荧光免疫层析技术原理进展宣讲专家讲座.pptx

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,荧光免疫层析技术原理与进展,荧光免疫层析技术原理进展宣讲专家讲座,第1页,荧光免疫层析技术基本原理,层析法,(chromatography),原理是利用混合物中各组分物理性质之差,(,如吸附力、分子形状和大小、分子极性、分子亲和力、分配系数等,),而建立来一个分离技术。,层析系统是由固定相,(stationary phase),和流动,(Mobile Phase),相组成。,荧光免疫层析技术原理进展宣讲专家讲座,第2页,固定相是固体物质或固定于固体物质上成份。,流动相是能够流动物质，如水或各种溶剂。,层析过程：当待分离混合物随流动相经过固定相时，因为混合物各组分理化性质差异，与固定相相互作用弱组分随流动相移动时受到阻滞作用小，向前移速度快；与固定相相互作用强组分向前移动速度慢。从而实现混合物中各组分分离。,荧光免疫层析技术原理进展宣讲专家讲座,第3页,免疫层析法,免疫层析技术是建立在层析技术和抗原一抗体特异性免疫反应基础上一项新兴免疫检测技术。,荧光免疫层析技术原理进展宣讲专家讲座,第4页,免疫层析技术以固定有检测线和控制线条状纤维层析材料为固定相，测试液为流动相，经过毛细作用使待测物在层析条上移动。,待测物在,T,线处发生特异性免疫反应。,游离物在,C,线处发生免疫反应。,待测物,层析方向,免疫反应,T,C,免疫层析技术基本原理示意图,荧光免疫层析技术原理进展宣讲专家讲座,第5页,荧光,（,fluorescence,）,荧光物质吸收激发光能量后，电子从基态跃迁到激发态，当其回复至基态时，以发射光形式释放出能量，称为荧光。,发射光谱和激发光谱,发射光谱是指固定激发波长，在不一样波长下统计样品发射荧光强度。,激发光谱是指固定检测发射波长，用不一样波长激发光激发样品统计对应荧光发射强度。,荧光免疫层析技术原理进展宣讲专家讲座,第6页,荧光效率,定义,:,荧光物质分子将光能转变成荧光百分率,计算公式,:,荧光效率,=,荧光寿命,定义,:,荧光物质被激发后所产生荧光衰减到一定程度时所用时间。,各种荧光物质荧光寿命不一样。,荧光免疫层析技术原理进展宣讲专家讲座,第7页,荧光淬灭,定义,:,荧光物质在一些理化原因作用下，发射荧光减弱甚至消退称为荧光淬灭。,引发荧光淬灭原因：有如紫外线照射、高温,、,一些硝基化合物、重氮化合物等。,荧光免疫层析技术原理进展宣讲专家讲座,第8页,免疫层析技术以固定有检测线和控制线条状纤维层析材料为固定相，测试液为流动相，经过毛细作用使待测物在层析条上移动。,待测物在,T,线处发生特异性免疫反应。,游离物在,C,线处发生免疫反应。,待测物,层析方向,免疫反应,T,C,免疫层析技术基本原理示意图,荧光免疫层析技术原理进展宣讲专家讲座,第9页,荧光免疫层析技术原理进展宣讲专家讲座,第10页,竞争法,待测物中某种抗原与,T,（检测线）线处同种抗原竞争性地与标识抗体相结合过程。,荧光免疫层析技术原理进展宣讲专家讲座,第11页,竞争法,含抗原A,Y1:A单抗与标识物偶联体,Y2：抗原A,Y3:羊抗鼠二抗,结合垫,免疫层析法检测实物图,荧光免疫层析技术原理进展宣讲专家讲座,第12页,夹心法,待测物中某种抗体（抗原）与T线处抗原A（抗原A）以及荧光标识抗原（抗体）特异性相结合过程，在T线处形成抗体A+抗原+抗体B形式夹心结构。