免疫血液学实验的质量控制.pptx

,单击此处编辑母版标题样式,#,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,免疫血液学实验的质量控制,免疫血液学实验的质量控制,第1页,年卫生部颁布,血站试验室质量管理规范,对血站免疫血液学试验提出了详细要求,。,许多原因会影响免疫血液学试验结果：,仪设备器（离心机、冰箱、孵育箱、加样器）；检验试剂（定型血清、标准细胞、其它试剂）；试验方法（试验选择、对照试验、环境）；试验室相关文件（标准操作规程、标识、登记、统计、汇报）等影响。,怎样对相关原因进行控制以确保试验结果准确性和可靠性，对免疫血液学试验含有主要意义。,免疫血液学实验的质量控制,第2页,一、免疫血液学检测基础要求,1.,对血液免疫血液学检测项目、方法和结果判定标准以下：,ABO,血型判定,，检测方法为直接血凝试验，检测结果以正反定型相符合方可确定其血型。如正反定型不符，应作深入试验。,ABO,亚型判定,，检测方法为直接血凝试验、血凝抑制试验、吸收放散试验，依据病史和以上试验结果，确定被检者血型。,免疫血液学实验的质量控制,第3页,RH,系统血型判定,，检测方法为直接血凝试验或抗人球蛋白试验，检测结果以呈凝结反应为阳性，无凝结反应为阴性。,RH(D),阴性确认,，检测方法为血凝试验、抗人球蛋白试验，以三个不一样克隆株或不一样人,IgG,抗,D,血清进行检测，全部不凝为,RH,阴性，个别凝结为,D,变异型。,免疫血液学实验的质量控制,第4页,抗体筛选和抗体判定,，检测方法为直接血凝试验、抗人球蛋白试验、聚凝胺试验。检测结果呈无凝结反应，为抗体筛选阴性，反之，抗体阳性。并确定其特异性。,交叉配血,，检测方法为直接血凝试验、抗人球蛋白试验、聚凝胺试验。检测结果呈无凝结、无溶血反应为配合。,免疫血液学实验的质量控制,第5页,2.,对血液免疫血液学检测项目，应使用不一样厂商生产试剂，对每项试验均要作阴阳性对照。,3.,试验室基础设备应包含离心机、水浴箱、显微镜、各种冷冻冷藏设备及其它专用设备。集中化检测试验室应配置与其功效相适应检测设备。应对试验室关键设备进行确认，定时校准和维护。,免疫血液学实验的质量控制,第6页,4.,建立和实施试剂管理程序，包含：,4.1,试剂,评定程序,，包含生产商和供给商（国家要求对应）资质，试剂技术要求。,4.2,试剂,确认程序,，包含实施确认人员、方法、质量控制方法、接收标准、每批试剂投入使用前应进行确认。,4.3,试剂,库存管理程序,，应包含试剂贮存条件和库存量监控，试剂应在使用期内使用。,免疫血液学实验的质量控制,第7页,5.,建立和实施试验,室内部质量控制程序,，其基础要求以下：,5.1,在每次试验时，观查试剂是否有不正常,外观,，包含试剂红细胞有没有显著溶血或混浊：血清试剂无沉淀物和颗粒或胶状物形成。,5.2,在每项试验中，注意试剂,敏感性和特异性,：,ABO,正定型阴阳性对照细胞反应需清楚明确：反定型与抗,A,、抗,B,（抗,AB,）反应需清楚。,5.3 RH(D),血型试剂与已知阳性和阴性质控细胞反应清楚。,5.4,抗人球蛋白试验质控细胞与抗人球蛋白试剂反应有,1+,2,，与生理盐水反应阴性。,免疫血液学实验的质量控制,第8页,5.5,抗球蛋白试剂（抗,IgG,和抗,C3d,）应与任何,ABO,血型非致敏红细胞与相容血清孵育后无溶血和凝集反应；与被稀释抗,IgG(D),和红细胞敏感性凝集在显微镜下可见,1+,2+,。,5.6,抗体筛选和判定细胞（纯合子剂量效应），需用在生理盐水中反应弱抗,P,和抗人球蛋白中反应,1+,2+,抗,D,来测定。