微生物生理生化鉴定.ppt

单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,单击此处编辑母版标题样式,单击此处编辑母版文本样式,第二级,第三级,第四级,第五级,*,微生物生理生化鉴定,目的要求,基本原理,实验器材,目的要求,了解细菌生理生化反应原理以及在细菌鉴定中的重要作用,掌握通过生理生化反应鉴别不同细菌的基本方法,基本原理,糖发酵试验：,是鉴别肠道细菌的常用生化反应。绝大多数细菌都能利用糖类作为碳源和能源，但是它们在分解糖的能力上有很大的差异，例如大肠杆菌能分解乳糖和葡萄糖产酸并产气；普通变形杆菌分解葡萄糖产酸产气，不能分解乳糖。,大肠杆菌：产酸产气,大肠杆菌分解糖类产生多种有机酸,，使培养液呈酸性；产生的甲酸在酸性条件下可进一步裂解生成,H,2,和,CO,2,发酵产酸时，溴甲酚紫指示剂由紫色,(pH6.8),变为黄色,(pH5.2),；气体的产生可由倒置的德汗氏小管中有无气泡来证明。,糖发酵试验,乳糖发酵试验,大肠杆菌：,+,变形杆菌：,IMViC,试验,IMViC,是吲哚试验（,indol test,）、甲基红试验（,methyl red test,）、伏,-,普试验（,Voges-Prokauer test,）和柠檬酸盐试验（,citrate test,）四个试验的缩写。这四个试验主要用来鉴别大肠杆菌与产气肠杆菌，而且主要是用于水的细菌学检查，因为大肠杆菌虽非致病菌，但在饮水中若大肠杆菌超过一定数量则表示受粪便污染，而产气肠杆菌则广泛存在于自然界中，因此，检查水时要将二者区分开来。,IMViC,试验,吲哚试验,：,用来检测细菌对色氨酸的利用能力。有些细菌能产生色氨酸酶，分解蛋白胨中的色氨酸产生吲哚和丙酮酸，吲哚本身无色，不能直接观察到，当加入对二甲基氨基苯甲醛试剂时，可形成红色的玫瑰吲哚。,吲哚试验,大肠杆菌：,+,产气杆菌：,阳性,阴性,IMViC,试验,甲基红试验：,用来检测细菌发酵葡萄糖的产酸能力。当细菌代谢糖大量产酸时，就会使加入培养基中的甲基红指示剂由橘黄色（,pH6.3,）变为红色（,pH4.2,），即甲基红反应阳性。,甲基红试验,大肠杆菌：,+,产气杆菌：,阳性,阴性,伏,-,普试验原理,产气杆菌：,V.P.,试验阳性,大肠杆菌：,V.P.,试验阴性,V.P,试验,大肠杆菌：,产气杆菌：,+,阴性,阳性,IMViC,试验,柠檬酸盐试验：,用来检测细菌利用柠檬酸的能力。有些细菌能分解柠檬酸形成,CO,2,，由于培养基中钠离子的存在而形成碳酸钠，使,pH,升高，当用溴麝香草酚蓝作为指示剂时，培养基颜色发生变化。溴麝香草酚蓝变色范围为，,pH6.0-7.6,呈绿色，,pH,7.6,时呈蓝色。,柠檬酸盐,试验,大肠杆菌：,产气杆菌：,+,阳性,阴性,实验器材,菌种：大肠杆菌，普通变形杆菌，产气肠杆菌斜面各,1,支,培养基：葡萄糖发酵培养基；乳糖发酵培养基（内装倒置的德汉氏小管）；蛋白胨水培养基；葡萄糖蛋白胨水培养基；柠檬酸盐斜面培养基,仪器或其他用具：培养箱，试管架，接种环,操作步骤,编号：用记号笔在各试管上分别标明培养基名称和所接种的菌名。,接种：取盛有葡萄糖发酵培养基和乳糖发酵培养基试管各,3,支，分别按编号,1,支接种大肠杆菌，另,1,支接种普通变形杆菌，第,3,支不接种，作为对照。再将大肠杆菌和产气肠杆菌分别接种于,2,支蛋白胨水培养基、,2,支葡萄糖蛋白胨水培养基和,2,支柠檬酸盐斜面培养基中。,将上述已接种的试管和对照管置,37,温室中培养,2448,小时。,观察结果。,点燃酒精灯。右手持接种环，在火焰上灼烧灭菌。,试管口靠近火焰旁，用右手的小指与掌间拔掉左手上两只试管上的棉塞，同时迅速将试管口在酒精灯上烧灼,3s,左右，使管口上可能沾染的少量杂菌得以烧死。,接种环轻轻接触菌苔，取出少许。注意接种环抽出时不要碰到管壁和管口。,迅速将接种环伸入另一试管，在培养基上轻轻划线，接种菌体于其上。划线时，要由底部起划较密的平行线，一直划到顶部，以充分利用斜面表面积，同时不要将培养基划破。,烧灼试管口，将棉塞塞上。塞棉塞时不要移动试管，以免在移动中纳入可能含菌的空气。,将接种针在火焰上烧灼灭菌后放回原处。,基本操作（斜面接种法）,结果观察,将葡萄糖蛋白胨水试管中的培养液一分为二，分别用于甲基红试验和伏,-,普试验。,甲基红试验：,沿试管壁向培养液加入甲基红试剂,4-6,滴，呈鲜红色者为甲基红试验阳性，呈橘黄色者为阴性。,伏,-,普试验：,在培养液中加入,40%KOH,溶液,10,滴，再加入等量的,5%,萘酚溶液，用力振荡，再放入,37,温箱中保温,15-30 min,如培养液呈红色为反应阳性。,结果观察,糖发酵试验,：,产酸：指示剂使培养基由紫色（,pH6.8,）转变为黄色（,pH5.2,）；产气：倒置的德汉氏小管内有气泡产生。,吲哚试验,：,在培养液中加入乙醚约,1 ml,，充分振荡，使吲哚溶于乙醚中。静置片刻，待乙醚层浮于液面后形成明显的乙醚层，再沿管壁加入吲哚试剂,8-10,滴。如有吲哚存在，则乙醚层呈现玫瑰红色，为阳性反应。,结果观察,柠檬酸盐试验：,观察培养基颜色变化，含有溴麝香草酚蓝的斜面呈蓝色者为阳性反应，呈绿色者为阴性反应。,H,2,S,试验,