,结合垫,免疫层析法检测实物图,荧光免疫层析技术原理进展宣讲专家讲座,第13页,双抗体夹心法,(k)Ab1-Ag-Ab2,(k)Ab1,(k)Ab1-Ag,Ab2,Ab3-(k)Ab1,T,C,阳性结果,T,C,都有颜色,待测液含抗原,Ag,待测液，不含抗原,Ag,(k)Ab1,(k)Ab1,(k)Ab1,Ab2,T,C,Ab3-(k)Ab1,阴性结果,T,无颜色，,C,有颜色,双抗体加心法检测原理图,K,代表某一标识物,结合垫,免疫层析法检测实物图,荧光免疫层析技术原理进展宣讲专家讲座,第14页,双抗原夹心法,双抗原夹心反应模式阳性检测（左）与阴性检测（右）,荧光免疫层析技术原理进展宣讲专家讲座,第15页,利用荧光免疫层析试纸条能够实现对待测物定性或者定量检测,.,荧光免疫层析技术原理进展宣讲专家讲座,第16页,荧光免疫层析技术原理进展宣讲专家讲座,第17页,金颗粒之间存在静电斥力使其在水中保持相对稳定状态，形成稳定水溶性胶体，即称为胶体金,胶体金,荧光免疫层析技术原理进展宣讲专家讲座,第18页,胶体金现有明亮色彩，又有高电子密度，能够吸附生物大分子，且不影响生物分子活性，故可作为生物分子标志物，用于免疫反应中抗原或抗体标识定位，定性甚至定量研究。层析试纸标识用金颗粒直径大多在,20,40 nm,，呈深红色。,荧光免疫层析技术原理进展宣讲专家讲座,第19页,胶体金标识蛋白质过程是蛋白被动吸附到金颗粒表面过程。,因为蛋白分子牢靠地结合在金颗粒表面，形成一个蛋白层，阻止了胶体金颗粒相互接触，而使胶体金处于稳定状态。,荧光免疫层析技术原理进展宣讲专家讲座,第20页,胶体金作为标志物有以下优势,:,几乎可标识全部蛋白分子，过程简单，效率高，用量少，廉价，基本不改变被标识蛋白活性。且稳定，无毒，使用方便，保质期长。,不一样直径纳米金能够用于多重标识。,结果判断只需普通光学仪器或直接肉眼观察。,荧光免疫层析技术原理进展宣讲专家讲座,第21页,胶体金作为标识物应用,荧光免疫层析技术原理进展宣讲专家讲座,第22页,试孕纸,荧光免疫层析技术原理进展宣讲专家讲座,第23页,荧光免疫层析技术原理进展宣讲专家讲座,第24页,应用（,定量,）,08,天津大学精密仪器与光电子工程学院与天津市进出口检验检疫局合作开发研发一个便携式仪器。,竞争法原理,用于农药残留定量检测,荧光免疫层析技术原理进展宣讲专家讲座,第25页,2,镧系元素,镧系元素又称为稀土金属元素，指元素周期表中原子序数,57,71,全部元素。,荧光免疫层析技术原理进展宣讲专家讲座,第26页,两种不一样镧系元素离子,(,分别作为光吸收子和发射子,),掺杂入亚微米尺寸陶瓷颗粒,(,作为主基质,),中，会组成一类能上转发光产生荧光特殊材料。,UCP(up-converting phosphor,，,UCP),颗粒。,荧光免疫层析技术原理进展宣讲专家讲座,第27页,UCP,颗粒主要含有以下三种成份,:,主基质：氧硫化物（,Y,2,O,2,S,GdO,2,S,）、氟化物,(YF,3,GdF,3,）,、,硅酸盐,(YSi,2,O,5,YSi,3,O,7,）,.,吸收子,Yb,3+,Er,3+,Sm,3+,发射子,Er,3+,Ho,3+,Tm,3+,A2,S1,S2,A1,A3,荧光免疫层析技术原理进展宣讲专家讲座,第28页,UCP,独特优势,高敏感性，有报道,UCP,灵敏度可达胶体金,100,倍。,高稳定性，,UCP,发光信号不受检测环境或样品腐蚀或标志物本身衰变等影响，可长久存放和可重复。