,5.7,应实施日常质控试验统计，包含试验反应性，商业起源试剂批号，试验日期和试验者署名。,免疫血液学实验的质量控制,第9页,6.,建立对新试剂进行检测程序，新试剂应在常规工作中试用一周，或最少做五十份标本，包含,2,3,份,ABO,亚型和,2,3,份弱,D,抗原。,7.,完成检测后血清或血浆标本，应在,2,8,条件下保留,2,周。,免疫血液学实验的质量控制,第10页,练习,写一份购置,ABO,血型试剂和红细胞试剂,步骤说明，并设计试剂认证策略,免疫血液学实验的质量控制,第11页,试剂认证标准,注意：,试剂必须含有：,特异性,可接收亲和力和效价,无污染,微生物检测为阴性,不引发溶血,标准标识识别颜色,尽可能是单克隆,免疫血液学实验的质量控制,第12页,试剂必须标有：,特异性,批号,生产日期,使用期,生产商厂,保留条件,免疫血液学实验的质量控制,第13页,试剂说明书中必须附有其它信息：,使用方法,克隆名称,/,编号,使用限制条件,储存标准,假如需要还能够有以下内容：,CE/FDA,证书或相关证书,免疫血液学实验的质量控制,第14页,说明书也要有实际利用时考虑事项，如：,体积,一滴体积,瓶子质地（玻璃,/,塑料）,供给和输送,假如购置试剂，需要给出派送各个细节要求。相同批号试剂最少能确保用到一年。,免疫血液学实验的质量控制,第15页,二、免疫血液学试验质量控制,1,、免疫血液学试验影响原因,1.1,设备,包含离心机、水浴箱、显微镜、各种冷冻冷藏设备及其它专用设备。,免疫血液学实验的质量控制,第16页,离心机,，,应使用血库专用离心机。,要注意是离心力离心转速，离心力还与转子半径相关，标准离心力,9001000g,。不一样试验要求离心力是不一样,，,离心力过高，易形成亚型判断失误或假阳性,离心力,/,离心时间也影响试验结果：,定型、各类判读结果试验离心,15,秒（,1000g or 3400rpm,）；,各类洗涤细胞试验离心,60,秒。,离心机每六个月应校正一次，以确保其准确性。,水浴箱,使用关键是控制其温度，有时其自带温度计不准确，要另用温度计测试水温。,冷藏设备,要注意温度和电源，要定时统计温度，确保温度在正常允许范围。,免疫血液学实验的质量控制,第17页,1.2,试剂,常见,试剂有：,试剂抗血清抗,-A,抗,-B,抗,-AB,抗,-D,；,其它血型试剂；抗人球蛋白血清。,试剂红细胞：,A,、,B,细胞；筛选细胞,(O,1,O,2,),，抗体筛选谱细胞，,Coombs,质控细胞,(IgG-,致敏细胞,),。,反应增效剂：,Liss,LIM,等。,免疫血液学实验的质量控制,第18页,严格试剂管理程序，包含：,1,、试剂生产商和供给商资质，生产技术要求。,2,、试剂确实认程序，每批试剂使用前进行确认。,3,、试剂包装和运输。,4,、试剂库存管理，包含试剂贮存条件和库存量，在使用期内使用。,免疫血液学实验的质量控制,第19页,ABO,和,Rh(D),抗血清最低标准,(,卫生部）,抗血清 试验细胞 效价*亲和力,(sec),Anti-A A1 128 15,A2 64 30,A2B 64 45,Anti-B B 128 15,Anti-D R1r,（,DdCcee)16 60,*,无稀释血清与,3,对应红细胞抗原在盐水试管法,3,至,4,免疫血液学实验的质量控制,第20页,用于,ABO,反定型试剂红细胞,A,细胞-与抗,A，,抗,A1,反应4，与抗,B,无反应,B,细胞-与抗,B,反应4，与抗,A，,抗,A1,无反应,A,&,B,细胞,尽可能不表示,M.Lewis，P1,抗原,免疫血液学实验的质量控制,第21页,1,3,试验方法,常见免疫血液学试验是红细胞凝集试验，,包含直接凝集试验和间接凝集试验。