肉培养基、卵黄琼脂培养基、明胶磷酸盐缓冲液。,试剂：,肉毒分型抗毒诊疗血清、胰酶（活力,1:250,）、革兰氏染色液。另需试验动物（小白鼠）。,肉毒梭菌专题知识讲座,第7页,3,、,检验程序,检 样,毒素检测,增菌、产毒培养,30,，,5 d,汇报,（一）,毒素检测,汇报（二）,分离培养,培养检验,毒素检测,汇报（三）,增菌产毒培养,30,，,5 d,观察生长性状，,染色镜检,观察菌落性状,染色镜检,汇报,(,一,),：,检样中有没有肉毒毒素以及有何型肉毒毒素。,(,如仅为了肉毒中毒诊疗，即可结束检验,),汇报,(,二,),：,对增菌产毒培养物，首先做生长特征观察，同时检测肉毒毒素。汇报检样中有没有肉毒梭菌以及有何型肉毒梭菌。（有些样品如土壤、泥沙等基础上不可能含有毒素，则应从培养着手）,汇报,(,三,),：,欲获纯菌株，可用增菌产毒培养物进行分离培养，对所得纯菌株进行形态、培养特征等观察及毒素检测，其结果可证实所得纯菌为何型肉毒梭菌。（普通情况下，没有必要从检样中分离纯菌株，但研究或特殊需要例外）,肉毒梭菌专题知识讲座,第8页,（,1,）、肉毒毒素检测,注射液中若有肉毒毒素存在，小白鼠普通多在注射后,24 h,内发病、死亡。,液态或固体（明胶磷酸盐缓冲液）样品经过适当处理后离心，取上清液试验,上清液及其胰酶激活处理液,分别进行小白鼠腹腔注射，各,3,只，每只,0.5 mL,，观察,4 d,确证试验,毒力测定,定型试验,肉毒梭菌专题知识讲座,第9页,取庖肉培养基三支，煮沸,10min,15min,，做以下处理：,第一支：,急速冷却，接种检样均质液,1 mL,2 mL,；,第二支：,冷却至,60,，接种检样，继续于,60,保温,10 min,，急速冷却；,第三支：,接种检样，继续煮沸加热,10 min,，急速冷却。,以上,3,支试管于,30,厌氧培养,5d,，若无生长，可再培养,10d,。培养到期，若有生长，取培养液离心，以其上清液进行毒素检测试验，方法同上，,阳性结果证实检样中有肉毒梭菌存在。,（,2,）、肉毒梭菌检出（增菌产毒培养试验）,肉毒梭菌专题知识讲座,第10页,选取证实含有肉毒毒素增菌产毒培养物（必要时可重复一次适宜加热处理）接种卵黄琼脂平板，,35,厌氧培养,48 h,。肉毒梭菌在卵黄琼脂平板上生长时，菌落及周围培养基表面覆盖着特有虹彩样,(,或珍珠层样,),薄层,，但,G,型菌无此现象。,依据菌落形态及菌体形态挑取可疑菌落，接种庖肉培养基，于,30,培养,5d,，进行毒素检测及培养特征检验确证试验。,（,3,）、分离培养,（,1,）毒素检测：试验方法同上。（,2,）培养特征检验：接种卵黄琼脂平板，分成两份，分别在,35,需氧和厌氧条件下培养,48 h,，观察生长情况及菌落形态。肉毒梭菌只在厌氧条件下生长而在需氧条件下不生长。,肉毒梭菌专题知识讲座,第11页,