,使用简便，安全无毒，可适合用于定量分析与多重分析，在普通试验室或野外现场都可轻松应用,.,荧光免疫层析技术原理进展宣讲专家讲座,第29页,中科院报道了一个用于免疫活性检测,UCP,试纸条读数计，采取半导体激光器作为光源，,CCD,作为光电接收器，步进电机带动控制试纸条移动装置,UCP应用举例,荧光免疫层析技术原理进展宣讲专家讲座,第30页,军事医学科学院研制出一个,UPT,十通道免疫层析试纸盘，同时检测各种抗体以确证是否感染鼠疫菌,荧光免疫层析技术原理进展宣讲专家讲座,第31页,霍乱弧菌,霍乱,烈性肠道传染病,甲胎蛋白,(AFP,）,-,肝癌特异性指标。,荧光免疫层析技术原理进展宣讲专家讲座,第32页,3,量子点,量子点,(quantum dots,，,QDs),，主要指主族,(,如,CdSe),，,(,如,InP,、,InAs,、,GaSe),，副族化合物以及,Si,等元素组成纳米颗粒,荧光免疫层析技术原理进展宣讲专家讲座,第33页,QDs,有可准确调谐发射波长，经过调整粒子尺寸可得到不一样发射光谱，即可使用大小不一样同种,QDs,颗粒实现不一样颜色标识。,荧光免疫层析技术原理进展宣讲专家讲座,第34页,较大,Stokes,位移和狭窄对称荧光谱峰。,使得用同一激发光源可同时激发不一样大小量子点，产生不一样发射光谱，使同时检测多样本成为可能。,QDs,荧光性质稳定，可长久保留，经受重复屡次激发。,荧光免疫层析技术原理进展宣讲专家讲座,第35页,生物相容性好,物理结合,化学偶联,荧光免疫层析技术原理进展宣讲专家讲座,第36页,量子点是一个新荧光标识物，当前在免疫层析中得应用相对,UCP,，胶体金较少见报道。,张国华，赖卫华等，量子点标识免疫层析试纸条快速检测莱克多巴胺研究,J,，,，以,CdSe,为标识物，对莱克多巴胺,(,一个苯酚胺类,-,肾上腺素激动剂,),快速定量检测。,胡华军，付 涛等，,CdTe/ZnSe,核壳量子点免疫层析试纸条检测克伦特罗研究，,检测克伦特罗,(Clenbuterol,，,CLE),属于,-,兴奋剂类药品,又称“瘦肉精”,量子点在免疫层析中应用,荧光免疫层析技术原理进展宣讲专家讲座,第37页,4,有机纳米粒子,荧光素衍生物等荧光染料类有机纳米粒子是早期惯用于免疫层析技术中一大类标志物，如异硫,氰酸酯荧光素，标识原理基本都是利用荧光分子中异硫氰酸根为反应基团，与蛋白分子中氨基结合，实现对蛋白标识，同时以分子中荧光素为检测信号，早期应用研究较多。有机纳米粒子荧光发射依赖于粒子本身化学发光集团不含有没有机纳米粒子波长可调控尺寸效应,。,荧光免疫层析技术原理进展宣讲专家讲座,第38页,5,纳米磁性颗粒,纳米磁性颗粒,(magnetic nanoparticle,，,MNs),也被称为超顺磁颗粒，它结合了磁性粒子和纳米材料优点，含有粒径小、超顺磁性和比表面积大等特征。,荧光免疫层析技术原理进展宣讲专家讲座,第39页,经典是以磁性材料四氧化三铁,.,表面引入活性基团，经过耦联反应与酶、抗体等生物分子结合形成生物标志物,.,超顺磁性,.,荧光免疫层析技术原理进展宣讲专家讲座,第40页,6,碳纳米管,碳纳米管,(carbon nanotubes,，,CNTs),结构可看成是石墨六角形网格结构发生一定弯曲而形成空间拓扑结构。,荧光免疫层析技术原理进展宣讲专家讲座,第41页,CNTs,作为生物分子标志物原理与胶体金类似，其显著黑色在定性或半定量检测中肉眼即可见。,荧光免疫层析技术原理进展宣讲专家讲座,第42页,当前不论用何种方法制备,CNTs,，均难以去除其中混杂无定形碳、石墨碳碎片等杂质，这些杂质与,CNTs,混杂在一起，严重限制了,CNTs,研究与应用,1,.,1,王倩倩，颜红侠，李朋博，等 碳纳米管纯化、性能及应用,J,化学工业与工程，,，,27(3):259-265,荧光免疫层析技术原理进展宣讲专家讲座,第43页,谢谢！,荧光免疫层析技术原理进展宣讲专家讲座,第44页,