,应用于血型检测和抗体筛选、判定、交叉配血。不一样检测项目应选择适当试验方法。,应制订标准操作规程并严格执行操作规程。,免疫血液学实验的质量控制,第22页,1,4,试验统计,试验统计是免疫血液学检测主要过程，应实时统计，不可凭想象过后补统计。,免疫血液学实验的质量控制,第23页,2,、免疫血液学试验质量控制内容,任何试验必须设置对照：,包含阴、阳性对照。,用已知标准红细胞或标准抗血清检测未知血清或红细胞。,只有当对照试验结果正确时，才能够判断待检测结果。,免疫血液学实验的质量控制,第24页,（,1,）、血型检测,ABO,血型定型：,要同时进行正反定型，以相互验证。,正反定型不一致时，不能判断结果，,要重复试验，以查明原因。,免疫血液学实验的质量控制,第25页,处理,:,不一样批号试剂、不一样技术人员分别检测，,血型不一致一定要在输血前处理。,*正反定型时分别用各型标准血清,标准红细胞对照比较,*检测分泌液,(,如唾液,),中,ABH,血型物质,*用单克隆抗,-A,抗,-B,检测,McAb:,特异性强；效价高；亲和力强，,反应速度快；易于标准化；,无交叉反应；成本低，可大量生产。,*,PCR,检测,*家系调查,免疫血液学实验的质量控制,第26页,血型定型差错原因有技术性，,也有血型系统本身特征造成。,技术性错误原因：,1.,血液标本弄错，张冠李戴,(,无样本送检与验收,SOP),免疫血液学实验的质量控制,第27页,例：,患者女，李,芝，,39,岁，农民，因子宫肌瘤行子宫次全切除术。术前定血型为,A,型，,Hb110g/L,。术中失血约,400mL,，手术结束时输,A,型新鲜全血,400mL,。输完血后，回病房约,10,分钟，患者寒战、腰痛、发烧,39,，,1.5,小时后排出酱油色尿，手术切口渗血不止，即按急性溶血反应治疗，再次核定血型为,B,型。,2,天后出现急性肾功效衰竭。,3,天后，死于转院途中。,问题：,1.,该患者是什么输血不良反应？,2.,本例应吸收什么教训？,免疫血液学实验的质量控制,第28页,调查发觉,血库人员误将,39,岁看成,39,床，错用,39,床血标本测定血型并作配血试验。,39,床血型为,A,型，女，李,兰。实际上，患者为,28,床，血型为,B,型。,免疫血液学实验的质量控制,第29页,病例,互不相识一女和两男因车祸而被同时送至某医院急诊室。女伤员,(,李某,),清醒，右腿部创伤，伤口有少许出血；两位男伤员均昏迷，初步检验发觉男伤员,-I,下腹部有严重创伤和出血，血压低，双腿骨折；男伤员,-II,头、腹部多处外伤，并大量出血，深度低血压。马上给两位男伤员输注大量晶体和胶体溶液，但低血压未能纠正，未能复苏。急诊室医师在对伤员进行急诊处理同时，将,3,位伤员血标本送血库作输血前检验，分别标识为“李某”，“男伤,-I”,，和“男伤,-II“”,，申请单上要求马上检验血型，对两位重症男伤员急诊配血，输血抢救。血库立刻按要求作输血前相关检验，结果如表,免疫血液学实验的质量控制,第30页,输血前血清学检验,抗,-A,抗,-B,抗,-D A,细胞,B,细胞,Rh(D),血型,男伤,-I 4+0 0 0 4+,阴性,A,男伤,-II 0 0 3+4+4+,阳性,0,李某,0 0 3+4+4+0,免疫血液学实验的质量控制,第31页,依据相关检验及交叉配血试验结果，,血库发出,3U A,型,Rh,阴性红细胞给“男伤,-I”,输注；,3U O,型,Rh,阳性红细胞给“男伤,-2”,输注。,“男伤,-I”,创伤最重，在送到手术室时，护士发觉他导尿管中有“红色尿”流出，将此现象统计后口头通知手术医师，医师认为可能是肾脏和泌尿道创伤造成“红色尿”而未重视。术中，医师注意到伤口处展现微血管大量出血，当即给以补液、继续输血和使用升压药，但病人血压依然过低，平均动脉压,(MAP),为,8kPa,，体循环外周血管阻力（,SVR,）为,410,-3,N/cm,3,，心博出量为,9.8L/min,。与此同时，患者体温升高，血压继续下降，经输液、输血和加用升压药以及开胸、心脏按压后，无改进，抢救无效死亡。急诊室和手术室先后取“男伤,-I”,尿液和血样送检。,免疫血液学实验的质量控制,第32页,次日晨，“男伤,-2”,身份查明，医师要求继续为其输血，血库人员对新抽血样再作检验，确认“男伤,-2”,为,A,型，,Rh,阳性，且在用抗,-D,作,Rh,定型时，发觉有混合外观凝集现象，与上次检验结果有差异。,免疫血液学实验的质量控制,第33页,再次血清学检验,抗,-A,抗,-B,抗,-D A,细胞,B,细胞,Rh(D),血型,男伤,-I 0 0 3+4+4+,阳性,0,男伤,-II 4+0 0 0 4+,阴性,A,免疫血液学实验的质量控制,第34页,是什么差错,?,怎样预防这类差错？,对血样标识和处理,:,操作规程及查对制度,对包括输血工作全部些人员,:,完善培训和再教育体系,免疫血液学实验的质量控制,第35页,2.,红细胞悬浮液过浓或过淡,(,未按试验操作,S0P,进行,),3.,人为标识、书写或统计错误,（无血型判定试验复核体系）,病例：,7,广州市某医院：,病人红细胞 病人血清 结果,标准,A,血清 有反应 无反应,A,型,标准,B,血清 无反应 无反应,免疫血液学实验的质量控制,第36页,4.,溶血现象和原因不能正确判断（未进行严格岗位技能培训）,5.,未加入试剂或加错试剂（未按试验操作,S0P,进行）,6.,未按照说明书操作（未按试验操作,S0P,进行）,7.,离心机校准不良或不正确使用,.,（仪器设置未过行核正与定时检验）,8.,试剂受到污染或过期（缺乏试剂认证与日常室内质控）,9.,反应温度不正确（员工未进行严格岗位技能培训）,IgM 4C IgG 37C,抗,A,、抗,B,在,37C,条件下反应活性是,4C,1/3,免疫血液学实验的质量控制,第37页,非技术性错误（血型系统特征或异常病理状态）,减弱或缺乏抗原反应；,A,或,B,亚型,；,疾病状态；过量可溶性血型物质；,未知抗原；,取得性,A,或,B,抗原,免疫血液学实验的质量控制,第38页,病例,ABO,血型正、反向定型不吻合病例,（一）病例介绍,陈,，男，,66,岁，因患结肠癌住院作切除手术。病人无输血史，术前备血作血型判定和抗体筛选检验时，发觉其,ABO,血型正、反向定型不吻合，难以确定血型，结果见表,1,、,2,。改用其它多份不一样批号抗,-A,、抗,-B,定型血清和,A,及,B,试剂细胞重作检验，取得一样结果。,免疫血液学实验的质量控制,第39页,表,1,陈,血型正、反定型,红细胞正反定型,血清反定型,抗,-A,抗,-B,抗,-A,，,B,抗,-D,A,1C,B,C,4+,2+,4+,3+,0,3+,免疫血液学实验的质量控制,第40页,细胞,编号,Rh-hr,Kidd,Lewis,MNS,P,血清反应,D C E c e,Jk,a,Jk,b,Le,a,Le,b,S s M N,P,1,室温,IS AHG,O1,+o+,+,o +,+,+,o o,O2,o+o+o,O +,o +,+o,+,o o,本身,o o,室温,IS,：为室温中细胞与血清反应后马上离心结果；,AHG,为球蛋白试验结果,表,2,陈,血清与抗体筛选细胞及供体细胞反应结果,免疫血液学实验的质量控制,第41页,ABO,血型正、反向定型不吻合，,问题出在红细胞正向定型还是反向定型,?,免疫血液学实验的质量控制,第42页,分 析,病人陈,ABO,正、反向定型不吻合，可能是因为红细胞正向定型有问题。由表,1,、,2,结果可见，该病人红细胞与抗,A,有正常反应,(4+),，他血清仅与,B,试剂细胞反应，没有其它意外抗体被检测到，这表明病人红细胞上确实存在,A,抗原，血清中确有抗,B,。然而，病人红细胞与抗,B,反应结果较预期要弱,(2+),，从而推测病人红细胞上可能存在弱,B,变异型，但不可能是,B,亚型，因为其血清中确有抗,B,，而病人本身对照作抗球蛋白试验结果阴性。,免疫血液学实验的质量控制,第43页,依据病人入院诊疗和血清学检验结果，病人,正、反向定型不吻合最可能原因是什么,?,免疫血液学实验的质量控制,第44页,分 析,本病例正、反向定型不吻合原因，可能是病人取得了一个,“类,B”,抗原,。在一些微生物酶作用下，,A,抗原末端,N,乙酰基半乳糖胺乙酰基被切去，成为半乳糖，形成“类,B”,抗原。出现这类异常情况病人，大多数有消化道疾病或者是结肠癌、直肠癌或革兰氏阴性菌感染肠梗阻等病症。,免疫血液学实验的质量控制,第45页,对这类病例应怎样确认其,ABO,血型,免疫血液学实验的质量控制,第46页,分 析,两种快速检验方法能帮助判定,A,型红细胞是否携带“取得性,B,结构”：,用单克隆抗,B,血清检测病人红细胞，大多数不与“取得性,B,结构”反应；,将病人红细胞酸化至,pH6.0,，酸化后，抗,B,不与“取得性,B,结构”受体反应。,免疫血液学实验的质量控制,第47页,该类不正常情况是短暂性还是永久性,?,依据“取得性,B,结构”形成机理，一旦病人疾病治愈，该类异常情况即消失。,免疫血液学实验的质量控制,第48页,改变抗原；,T,、,Tn,活化及,Cad,多凝集；,低频抗原抗体反应；减弱或缺乏抗体反应；,年纪（老年或婴幼儿）；丙种球蛋白过低血症,丙种球蛋白缺乏血症；嵌合现象；,未知抗体反应；缗钱状形成；,冷型本身抗体；未知同种抗体等。,对非技术性错误，一定要查明原因，再作判断。,免疫血液学实验的质量控制,第49页,（,2,）抗体筛选与判定,要确定筛选与判定红细胞抗原性。,抗体筛选细胞,要,2-3 份,单人份,O,红细胞,，,通常是,R1R1&R2R2,细胞,，,红细胞应明确表示常见抗原:,D,C,c,E,e,K,k,Fya,Fyb,Jka,Jkb,S,s,M,N,Mia,P1,Lea,Leb,Dia，,而且尽可能是纯合子。,抗体判定细胞,要多,于8份,O,红细胞,，,对常规抗体和混合抗体必须有明确反应格局。,免疫血液学实验的质量控制,第50页,（,3,）交叉配血,注意血液标本身份；,试管正确标识；,反应温度、时间、离心力、凝集结果判断等。,反应温度：,IgM 4C IgG 37C,抗,A,、抗,B,在,37C,条件下反应活性是,4C,1/3,要同时应用生理盐水介质和可检测,IgG,抗体介质（抗球蛋白试剂试验、蛋白酶试验或凝集胺试验）进行交叉配血。,免疫血液学实验的质量控制,第51页,IgM,抗体凝集红细胞示意图,IgM,抗体在盐水介质中产生凝集,免疫血液学实验的质量控制,第52页,免疫血液学实验的质量控制,第53页,IgG,凝集红细胞示意图,IgG,抗体在盐水介质中普通不产生凝集,免疫血液学实验的质量控制,第54页,红细胞间距离缩短，,IgG,产生凝集,酶处理、凝聚胺,免疫血液学实验的质量控制,第55页,免疫血液学实验的质量控制,第56页,抗球蛋白试验,抗球蛋白,免疫血液学实验的质量控制,第57页,谢 谢,!,免疫血液学实验的质量控制,第58页,